牛αS1-酪蛋白5＇调控序列驱动人α-LA基因与LacZ基因在牛乳腺上皮细胞中的表达

将牛αS1-酪蛋白5＇调控序列约1．2kb的片段,连接到含SV40启动子调控下β-半乳糖苷酶基因（LacZ）的PSV载体上,做为启动子,在其后连接0．76kb的人α-乳白蛋白基因（α-LA）,构建真核表达载体αS1-LA-psv．采用组织块接种法,培养奶牛乳腺上皮细胞,经传代纯化后,对细胞接种存活率、群体倍增时间、生长曲线、形态学等生物学性状进行检测,用免疫荧光细胞染色法对培养的奶牛乳腺上皮细胞进行角蛋白18鉴定,结果表明,成功建立奶牛乳腺上皮细胞系,细胞传至20代以上时仍保持旺盛的增殖活力．将构建的真核表达载体αS1-LA-psv转染奶牛乳腺上皮细胞,培养24～120h均检测到了β-半乳糖苷酶的表达;培养72h检测到细胞中人α-乳白蛋白的表达,表达量约为0．64g／L．实验结果表明,建立的奶牛乳腺上皮细胞系具有外源基因表达活性,得到的牛αS1-酪蛋白5＇调控序列能作为启动子指导外源基因的表达,构建的真核表达载体能在体外培养的牛乳腺上皮细胞中同时表达人α-乳白蛋白和β-半乳糖苷酶．     

外源DNA在动物体内的吸收代谢

综述了外源DNA在动物体内组织和细胞的代谢命运。外源DNA经核酸酶不完全降解后可以通过胃肠道被哺乳动物吸收,外源DNA片段能够被哺乳动物细胞吸收并整合到宿主细胞基因组中。     

针对核因子-kB P65基因的短发夹干扰RNA逆转录病毒载体构建与鉴定

目的:构建针对人核因子kB亚基P65基因mRNA的短发夹干扰RNA(shRNA)逆转录病毒表达载体,并探讨小干扰RNA(siRNA)靶向抑制NF-kB P65基因表达的作用.方法:根据shRNA设计原则,在人NF-kB P65全长序列中选取合19个核苷酸靶序列,设计形成siRNA的DNA模板并克隆到shRNA表达载体pSUPER.retro.neo中,构建针对NF-kB P65基因的shRNA表达载体.经293A细胞包装,并感染NIH3T3细胞进行病毒滴度测定后,感染THP-1细胞.分别采用RT-PCR和Western blot从mRNA和蛋白水平检测干扰效果.结果:限制性酶切和基因测序证实针对人NF-kB P65亚基的shRNA表达逆转录病毒载体成功构建;其感染THP-1细胞后,NF-kB P65的mRNA和蛋白表达明显抑制.结论:成功构建了NF-kB P65 shRNA逆转录病毒表达载体,该载体能高效感染THP-1并明显抑制NF-kB P65的表达.     

野外条件下球虫感染对根田鼠免疫功能的影响

动物的免疫功能是影响动物适合度的重要因素之一。本文以根田鼠（Microtus oeconomus）为研究对象,在野外围栏条件下,通过球虫感染和混合驱虫药处理,测定根田鼠的植物血凝素反应（Phytohemagglutinin,PHA）、血清抗匙孔血蓝蛋白（Keyhole limpet haemoeyanin,KLH）的IgG 水平和血象参数,探讨寄生物感染对免疫功能的影响。结果表明,根田鼠随球虫感染率和感染强度的增加,对PHA的反应峰值降低、血清抗KLH的IgG水平、白细胞总数、淋巴细胞的百分比及血浆蛋白含量明显下降、嗜碱性粒细胞的百分比增加,嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞和单核细胞的百分比未检出显著变化。由此说明,球虫感染降低了根田鼠的细胞免疫和体液免疫功能。     

单克隆来源的小鼠胎肝HPP-CFC肝上皮分化潜能的研究

为研究胎肝中造血和肝上皮发育的关系,建立了小鼠胎肝高增殖潜能集落形成细胞（HPP-CFC）培养体系,并进行了单克隆培养以及诱导分化实验.在造血和肝诱导因子的共同作用下,对单克隆来源的HPP集落细胞向造血和肝上皮细胞进行诱导分化,采用透射电镜(TEM)、巢式RT-PCR、细胞免疫荧光检测,从细胞形态、超微结构、上皮细胞分化标志等方面对分化后的细胞进行检测.检测结果显示诱导后的部分细胞具有肝细胞特异性的超微结构并不同程度的表达白蛋白（ALB）、甲胎蛋白（AFP）、细胞角蛋白（CK8,CK18）等肝上皮分化标志,同时还表达间质标志α-SMA和血管内皮细胞标志Flk-1.免疫磁珠分选表明：胎肝来源的HPP-CFC主要来自于CD45⁺细胞,CD45^-细胞不具有形成造血克隆的能力.在肝上皮细胞分化潜能上,流式分选获得的CD49f⁺/Sca-1⁺细胞与未分选细胞无明显差异.该模型的克隆源性通过细胞混合实验进行证明.研究结果表明,改进的胎肝来源的HPP-CFC可能代表了一个新的造血向肝上皮细胞分化的单克隆模型,为研究胎肝中造血和非造血细胞的发育关系提供了一个新的切入点.     

E.coli HB101(pBV-IL-6)的流加分批培养及其产物纯化

E.coli HB101(pBV-IL-6)工程菌株的表达产物为N端缺失25个氨基酸残基的IL-6衍生物。通过摇瓶试验选定了培养基配方及pH值的控制范围,在5L发酵罐的半连续培养中确定了培养和诱导时间。在此基础上放大到30L发酵罐进行培养,结果表明,菌密度达到5.15g/L(干重),rIL-6衍生物占菌体总蛋白的34.8％。表达产物经过纯化和复性,纯度达95％以上(SDS-PAGE分析),采用依赖IL-6的小鼠杂交瘤细胞株7TD-1和~3H-TdR掺入法测定生物活性,rIL-6衍生物比活性为7.71×10~6U/mg。     

斜纹夜蛾多角体病毒包埋型病毒受体的鉴定

蔗糖密度梯度离心法提纯斜纹夜蛾核多角体病毒(Spodoptera litura multinucleocapsid nucleopolyhdrovirus,SpltMNPV)包埋型病毒粒子(polyhedra-denved virus,PDV),以此病毒粒子作抗原,免疫家兔获得抗血清;用SDS裂解缓冲液提取斜纹夜蛾幼虫中肠组织细胞总蛋白.采用病毒铺覆蛋白印迹技术(VOPBA),利用抗PVD抗血清对病毒受体进行检测,结果表明斜纹夜蛾中肠细胞总蛋白中40kD、73kD、85kD的三种蛋白能够结合PDV.     

外源性皮质酮对雄性根田鼠交配行为的作用

本文研究了皮质酮对雄性根田鼠交配行为的作用。实验个体分别注射0.10 ug/ g体重、0. 60 ug / g体重和1.00 ug/ g体重剂量的皮质酮,1 h后测定每只雄性根田鼠的交配行为。结果显示,3 个处理组动物具有射精能力的个体比率及其爬跨、抽动和射精潜伏期与对照组动物相比均无显著差异,爬跨和抽动频次也无显著变化。不同处理组个体的血浆睾酮含量无显著差异。因此,皮质酮没有影响雄性根田鼠的交配行为和性激素的分泌。该结果提示,哺乳动物在急性应激条件下所分泌的皮质酮可能不参与对性行为的调控。     

植物瞬时表达技术的主要方法与应用进展

瞬时表达技术是一种获得目的基短暂的高水平表达的技术.与稳定表达相比,瞬时表达所需时间短,但未将外基整合到宿主植物染色体中,不能稳定遗传给下一代.我们简要综述了植物瞬时表达技术的各种方法,介绍了各方法的理、技术流程、影响素及其应用.关其应用,主要分析了生物制剂的合成、转录元件和转录子的克隆与分析、基沉默、亚细胞定位、蛋白互作分析、抑制子功能鉴定、选择性剪接调控、植物品种的改良和选育等方面.     

10株乳酸菌黏附小鼠派伊尔结及免疫调节作用研究

目的探索乳酸菌黏附派伊尔结效率与其免疫调节作用的关系。方法利用荧光定量分析法测定10株乳酸菌黏附派伊尔结的能力,利用乳酸菌与派伊尔结组织块共培养测定乳酸菌调节派伊尔结细胞因子释放活性。选择诱导细胞因子谱相似、黏附派伊尔结性质不同的菌株进行动物实验,测定其对卵清蛋白（OVA）致敏小鼠粪便中分泌型免疫球蛋白A（sIgA）以及腹腔巨噬细胞吞噬活性的调节作用。结果10株乳酸菌黏附派伊尔结的性质具有菌株依赖性,其中L.rhamnosusGG、L.acidophilusFn037、L.plantarumFn008和L.caseiFn012黏附性依次降低,但诱导派伊尔结TNF-α、IL-10和IL-12释放的性质相同。这4株菌增强OVA致敏小鼠腹腔巨噬细胞吞噬活性和升高粪便sIgA的能力与其黏附性相关。结论乳酸菌黏附派伊尔结是决定其免疫调节活性的主要因素之一。