HIV感染导致MT4细胞蛋白表达差异的初步研究

为了比较MT4细胞株感染H1V-1的IIIB株前后的蛋白质表达差异,我们分别提取MT4细胞及感染了人类免疫缺陷病毒(HrV)的MT4细胞的总蛋白质,通过双向电泳分离,使用Image Master 2D Elite 3．10图像分析软件分析获得的凝胶图谱,寻找差异点,使用质谱仪鉴定获得的差异点蛋白质。结果表明感染HIV和未感染HIV的MT4细胞有40个蛋白质点差异,HIV感染后减少的蛋白质点有12个,增多的有28个,通过质谱分析,29个蛋白质得到鉴定。其中HIV感染后下调的蛋白质有能量代谢相关蛋白、肌动蛋白相关蛋白及假想蛋白等;上调的蛋白有肌动蛋白、酶类蛋白、免疫蛋白及假想蛋白等。通过研究我们可以看出宿主细胞感染HIV病毒后有多个蛋白发生变化,可能和HIV与宿主细胞的相互作用有关。为了研究HIV感染的机制必须去除高丰度蛋白,针对特定功能的蛋白质进行具体研究。     

重组N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶包涵体的稀释复性

N-乙酰鸟氨酸脱乙酰基酶（N-Acetylornithine deacetylase,NAO）是一种重要的用于手性拆分的酶,具有广泛的底物选择性,常用于多种活性氨基酸的酶法拆分。采用稀释复性法研究了重组NAO包涵体的复性条件,如蛋白浓度、复性液中尿素浓度、pH、GSH浓度及c（GSH）/c（GSSG）比例,同时对稀释操作方式进行了考察,得到了较为适宜的复性条件。结果表明,尿素能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,随着蛋白质浓度的增加,复性效果变差。当复性缓冲液中尿素浓度为2 mol/L,GSH浓度为5 mmol/L,c（GSH）/c（GSSG）为2.5,pH为8.5,在4℃下进行分批稀释复性操作,复性后重组NAO的活性为1.077 U/mL,比酶活达到14.943 U/mg,与可溶性表达的NAO比较,复性率达到21.48%。     

单克隆抗体在植物病原细菌抗原分析中的应用

血清学技术与各种生物学、生理、生化学方法相比,因其具有迅速性及特异性的高客观性优点,在植物病原细菌等病原体的诊断、检出及分类,鉴定等研究领域中被广泛应用。不过,迄今试验用的抗血清,大多是以细菌作为免疫原注射于兔子等制成的多克隆抗体。与植物病毒相比,细菌具有非常复杂的抗原构造,对应各自抗原决定基(epitopes)的B细胞经增殖产生抗体,且一个抗原决定基可产生类或亚类不同的抗体。因此,用这样的不均匀抗血清进行细菌的分类、鉴定及抗原分析和抗原分子的机能分析非常困难,甚至是不可能的,而且,因所用目的外细菌具有相同的抗原决定基,使病害的诊断也会有错误的危险。     

体外诱导小鼠脂肪来源干细胞向内皮细胞分化的实验研究

目的：探索体外小鼠脂肪来源干细胞（Adipose—derivedstemcells,ASCs）诱导分化为内皮细胞（endothelialprogenitorcells,EPCs）的可行性。方法：利用I型胶原酶消化法和传代培养纯化法从小鼠脂肪组织中分离、培养及扩增ASCs,通过流式细胞仪检测ASCs特异性表面抗原CD29和CD44、CD105的表达;取第2代ASCs进行内皮诱导：即BD基质胶包被＋内皮细胞生长诱导培养基（M199＋10％血清＋10ng／mL血管内皮细胞生长因子VEGF＋10ng／ml碱性生长因子bFGF）。诱导两周左右,倒置显微镜观察诱导前后细胞的一般形态学特征;同时通过成血管实验观察成管腔能力;通过免疫荧光鉴定CD31表型分子的表达。结果：成功培养小鼠ASCs;CD29、CD44、CD90、呈阳性表达,而CD31、CD34、CD45呈阴性表达;诱导后的细胞形态呈三角形或多边形;HE染色观察可见明显的管腔样结构;免疫荧光法CD31表达阳性;MTT法成功记录EPCs增殖生长曲线。结论：成功的诱导小鼠脂肪来源干细胞分化为血管内皮细胞,为后续体内移植实验提供理论基础,同时也为临床受损组织或器官的重建再生提供实验基础。     

整合型碱性蛋白酶基因工程菌中抗性基因的敲除*

要：利用大肠杆菌载体pET—韶a和穿梭载体PHY3肋队构建了敲除载体p10c,通过DP4A变性技术和同源重组技术成功地敲除了整合型碱性蛋白酶基因工程茵BP旧1中的卡那霉素抗性基因(M),得到11株敲除卡那霉素抗性基因的阳性克隆,并使产酶水平保持稳定。该方法的建立为基因敲除技术在工业微生物研究中应用提供了经验,并为微生物来源的转基因产品安全性的研究提供了模型。     

酿酒酵母胞浆3-磷酸甘油脱氢酶的两个同工酶

酿酒酵母细胞中的NAD+ 依赖性胞浆 3 磷酸甘油脱氢酶是甘油代谢途径中的关键酶之一 ,催化磷酸二羟丙酮生成 3 磷酸甘油 ,它有两个同工酶。深入研究它们的结构 ,编码基因的表达调控以及它们在细胞中的作用的异同 ,有助于进一步了解酵母细胞对高渗和缺氧环境做出应答的机理。本文对酿酒酵母胞浆 3 磷酸甘油脱氢酶的两个同工酶的上述 3方面进行了综述。     

短尾越橘化学成分研究

短尾越橘酒精提取物用乙酸乙酯萃取后依次经氯仿、丙酮、甲醇回流提取,用薄层层析,反复硅胶柱层析,从中分离并鉴定了八个化合物,并用波谱学方法进行了结构鉴定。它们分别为正二十七烷(n-heptaco-sane,Ⅰ),木栓酮(friedelin,Ⅱ),木栓醇(friedelinol,Ⅲ),羽扇豆醇(lupenol,Ⅳ),β-谷甾醇(β-sitosterol,Ⅴ),胡萝卜苷(dauosterol,Ⅵ),反式对羟基桂皮酸(trans-p-hydroxy cinamic acid,Ⅶ),莽草酸甲酯(methyl shiki mate,Ⅷ)。所有化合物均为首次从该植物中分离得到,化合物Ⅰ,Ⅳ,Ⅷ为首次从该属植物中得到。     

北戴河朱鹮野化种群非繁殖期日间活动时间分配和行为节律

于2019年7月-2020年1月对北戴河朱鹮野化种群非繁殖期的日间活动时间分配和行为节律进行了分析。结果表明,休息（41.8%）、觅食（39.7%）和理羽（13.3%）是北戴河朱鹮非繁殖期的主要行为。在行为节律上,有3个觅食高峰、2个休息高峰和2个理羽高峰。成鸟和幼鸟行为分配相似,但成鸟的警戒和社群等其他行为比例显著较高。与野生种群相比,北戴河野化种群的觅食时间显著较少,主要原因是野生个体需要花费较多时间搜寻食物,且飞行等活动的能耗较高。朱鹮在冬季的休息和理羽行为比例高于夏秋季,觅食行为则相反,这样可以在低温和大风天气降低能耗,是对北戴河气候环境的有效适应。为了提高朱鹮对多种气候环境的适应能力,为今后北戴河朱鹮的再引入奠定基础,我们建议在冬季要确保朱鹮有充足的适宜觅食地,同时在野化网笼中进行必要的环境丰容,如在网笼内增加常绿树种和阔叶树种,部分侧网上安装防风板,或在网笼中设置防风避寒的伞棚等设施,以供朱鹮进行选择。     

慢性前列腺炎患者前列腺液白细胞浓度与前列腺液尿酸 及锌含量的相关性研究

目的:探讨慢性前列腺炎患者前列腺液中白细胞(WBC)数量与前列腺液尿酸(UA)、锌(Zn)含量的关系。方法:选取慢性前列腺炎患者128例,健康对照组52例。分别进行EPS中白细胞(WBC)数量、尿酸(UA)和锌(Zn)含量测定。结果:慢性前列腺炎患者前列腺液UA含量显著高于健康对照组,Zn含量显著低于健康对照组,前列腺液中WBC数量与UA含量呈显著正相关,与Zn含量呈显著负相关(P<0.01)。2慢性前列腺炎患者治疗前后EPS中的UA和Zn对比有显著性差异。结论:EPS中的尿酸(U A)、锌(Zn)含量对慢性前列腺炎的诊断与评估疗效有一定价值。     

EZH2 靶向的shRNA 质粒的构建和有效靶序列的筛选*

目的:构建并筛选靶向zeste基因增强子人类同源物2(Enhancer of zeste homologue 2,EZH2)的短发卡RNA(short hairpinRNA,shRNA)的质粒表达载体。方法:设计并合成针对EZH2基因的带有小发夹结构的DNA片段并克隆至质粒pGPU6/GFP/Neo中,经酶切和测序分析后转染入胶质瘤U251细胞,分别应用实时荧光定量PCR和Western bloting在mRNA和蛋白质水平观察其对EZH2基因表达的沉默效果。结果:重组质粒构建成功,并成功转染入胶质瘤U251细胞,转染效率大约为70%。其中,以靶向hEZH2-715序列的质粒抑制效果最好,其对U251细胞EZH2 mRNA和protein抑制率分别为55%和89%。结论:成功构建了能高效抑制EZH2基因表达shRNA的重组质粒,为下一步探索EZH2在胶质瘤细胞中的生物学作用奠定了基础。