毛细管电泳在细菌分离分析中的应用*

介绍了近年来毛细管电泳技术在细菌分离分析方面的研究进展。毛细管电泳以细菌表面的特征信息为分离的基础,可以快速鉴定相应的菌株,可以对微生物进行快速定量,可以反映细菌特殊时期的生理特征,也可以研究微生物与分子之间的相互作用。同时应用该技术可分离分析自然界不能纯培养的微生物。因而毛细管电泳分离与检测细菌方法的建立及其应用在分离科学和微生物学方面都有很大的实际意义。     

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种HD-133 cry1D和cry1AbmRNA含量及稳定性研究

苏云金芽胞杆菌鲇泽亚种菌株HD\|133含有代表性的三种cry1类基因cry1Ab,cry1C和cry1D,它们的表达量却明显不同。通过Northern杂交检测了菌株HD\|133中基因cry1D和cry1Ab的mRNA含量及其稳定性。结果表明：基因cry1D mRNA的形成比基因cry1Ab的mRNA滞后3h,且基因cry1D形成mRNA的量很低,产生过程很平稳,在芽胞形成中期比cry1Ab mRNA低37倍;cry1Ab mRNA含量在芽胞形成前期高于后期,在后期仍能大量持续稳定地转录。cry1D mRNA的半衰期为18min,而cry1Ab mRNA的半衰期为14min。尽管cry1D mRNA比cry1Ab mRNA的半衰期更长,但cry1D和cry1Ab转录时间和转录量的差异是导致其表达量差异的重要原因。     

碳源对苏云金芽胞杆菌融合基因cry1D-lacZ表达的影响

本研究检测了在不同遗传背景的苏云金芽胞杆菌菌株中不同碳源对杀虫晶体蛋白cry1D-lacZ融合基因表达的影响。研究表明,cry1D-lacZ在同一菌株中的表达因碳源不同而异,在碳源相同的条件下不同菌株的表达也不相同,而衍生菌株HD-133-5的代谢途径非常特殊。琥珀酸钠作碳源时导致芽胞形成提前,cry1D-lacZ融合基因表达也随之提前。而以乙酸钠作碳源时,在不同亚种的菌株中都能高水平、持续稳定地表达。 Abstract:In order to investigate the influence of the carbon source on the expression of cry1D-lacZ in Bacillus thuringiensis with different genetic backgrounds,cry1D-lacZ was introduced into different strains and cultured in liquid medium containing different carbon sources.Analysis of activity of β-galactosidase showed that cry1D-lacZ expressed differenfly in the same host because of different carbon sources and differenly in different hosts utlizing same carbon sources,suggesting that metabolism pathway of carbon sourcein HD-133-5 was special.Sodium succinate as carbon source could lead to earlier.sporulation and earlier expression of cry1D-lacZ.When sodium acetate acted as carbonsource,cry1D-lacZ could keep high,stable expression in different hosts.These results arehelpful for future fermentation of Bacillus thuringiensis.     

诱导胚胎干细胞向角膜上皮细胞分化的实验研究

探索胚胎干细胞在表层角膜缘基质诱导下向角膜上皮细胞分化的可能性.体外培养带GFP标记的ES-D3细胞,并利用视黄酸进行预诱导,然后将预诱导后的细胞接种在表层角膜缘基质上,细胞融合形成单层后,随机分为3组进行研究:第1组传代后直接进行检测;第2组在气-液界面上培养10天,然后植入裸鼠皮下以进行体内诱导;第3组作为对照组,不给予GFP-ES-D3细胞特殊诱导条件,细胞自由分化.诱导分化的细胞植入裸鼠皮下体2周后没有畸胎瘤形成.诱导分化的细胞呈现上皮样外观,体内诱导组和体外诱导组免疫组织化学染色均检测到CK3,P63和PCNA表达阳性,电子显微镜检查可见两组细胞表面都有微绒毛和细胞间紧密连接形成.实验对照组部分细胞脱落和死亡,大部分表现神经样细胞的树突样外观,小部分未死亡的贴壁细胞呈多态性,这些结果表明胚胎干细胞在特定条件下经表层角膜基质诱导能够分化为角膜上皮细胞.胚胎干细胞诱导分化有可能为眼表重建和组织工程化角膜的构建提供上皮种子细胞.     

四联疗法和序贯疗法治疗服用非甾体类消炎药人群幽门螺杆菌感染的临 床对照研究

目的:对比四联疗法和序贯疗法对根除服用非甾体类消炎药(NSAID)人群幽门螺杆菌(Hp),改善其消化道不良症状及促进消化性溃疡愈合的临床效果。方法:对有消化不良症状的服用非甾体类消炎药物患者行胃镜检查、快速尿激酶及13C呼气试验检查,将155例幽门螺杆菌阳性合并有慢性胃炎或消化性溃疡患者作为研究对象,随机分为两组,A组采用四联疗法,B组采用序贯疗法。A组予雷贝拉唑+克拉霉素+阿莫西林+枸橼酸铋钾治疗10天;B组前5天予雷贝拉唑+阿莫西林,后5天予雷贝拉唑+克拉霉素+甲硝唑。治疗结束后,予雷贝拉唑和胃黏膜保护剂治疗8周。停药4周后,复查胃镜、13C呼气试验,观察和比较两组Hp根除率、消化不良症状缓解率及溃疡愈合率。结果:A、B两组Hp根除率分别为(ITT分析:86.7%和81.9%;PP分析:87.8%和84.3%);症状缓解率为(81.9%对79.2%);胃溃疡愈合率为(68.8%对66.7%),十二指肠球部溃疡的愈合率为(68.2%对70.0%),两组患者间Hp根除率、症状缓解率及溃疡愈合率比较均未见明显统计学差异(P>0.05)。四联疗法组和序贯疗法组不良反应的发生率分别为4.9%和4.3%。两组比较无明显差异(P>0.05)。结论:四联疗法和序贯疗法对长期服用非甾体类消炎药物人群的Hp根除疗效、消化不良症状的缓解及促进溃疡愈合的治疗作用均无明显差异。     

事业功德，老而愈明，死而益光——纪念陈华癸院士诞辰100周年

<正>陈华癸先生是我国著名的微生物学家、土壤学家和优秀的教育家,我国农业微生物学奠基人之一。他1914年1月13日生于北京,祖籍江苏昆山,14岁考入北京大学预科班,1935年毕业于北京大学生物系并留校任教。1936年赴英国伦敦大学学习,1939年获博士学位,1940年回国,在昆明西南联大等单位工作。1946年任北京大学农     

初始碳源对苏云金芽孢杆菌cry—lacZ融合基因表达的影响

分别采用携带cry1A上游区、突变或缺失上游区的重组穿棱载体pHT/pSGMU-P,电转化到苏云金芽孢杆菌不同菌株中,并经含不同初始碳源的Gtris培养基培养,检测BtI-lacZ融合基因的表达.结果表明,各种转化子的β-半乳糖苷酶活性随着培养基中初始碳源的不同而异,在以丙酮酸钠为初始碳源的培养基中,BtI-lacZ的表达量最高,以葡萄糖为初始碳源的次之,在琥珀酸钠中最低,说明cry基因的表达与初始碳源的种类和细胞的代谢有关.     

绿色荧光蛋白嵌合体小鼠的建立和鉴定

为研究嵌合体动物中供体胚胎干细胞 (ES)在宿主胚胎发育中的走向和定位 ,同时探讨绿色荧光蛋白(GFP)基因作为报告基因在转基因动物制作中的应用价值 ,本研究将pEGFP N1基因导入小鼠ES D3 细胞系 ,得到稳定表达GFP的胚胎干细胞亚系ES D3 GFP ,通过对昆明小鼠的囊胚腔注射 ,获得了 4只表达绿色荧光蛋白的嵌合体小鼠。其中 1只存活至成年 ,3只出生时死亡。荧光显像及组织PCR检测显示了绿色荧光蛋白在小鼠体内的嵌合情况。以绿色荧光为指标可实现活体水平的动态观察 ,本实验首次观察到以GFP为指标所示的机体嵌合情况与根据毛色嵌合推测的机体嵌合情况存在很大差异 ,以GFP为嵌合指标更加全面而准确 ;但不排除GFP对小鼠发育存在一定毒性的可能 ;另外 ,有结果显示供体ES细胞在宿主体内除了大片补丁状嵌合外 ,还存在细胞散在嵌合的情况 ,后者提示了在组织中利用GFP对ES细胞实施单细胞追踪和实时观察的可行性 ,为胚胎发育和疾病发生的相关研究提供了新的观察方法     

苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白 CryⅣD基因在无晶体突变株中的克隆和表达

本文用HindⅢ/BamHⅠ对含Cry Ⅳ D基因的pGEMl质粒进行双酶切,获得了含CryⅣ和20-kDa蛋白质基因的5.4kb片段,将其与穿梭质粒pⅪ61连接,转化到感受态大肠杆菌TG1细胞,对克隆的重组质粒经质粒抽提,进行斑点杂交,Southern分析加以证实后,电转化到苏云金芽胞杆菌无晶体突变株Bti.IPS. 78/11细胞中,可形成不规则的六边形晶体。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳表明,工程菌表达72-kDa杀虫晶体蛋白和20-kDa的蛋白质,对致倦库蚊有很高的毒力,其LC_(50)值为0.53ug/ml。     

重组人血管内皮抑制素注射液联合洛铂对恶性胸腔积液患者生活质量及免疫功能的影响

目的:探讨重组人血管内皮抑制素注射液联合洛铂对恶性胸腔积液患者生活质量及免疫功能的影响。方法:选择2015年3月至2017年3月期间我院收治的恶性胸腔积液患者56例为研究对象,按照不同的治疗方式分为研究组(n=28)和对照组(n=28)。对照组给予洛铂治疗,研究组给予重组人血管内皮抑制素注射液联合洛铂治疗。比较两组患者治疗前后生活质量变化、免疫功能变化、临床疗效和不良反应发生情况。结果:研究组患者生活质量改善率高于对照组(P0.05)。治疗前,两组免疫功能指标含量经统计分析差异无统计学意义(P0.05),与治疗前比较,两组治疗后4周CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+、NK含量均升高,CD8+含量降低,且研究组CD3~+、CD4~+、CD4~+/CD8~+、NK含量较对照组升高,CD8~+含量较对照组降低(P0.05)。研究组总有效率为78.57%,与对照组的46.43%比较差异有统计学意义(P0.05)。两组患者心脏反应、呕吐、恶心、血小板减少、白细胞减少、贫血、乏力发生率比较差异均无统计学意义(P0.05)。结论:重组人血管内皮抑制素注射液联合洛铂治疗恶性胸腔积液具有较好的疗效,其可以改善患者生活质量,提高免疫功能,且不会增加患者不良反应,值得临床推广。