Zwittermicin A合成基因簇中腺苷酰化功能域的预测、表达与活性验证

[目的]腺苷酰化功能域为非核糖体肽合成反应第一步底物活化的必需酶,本研究目的为验证2,3-二氨基丙酸是Zwittermicin A生物合成的直接前体物之一.[方法]本研究通过PCR的方法从苏云金芽胞杆菌菌株YBT-1520的Zwittermicin A合成基因簇中扩增得到一腺苷酰化功能域,经过双酶切和亚克隆,将此功能域克隆至超量表达载体pGEX-6p-1,将此功能域构建重组质粒pBMB1312;采用不同的IPTG浓度和温度梯度对其进行诱导,摸索了该功能域在大肠杆菌中超量表达纯化的最佳条件.[结果]得出在20℃,0.1 mmol/L IPTG,宿主菌为BL21 codon plus RP(DE3)的条件下,该功能域可以被有效纯化.同时,焦磷酸释放实验证实该功能域可以对Zwittermicin A的假想前体物2,3-二氨基丙酸进行腺苷酰化.[结论]进一步支持了2,3-二氨基丙酸是Zwittermicin A生物合成的直接前体物之一的假设.     

外源基因在苏云金杆菌染色体上的定点整合及表达

[目的]研究构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因的苏云金杆菌(Bacillus thuringiensis简称Bt)工程菌的方法.在构建Bt工程菌时,高拷贝外源质粒的转入导致Bt芽孢数量减少,芽孢形成期延滞,影响Bt菌株的杀虫活力.而且,外源质粒在Bt中的稳定性较差,外源基因容易丢失.将基因整合人染色体是一种构建遗传性状稳定、杀虫活力高的Bt工程菌的有效方法.[方法]本研究采用PCR技术,分两段扩增定位于Bt无晶体突变株XBU001染色体上的trigger factor基因片段作为同源臂,克隆入温度敏感型载体pKSV7,构建了定点整合载体pKTF12.并利用pKTF12质粒将crylAc基因定点整合入XBU001染色体上.[结果]利用载体pKTF12将crylAc定点插入triggerfactor位点,对宿主菌XBU001的正常生长没有影响.重组菌株KCTF12中的crylAc基因能够稳定遗传、表达并形成菱形晶体.与携带高拷贝外源质粒的Bt菌株HTX42相比较,KCTF12具有芽孢数量增多、芽孢形成期提前的优势.[结论]定点整合法是一种构建稳定表达外源基因、无抗性标记基因Bt工程菌的有效方法.     

抗动物病原菌芽孢杆菌的筛选、初步鉴定和抗菌活性

从鸡肠道分离、挑选的18株芽孢杆菌经培养特征、形态观察、生理生化实验,初步被鉴定为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilus)、地衣芽孢杆菌(Bacillus licheniformis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)和凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)。同时测定了它们对5种常见动物病原菌大肠杆菌(E.coli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、肠炎沙门氏菌(Salmonella typhimurium)、猪链球菌(Streptococcus suis)、奇异变形杆菌(Proteus mirabilis)的抑菌活性,其中有4株芽孢杆菌对5种病原菌都有抑制作用。还分别测定了它们产木聚糖酶(从0.895 U1到3.239 U1)和纤维素酶活性(分别为0.391 U2和0.465 U2)。结果表明,芽孢杆菌分离株BC17、BC32、BC106、BC228、BC247和BC261具有作为益生菌的开发潜力。     

乌龟的电磁学研究

根据余新何教授提出乌龟长寿与新陈代谢以及乌龟结构,成分有关的论述,对乌龟干壳与活体 进行了电磁学研究,包括化学成份;显微结构,电磁辐射,磁敏及磁化率等项目的研究。     

含质粒复制起始区ori44的苏云金芽胞杆菌解离载体的构建

将苏云金芽胞杆菌转座子Tn4430的解离酶识别位点res分别插入克隆载体pRSET B和pUC19得到质粒pBMB1201和pBMB1202。这两个质粒分别经BamHI/Hin dⅢ和EcoRI/HindⅢ双酶切回收含res位点的小DNA片段,与穿梭载体pHT3101经EcoRI/HindⅢ双酶切后加收的含大肠杆菌复制起始区、氨苄青霉素抗性基因和红霉素抗性基因的3．3kb片段连接,获得重组质粒pBMB1203。封闭pBMB1203两res位点外的BamHI和EcoRI位点后,得到解离载体pBMB1204。将来源于苏云金芽胞杆菌库斯塔克亚种YBT－1520的质粒复制起始区ori44片段插入pBMB1204的两res位点之间,得到解离穿梭载体pBMB1205。该解离载体插入壮观霉素抗性基因后电转化无晶体突变株,在辅助质粒所提供的解离酶作用下可发生解离消除抗性基因,解离频率为100％,解离后的质粒稳定性为93％。利用解离穿梭载体pBMB1205可在用抗性筛选到转化子后特定消除抗性标记基因和其它非苏云金芽胞杆菌DNA片段。     

含笑属叶片的比较解剖学研究

对中国含笑属 ( Michelia) 1 8种 (包括观光木 1 ) ) ,1变种的叶片进行了比较解剖学研究 ,结果表明 :( 1 )含笑属植物的叶片均有明显的栅栏组织和海绵组织之分 (除石碌含笑和观光木外 ) ,但二者的厚度及它们在叶肉中的所占的比例在组间、种间有一定的差别 ;( 2 )有些种类叶片的上表皮有下皮 ,有些则无 ,少数种类 (石碌含笑 )上、下表皮皆有下皮 ;( 3)表皮毛的有无及表皮毛的细胞个数有一定的种间差别 ;( 4 )叶表皮角质层的厚薄程度在种间有一定的差别 ;( 5 )油细胞在含笑属植物叶片整个叶肉中普遍存在 (除含笑只在栅栏组织中有分布 ) ,但其分布密度在种间有较大的差异。通过对含笑属植物叶片结构的比较观察 ,旨在探讨该属间的系统演化关系 ,为分组、分种提供解剖学方面的实验证据     

社群大小的年变化、气候和人类活动对神农架自然保护区川金丝猴日移动距离的影响

作者于2001年4月至2003年1月研究了社群大小的年变化、气候和人类活动对神农架自然保护区千家坪地区一群川金丝猴(Rhinopithecusroxellana)日移动距离的影响。对该群金丝猴进行了8个季节的跟踪研究,每季连续跟踪30d。用社群直线距离法确定猴群的日移动距离,同时调查社群大小,记录人为活动和气象因子。研究结果显示:(1)两年间猴群的个体数增加了14%,但其日移动距离没有明显变化,说明社群大小的年变化对日移动距离没有影响。(2)猴群在人为活动影响下的日移动距离比没有人为活动影响时长。(3)多变量回归分析显示,各个季节中,猴群的日移动距离与一天中晴和有云但无降水所占时间的比例没有相关性;与春季和冬季日降雨或雪所占时间的比例呈负相关,但与夏季和秋季的没有相关性,说明降水缩短了冬春季猴群的日移动距离,这可能与川金丝猴的繁殖有关。人为活动对猴群是不利的;冬春季的长时间降水可能是川金丝猴的灾害性天气。     

云南墨江极小种群物种铁竹的种群结构与群落特征

铁竹(Ferrocalamus strictus)分布在云南南部局部区域, 其数量少, 分布范围狭窄, 为云南省极小种群物种。对铁竹野生种群结构及其所在群落特征进行研究可以为了解其濒危机制提供科学依据, 也可为其保护提供前期研究基础。该研究通过对墨江铁竹野生资源的调查, 从物种组成、种群密度、种群存活曲线和死亡因素等方面, 分析铁竹的种群结构及其所在群落特征。结果表明: (1)墨江铁竹种群所在群落的外貌、物种组成均具有山地雨林的特征; (2)墨江铁竹种群密度为2.04株·m ^-2; 铁竹种群的存活曲线介于Deevey-I型和Deevey-II型之间; 铁竹种群的净增殖率(R₀)为1.10, 表明铁竹种群处于增长阶段; (3)导致铁竹死亡的原因有人为砍伐、自然枯立、退笋及昆虫啃食, 其中人为砍伐所占比例最大; (4)铁竹为南亚热带森林竹种, 属中型竹类, 节间长度从基部3-4节起突然伸长, 最长超过1 m, 在竹类植物中居于前列, 这与其适应热带山地雨林环境密切相关。     

苏云金芽孢杆菌酪氨酸酶基因的克隆表达及应用初探

酪氨酸酶基因编码的酪氨酸酶是生物体合成黑色素的关键酶。采用比较酪氨酸酶的同源保守结构域氨基酸序列的方法设计引物 ,从苏云金芽胞杆菌 (Bacillusthuringiensis) 4D11中通过PCR扩增得到了包含酪氨酸酶基因的DNA片段。将该片段亚克隆到载体pGEM_7zf上并转入大肠杆菌DH5α ,所得到的转化子在添加了L_酪氨酸的LB培养基中能合成可溶性的黑色素。测定该菌株黑色素的产量和在紫外光照射后的菌体活力 ,结果表明该基因产生的黑色素能在一定程度上保护菌体免受紫外辐射     

以新鲜根段进行AM真菌的分子检测及竞争性侵染研究

运用nested-PCR技术和AM真菌特异性引物,建立了用新鲜植物根段直接检测AM真菌的分子生物学方法。以真核生物通用引物LR1和NDL22对混合接种的西红柿新鲜根段进行第1次扩增,将其产物进行稀释,再分别以Glomus intraradices 和Glomus mosseae的种特异性引物8.22和5.25进行第2次扩增。在琼脂糖凝胶上观察到AM真菌种特异性条带;运用该技术检测出混合接种时同一根段内不同的AM真菌,并探讨了真菌在植物根部的竞争性侵染。用盆栽方式种植西红柿,混合接种G. intraradices 和G. mosseae,在1个月后,前者侵染占优势。