山茱英的组织培养与植株再生

目的：建立山茱萸的组织培养及植株再生体系。方法：分别以山茱萸的叶片、花柄和花托为材料,进行山茱萸不同外植体的离体培养研究,筛选最佳培养基组成。结果：适宜山茱萸叶片愈伤组织诱导的培养基组合为1／2MS,附加BA2．0mg/L、IBA0,5—1．0mg／L;适宜山茱萸花柄、花托愈伤组织诱导的培养基组合为1／2MS,附加BA1．0mg／L、2,4-D0．5mg／L;在1／2MS附加BA2．0mg／L、IBA0．05mg／L的培养基上,可诱导不定芽的产生;1／2MS附加IBA2．0mg／L的培养基有利于山茱萸试管苗生根。讨论：山茱萸的花托是进行组织培养的最适外植体,白色或翠绿色、结构致密的愈伤组织较易分化产生不定芽。     

易卷曲叶表皮制片技术（NaOCl法）的改进

在利用NaOCl法制备用于光学显微镜观察的叶表皮过程中,一些科/属植物的叶表皮在100%乙醇脱水后遇二甲苯便发生卷曲,增加了叶表皮制片的难度, 甚至无法进行。本文介绍一种简便易行的方法：在系列乙醇脱水后,加盖小块盖玻片,防止叶表皮脱水后卷曲,并使其保持平整,便于显微摄影。这种方法使得叶表皮显微制片技术更加完善。     

胚胎期下颌髁突软骨中糖胺多糖、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的表达

目的　观察不同时期胎儿髁突软骨中糖胺多糖、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白的表达。方法　应用组织化学和免疫组织化学SP法检测 32例 13周～ 33周 (A组 13～ 17周 ,B组 18～ 2 2周 ,C组 2 3～ 2 7周 ,D组 2 8～ 33周 )胎儿髁突软骨中糖胺多糖、纤维粘连蛋白和层粘连蛋白 ,并行体视学图象分析。结果　髁突软骨中AB PAS在各组的灰度及积分光密度均无显著性差异 (P >0 . 0 5 )。FN、LN阳性表达位于软骨细胞外基质 ,增殖层和成软骨细胞层呈强表达 ,尤其在两层交界处 ,而肥大软骨细胞层中明显减弱。体视学分析表明LN在A组表达最强 ,其灰度及积分光密度均值与B、D组间均有显著性差异 (P <0 . 0 5 )。〔灰度 :A组 175 . 0 18± 8. 30 1、B组 187 16 2± 13 6 44、D组 190 5 5 0± 6 46 0 ;积分光密度 :A组 2 739± 0 799,B组 2 0 11± 0 85 5 ,D组 1 5 33± 0 42 7,均存在显著性差异 (P <0 0 5 )。FN在B组表达最强 ,灰度与A、C、D三组间存在显著性差异 (P <0 0 5或P <0 0 1) ;积分光密度与A、D组间有显著性差异 (P <0 0 5 )。〔灰度 :B组 173 0 89± 8 40 7、A组 182 0 45± 10 138、C组 188 70 1± 8 0 94、D组 195 417± 4 82 7;积分光密度 :A组 1 314± 0 86 9、B组 4 332± 2 5 37、D组 2 12     

猪粪中温厌氧发酵制取沼气工艺条件的系统研究

我国农村的沼气池,绝大多数靠自然环境温度发酵,不仅产气率低(平均为0.1—0.2m~3/m~3·d),而且产气量随季节变化较大。为提高产气率,稳定气体产量,我们认为采用中温厌氧     

细菌DNA的一种大量提取方法

本文介绍了一种大量提取细菌DNA的方法。该法是用60℃裂解菌体,以氯仿-苯酚去除蛋白,用Rnase去除RNA,用1倍体积95%乙醇沉淀DNA,省略了异丙醇沉淀步骤。而且该方法操作方便,对仪器要求不高。该法改进结果是:可稳定地得到50—60%的DNA回收率。可用于革兰氏阴性和阳性细菌的DNA提取。有些菌株用Marmur法和Zaslott法提取,DNA回收率在10%以下,采用本法仍能得到50%的回收率。每次提取的DNA量在毫克数量级。特别适合用于Tm法测定DNA G+C mol%含量所需DNA样品的制备。     

重组HIV-TATm-Survivin(T34A)蛋白制备及其促癌细胞凋亡活性研究

从人乳腺癌细胞系B-Cap-37中克隆出Survivin的cDNA,并对其中编码34位Thr的密码子定点突变为Ala的密码子后,经一系列基因操作方法将天然HIV-TAT转导肽的突变体基因HIV-TATm引入Survivin(T34A)基因的5′端,正确构建了表达载体pRSET-B-HIV-TATm-Survivin(T34A),经转化E.coliBL21(DE3)后诱导表达,目的蛋白质以包涵体形式表达,占菌体总蛋白的45%。经3.7L发酵罐分批发酵可收获650mg/L的包涵体,经阳离子交换、凝胶层析分离和柱上复性与透析,得到纯度达96%以上的可溶性目的蛋白HIV-TATm-Survivin(T34A)。目的蛋白对人乳腺癌细胞B-Cap-37、人胰腺癌细胞SW1990和人肝癌细胞SSMC-7721作用4h后有在细胞形态上呈现出显著的凋亡特征,而对人宫颈癌细胞系Hela不敏感,对正常的人内皮细胞系EVC-304未见明显影响。作用24h时MTT法检测显示,120μg/mL目的蛋白对SW1990、B-Cap-37、SSMC-7721和Hela细胞的抑制率分别达到89%、63%、59.5%和39%,且具有剂量依赖性。对最为敏感的SW1990和B-Cap-37以每孔60μg/mL终浓度的目的蛋白作用48h的流式细胞技术检测发现,凋亡率分别为25.6%和19.3%,与对照相比,实验组细胞出现明显的凋亡峰,细胞周期的分布发生明显的变化,65%以上的癌细胞被阻滞于G1期。体外实验结果显示重组目的蛋白具有较强的抑制癌细胞增殖和促进凋亡作用,预示着良好的抗癌前景。     

大肠杆菌holo-ACP的过表达、分离纯化及长链脂酰ACP的合成

[目的]获得高纯度大肠杆菌holo-ACP和多种长链脂酰ACP,为研究细菌脂肪酸、类脂A和N-酯酰高丝氨酸内脂等物质的合成提供底物.[方法和结果]采用PCR方法扩增得到大肠杆菌酰基载体蛋白基因(acpP)和holo-ACP合成酶基因(acpS).使用载体pBAD24、pBAD34和pET28b分别克隆了acpP和acpS,得到pBAD-ACP、pET-ACP和pET-ACP-ACPS 3个ACP表达质粒和一个AcpS表达质粒pBAD-ACPS.分别用3个ACP表达质粒转化大肠杆菌DH5a和BL21(DE3),构建了DH5αpBAD-ACP、BL21(DE3)/pET-ACP和BL21(DE3)/pET-ACP-ACPS 3种ACP生产菌株.与holo-ACP纯化常用菌株DK574相比,虽然三菌株在诱导时均能过量表达ACP,但是holo-ACP所占比例偏低.为了提高ACP生产菌株holo-ACP的产量,用质粒pBAD-ACPS分别转化上述3种ACP生产菌株,获得了3种携带双质粒的ACP生产菌株.表达结果显示携带pBAD-ACP和pBAD-ACPS双质粒的DH5a菌株比DK574菌株能产生更多的holo-ACP,且纯度也得到提高(纯度达99%).同时使用UNOsphere Q阴离子交换层析从这一菌株培养物中分离纯化到了高纯度的holo-ACP,并以纯化到的holo-ACP和多种长链脂肪酸为底物在哈氏弧菌脂酰ACP合成酶的催化下,合成了多种长链脂酰ACP.[结论]通过研究获得一株holo-ACP高产菌株,并证明在大肠杆菌菌株中,同时表达acpP基因和acpS基因,有利于holo-ACP的产生.     

铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌超超广谱β-内酰胺酶的检测

目的：了解多重耐药的铜绿假单胞菌和阴沟肠杆菌的主要耐药机制超超广谱β-内酰胺酶即超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)和高产AmpC酶的产生情况。方法：建立一种简易快速地检测超超广谱β-内酰胺酶的K-B药敏试验法：首先选择5种药敏纸片：IMP、FOX、FEP、CTX、CD03,依据纸片的抑菌环直径综合判断分析。怀疑产AmpC酶的菌株,用OBs抑制试验进一步证实。结果：使用该法分别检测产AmpC酶、ESBLs的4株标准株和多重耐药的70株铜绿假单胞菌和30株阴沟肠杆菌,结果各种标准株检测无误。70株铜绿假单胞菌中产AmpC酶的有40株,产ESBLs的有18株,同时产AmpC酶和ESBLs的是5株,还有9株细菌两类酶检测均阴性,原因待分析。同时利用此试验法检测铜绿假单胞菌的诱导阳性率为42／70(60％)和阴沟肠杆菌的诱导阳性率为16／30(53．3％)。结论：此法简易快速,能较好地鉴别产ESBLs或和AmpC酶株,并适用于临床常规检验。     

过热大鼠加压素分泌活性的研究

应用电镜和免疫组化方法研究大鼠神经垂体在过热状态下的形态学变化。主要表现为充满神经分泌颗粒的贮存型Ａ型神经纤维膨体的数量明显减少;而其它各分泌活跃型膨体的数量明显增多。还可见Ａ型神经纤维发生变性,个别垂体细胞坏死。上述改变表明神经垂体在超负荷情况下加压素分泌亢进,最终导致功能衰竭。     

Jak—STAT信号转导机制

许多细胞因子受体尽管缺少激酶结构域,但与配体结合后仍能诱导蛋白质的酪氨酸磷酸化。近年来的研究证明这一过程是由Ｊａｋ族蛋白质酪氨酸激酶的成员所介导的。Ｊａｋ激酶通过和受体的近膜区域的相互作用而与之缔合。配体结合引起受体聚合以及Ｊａｋ的酪氨酸磷酸化和激活,激活的Ｊａｋ又使受体和ＳＴＡＴ蛋白（信号转导物与转录激活剂）磷酸化、后直接参与基因转录的调控。本对这一新的胞内信号转导机制作一综述。