基于流式细胞术分选的高效表达外源基因细胞的筛选

目的：以增强型绿色荧光蛋白（EGFP）作为报告基因,用流式细胞术筛选高表达EGFP的细胞,从而获得外源基因高效表达细胞株。方法：构建在EGFPC端编码区融合新霉素（neomycin）抗性基因的融合基因EGFP-Neomycin,将其插入pcDNA3.1（＋）载体,构建EGFP-Neomycin融合基因表达载体pcDNAEN,转染CHO-K1细胞,G418加压筛选和倒置荧光显微镜观察证实所表达的EGFP-Neomycin融合蛋白具有新霉素抗性和激发EGFP荧光双功能;将编码组织型纤溶酶原激活剂（tPA）的cDNA插入pcDNAEN中CMV启动子下游,构建表达tPA的表达载体pcDNAEN/tPA。结果：流式细胞术分析和tPA纤维蛋白溶解活性测定表明,pcDNAEN/tPA转染CHO-K1细胞的EGFP相对荧光强度（RFT）的自然对数值与tPA表达水平呈明显的直线相关关系,相关系数为0.983;比较部分未经流式细胞仪分选的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆和RFT分布在100～1000的pcDNAEN/tPA转染阳性细胞克隆的tPA表达水平,经流式细胞术分选获得的细胞克隆的tPA平均表达水平和最高表达水平分别是未经分选获得的细胞克隆的3.9倍和4.1倍。结论：构建的EGFP-Neomycin融合基因具有双功能,建立了利用流式细胞术筛选外源基因高效表达物细胞株的方法。     

一种新型的生物素诱导的真核基因表达调控系统的建立

为建立一种适用于生物制药工业和基因治疗领域的基因表达调控系统,构建枯草芽胞杆菌生物素连接酶(BS-BirA)与转录激活结构域的融合蛋白,以其表达载体为调控载体;在弱化的CMV启动子上游连接BS-BirA特异的操纵子序列,获得响应载体,从而得到响应于生物素的真核基因表达调控系统BS-Biotin-On。以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)为报告基因对该系统进行考察,结果表明,与现有的类似调控系统相比,该系统具有良好的诱导率;可通过调节培养体系中生物素的浓度,实现对目的基因表达水平快速、较高效的调节。上述结果表明,BS-Biotin-On系统可能为外源基因的调控表达提供新的选择。     

肾素－Ⅱ转基因的初步研究

将注射２４ｋｂ小鼠肾素－２（Ｒｅｎ－２）基因的４２５枚受精卵再植于２２只假孕大鼠输卵管内（每只约２０枚）。怀孕的１６只母鼠共生得子代鼠９７只,用ＰＣＲ及Ｓｏｕｔｈｅｒｎ印迹杂交技术对存活的６０只子代鼠进行鉴定,发现有两只大鼠携带Ｒｅｎ－２基因。此两只转基因大鼠整合外源基因的拷贝数约为１～２个,血压均未见升高。     

大规模动物细胞培养的问题及对策

大规模动物细胞培养在生物技术产业化进程中显示出强大的潜力。本文综述了大规模动物细胞培养过程中出现的问题及其解决办法 ,包括细胞培养环境、基因工程途径改建细胞系及过程监控等。对于这些进展的充分了解对优化细胞培养工艺、提高产品质量具有重要意义     

组织贴块法建立人气道平滑肌细胞体外培养模型的研究

背景:人气道平滑肌已被证实参与气道重塑,气道平滑肌的重塑已成为慢性呼吸道疾病的主要病理改变之一。人气道平滑肌细胞的培养对慢性呼吸道疾病的研究有重要意义。组织贴块法培养人气道平滑肌细胞是原代培养人气道平滑肌细胞的基本方法之一。目的:采用组织贴块法建立人气道平滑肌体外培养模型。方法:采集人气道组织,用组织贴块法进行人气道平滑肌细胞的原代培养,获得的细胞经形态学和免疫细胞化学染色鉴定。结果:培养的细胞呈典型的"谷峰"状生长,胞浆内特异性的平滑肌肌动蛋白阳性表达,符合平滑肌细胞的形态学特征和生物学特性。结论:组织贴块法易操作,结果可信,并可培养出高纯度活性好的人气道平滑肌细胞,成功建立了体外人气道平滑肌细胞增殖模型,提供了研究慢性呼吸道疾病的细胞培养模型。     

用悬浮搅拌培养体系体外大量扩增人脐血造血干/祖细胞

目的 :建立一种简便、有效的脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增培养体系。方法 :淋巴细胞分离液分离的脐血单个核细胞在SCF ,IL - 3,IL - 6三种细胞因子的作用下 ,于悬浮搅拌培养体系中培养 ,分析其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数。结果 :脐血单个核细胞在悬浮搅拌培养体系中培养 12天后 ,其总细胞数、CFU -GM、CD34+ 细胞的扩增倍数分别为 6 .31± 1.5 2 ,2 0 .6 3± 1.5 4和 7.11± 1.12。结论 :悬浮搅拌培养体系是脐血造血干 /祖细胞体外大量扩增的有效培养体系。     

快速城市化区域不同生境类型的蝴蝶多样性

2011年5—10月,在重庆两江新区选取人工次生林、人工草地、苗圃地、荒草地、农田、天然次生林6种不同生境类型,进行蝴蝶调查。共采集蝴蝶1547只,隶属6科27属37种。结果表明:菜粉蝶(Pieris rapae)、东方菜粉蝶(P.canidia)、酢浆灰蝶(Pseudozizeeria maha)和点玄灰蝶(Tongeia filicaudis)是研究区域的优势种;沿城市化梯度,不同采样断面蝴蝶多样性指数变化趋势明显,即城市化水平越高,多样性指数越低;同时生境类型和人为干扰对蝴蝶多样性影响明显;蝴蝶群落多样性特征可以作为生境质量和环境变化的指标。最后提出:在快速城市化区域中,应根据不同城市化水平、不同生境类型采取有差异的管理措施,保护和提高城市生物多样性。     

江西赣江源区域两栖动物的群落组成和物种多样性特征

赣江发源于武夷山脉南段西麓的高山岭间,该区域独特的地理环境和气候特征蕴育了丰富的生物多样性。然而关于该区域两栖动物群落组成和物种多样性调查非常匮乏,不利于赣江源头两栖动物物种多样性的保护。于2016年4—9月期间在江西赣江源区域采用样线法调查了两栖动物的资源状况、群落组成及物种多样性特征,比较了它们在山地森林区、丘陵森林与农田区和盆地农田区3类栖息地之间的差异性。结果表明:赣江源区域分布有8科23种两栖动物,新增记录3个物种,包括尖舌浮蛙、寒露林蛙和九龙棘蛙,泽陆蛙和饰纹姬蛙为优势种。赣江源区域的两栖动物群落组成和物种多样性存在显著的季节间差异和栖息地间差异;两栖动物季节性繁殖是造成前者差异的主要因素,而土地利用类型、栖息地特征、空间距离、生活习性的物种特性等因素成就了后者差异的出现。因此,春、夏季一般有比秋季见到更高的两栖动物物种丰富度和多样性;山地森林区的两栖动物物种丰富度和多样性最高,盆地农田区次之,丘陵森林与农田区的最低。山地森林区应成为赣江源区域两栖动物多样性保护的优先区域。国家Ⅱ级重点保护野生动物虎纹蛙,在3类栖息地中均有分布,且在盆地农田区和山地森林区能见到更多个体,但农...     

不同海拔高原适应相关肝脏功能与脂代谢变化

目的：分析高原移居者肝脏功能及血脂水平。方法：选择不同海拔高原移居者（平均10年以上）男性80名,无高血压及糖尿病病史。按高原会议订立标准分组：低海拔组（〈1500米）8例,中海拔组（1500-2500米）9例,高海拔组（2500-4500米）36例,特高海拔及以上组（〉4500米）9例,运输组（2700-4600米）18例。清晨抽取空腹静脉血5mL,Roche Modular PE全自动生化免疫分析仪检测肝脏功能及血脂水平。结果：高海拔移居者,总胆红素和直接胆红素升高,总胆固醇、低密度脂蛋白降低;特高海拔及以上移居者（〉4500米）,直接胆红素升高,总胆固醇、低密度脂蛋白、载脂蛋白B降低。结论：本文研究结果提示了,高原缺氧环境下,肝脏自身功能抗缺氧发生改变或高原饮食受限可引起肝脏功能变化,进而影响脂类代谢,是机体对长期乏氧状态的适应性改变。     

喷昔洛韦体外抗疱疹病毒活性的研究

为评价新合成的喷昔洛韦的细胞毒性和抗疱疹病毒活性,通过观察病毒感染细胞的CPE、病毒滴度、抗病毒指数,从而判定喷昔洛韦的抗疱疹病毒作用.结果发现喷昔洛韦对HEL细胞、Hep-2细胞的半数中毒浓度(TD\-50)分别为105.2μg/mL和85.1μg/mL;对HSV-1、HSV-2、VZV、HSV-1吴株的平均半数抑制浓度(IC\-50)分别为21.78μg/mL、20.15μg/mL、23.19μg/mL和17.87μg/mL,对各毒株的治疗指数分别为5.84、6.31、5.49和7.11.故喷昔洛韦是一种有效体外抗疱疹病毒药物.