外泌体分泌在1,4-苯醌诱导的HL-60细胞凋亡中起保护作用

慢性苯暴露损害造血系统,可引起再生障碍性贫血,甚至白血病。外泌体(exosomes)是细胞分泌的纳米级膜泡,在许多生理和病理过程中发挥重要作用。然而,苯及其代谢产物对外泌体分泌的影响仍不清楚。本研究旨在观察苯的活性代谢产物1,4-苯醌(1,4-benzoquinone,1,4-BQ)能否引起人早幼粒白血病细胞HL-60外泌体分泌量的变化以及外泌体释放在1,4-BQ诱导的细胞凋亡中的作用。应用不同浓度1,4-BQ处理细胞24 h,超高速离心法提取细胞培养基中的外泌体,结果发现1,4-BQ能促进外泌体分泌,呈剂量反应关系。进一步应用外泌体抑制剂GW4869抑制外泌体分泌,流式细胞仪检测细胞凋亡率、蛋白质免疫印迹法检测抑凋亡蛋白质Bcl-2、凋亡通路关键蛋白质cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达,探讨外泌体分泌对1,4-BQ所致细胞凋亡的影响。结果显示:与对照组相比,1,4-BQ单独处理组的凋亡率、Bcl-2、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3的表达均显著增高(P<0.05),而1,4-BQ+GW4869组的凋亡率及凋亡相关蛋白质的表达均显著高于1,4-BQ单独处理组(P<0.05),表明抑制外泌体分泌可增加1,4-BQ诱导的细胞凋亡。综上表明,1,4-BQ能促进外泌体分泌,并在1,4-BQ诱导的细胞凋亡中起保护作用。本研究为了解苯的毒性效应和毒性机制提供了新的实验证据。     

p53对TGEV感染PK-15细胞4种免疫调节因子mRNA转录水平的影响

为探究p53对IFN-α、MIP-1α、PGK-1、TGF-β1四种免疫调节因子在TGEV感染PK-15细胞中的影响,本研究首先采用CRISPR-Cas9慢病毒系统靶向于PK-15细胞的p53基因构建p53基因敲除(p53-/-)的细胞;再以感染复数为0.1 MOI的TGEV感染p53野生型(p53+/+)和p53-/-PK-15细胞,于不同的感染时间收集细胞并提取细胞总RNA,应用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)技术检测四种细胞因子的转录水平。结果表明,构建的靶向于p53基因敲除的PK-15细胞中,p53基因的454碱基位点缺失一个碱基T,细胞的p53蛋白已检测不到;TGEV感染后IFN-αmRNA的相对表达量在两种细胞中均表现为先上升后下降的趋势,但在病毒感染的36 h之前,p53-/-PK-15细胞中的表达量显著低于p53+/+PK-15细胞(p<0.05);MIP-1αmRNA相对表达量随着病毒感染时间的推移而递增,且在p53+/+PK-15细胞中显著高于p53-/-PK-15细胞(p<0.05);TGF-β1 mRNA的相对表达量在p53+/+PK-15细胞中随时间推移总体呈递减趋势,并在病毒感染(post infection,p.i.)12 h之后显著低于p53-/-PK-15细胞(p<0.05);PGK-1 mRNA相对表达量在病毒感染的12 h p53+/+PK-15细胞中虽略有上升,但差异不显著,而在p53-/-PK-15细胞中呈现时间依赖性递增,并显著高于p53+/+PK-15细胞(p<0.05)。以上结果表明:p53对TGEV感染PK-15细胞后的细胞免疫因子起到了关键的调节作用,推测其可能在宿主抗TGEV感染中发挥着重要作用。     

基于DNA条形码分析大鸨繁殖期动物性食物

动物性食物是满足繁殖期大鸨(Otistarda)能量和营养需求的重要来源,然而由于传统食性分析手段的局限性,大鸨繁殖期的动物性食物组成目前还不清楚,不同繁殖地大鸨的食性差异还有待研究。高通量测序应用于食性分析,具有工作量小、数据量大和分类精度高的优点。基于粪便取样,利用高通量测序技术,对内蒙古图牧吉国家级自然保护区靠山核心区和马鞍山片区繁殖期大鸨的动物性食物种类和组成进行分析,并比较食物多样性的空间差异。物种累计曲线表明,研究中的最小采样强度(n=11)能够使MOTUs的检测限达到平台期。在24份大鸨粪便中,共发现29种不同动物性食物的DNA序列,均来源于无脊椎动物,以节肢动物门的鞘翅目占比最高(44.83%)。按照科水平分类,以金龟科占比最高(24.14%),其次为蝗科(13.79%)、芫菁科(10.34%)和蓟马科(6.89%)。马鞍山片区大鸨对食物的取食频率和粪便中被检测到其所取食食物种数均显著高于靠山核心区,食物多样性也显著高于后者,大鸨食性表现出一定空间差异。本研究为深入研究大鸨食性与栖息地选择的关系,以及了解大鸨繁殖期的觅食对策奠定了基础,为保护部门有效保护和恢复大鸨栖息地提供了食性水平的参考依据,同时为分子食性分析方法用于其他动物的觅食生态学研究提供了示范。     

急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14mRNA的表达

目的 探讨内毒素致急性肺损伤大鼠肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA表达的变化.方法 24只雄性Wistar大鼠随机分为2组:对照组、LPS模型组,每组再分为4 h和8 h两个亚组.尾静脉注射脂多糖(LPS)(10 mg/kg)建立大鼠急性肺损伤模型.检测大鼠动脉血气、肺体指数,实时荧光定量PCR测定肺组织TOLL样受体4及CD14 mRNA的表达,并观察肺组织病理变化.结果 与对照组相比,模型组4 h和8 h时大鼠肺组织中的TLR4及CD14 mRNA表达均显著增高(P＜0.05或P＜0.01).病理学观察显示,模型组大鼠肺组织出现出血及坏死.结论 内毒素致急性肺损伤的发病机制可能与TLR4及CD14 mRNA的表达升高有关.     

硒对大豆生长和某些生理生化指标的影响

取多年未耕作土,晒干,碾细,拌入底肥并装盆.以不加硒的为对照,以Na2SeO3水溶液的形式设置1、5、10、20、30μg(Se)·g-1(土)5个不同浓度硒的处理.大豆(Glycine max)品种为中豆32(中国农业科学院油料研究所育成).取其大小均匀、颗粒饱满的种子,于温水中浸泡8 h后置28℃温箱中催芽.挑选发芽状态一致的种子,播入上述预处理过的土壤中,按常规栽培管理.植株长出三出复叶时,测定各项生理生化指标的变化.     

基于文献分析视角的“一带一路”背景下农业发展研究热点分析

基于中国期刊全文数据库2013—2017年“一带一路”农业发展研究文献数据,利用内容分析和关键词词频分析方法,对“一带一路”倡议下农业发展领域的研究文献基础数据进行分析,对“一带一路”背景下农业领域当前研究热点进行分析,并在此基础上对今后的研究趋势进行预测。     

环境中自由及结合态雌激素的酶降解转化研究进展

天然类固醇雌激素(SEs)可分为自由态(FEs)和结合态(CEs)两大类,环境中SEs的广泛存在对人类和动物的内分泌系统产生不同程度的干扰,危害生态系统的多样性及稳定性。目前,多种酶对环境中不同形态SEs的催化去除起到重要作用,总结了环境中氧化还原酶对FEs以及水解酶对CEs的去除作用,并阐述不同形态SEs的主要酶降解转化机理与路径。氧化还原酶催化FEs形成自由基,通过C-O-C、C-C共价键自耦合、相互耦合形成聚合产物,该过程易受到环境中有机质的影响;水解酶则通过解离硫酸盐或葡糖苷酸盐结合基团将CEs水解为相对应的FEs,硫酸盐结合态雌激素不易被解离,在环境中稳定性更强。讨论了酶在实际应用中存在的问题,对酶在污水及土壤环境中SEs的去除、酶的联用、固定化酶、酶工程等方面进行了展望,旨为环境中两种形态雌激素的酶降解转化研究提供理论借鉴。     

喉癌中差异表达的蛋白激酶及其抑制剂的生物信息学筛选

目的：筛选喉癌中差异表达的激酶基因以及调控这些差异表达激酶的激酶抑制剂,为喉癌的分子治疗提供新的靶点。方法： 利用PubMed 数据库和SAM 软件筛选喉癌中差异表达的激酶基因。体外培养人喉癌Hep-2和FaDu 细胞。实时定量聚合酶链反 应（Real-time PCR）检测目的激酶在喉癌细胞系中的表达,以验证全基因表达谱结果的准确性。利用KEGG数据库获得激酶调控 的通路。文献挖掘和人工筛选获得差异表达激酶的激酶抑制剂。结果：①在喉癌基因组表达谱中,共筛选出差异表达基因207个, P<0.05,其中激酶基因4 个,分别为CDC42、CDK7、SLK 和TXK。②Real-time PCR 结果显示在人喉癌Hep-2 和FaDu 细胞中这四 个差异基因也出现差异表达,P<0.05,证明全基因组的结果准确。③通路分析的结果显示4 个差异激酶共调控25 个通路。④文献 挖掘和人工筛选的结果显示共有10 个激酶抑制剂调控CDC42,7 个激酶抑制剂调控CDK7,1 个激酶抑制剂调控SLK,2 个激酶 抑制剂调控TXK。并且再次文献挖掘的结果显示在这20 个激酶抑制剂中,有9 个在癌症方面的研究较少,文献<10 篇。结论： 喉癌中共有四个激酶CDC42、CDK7、SLK 和TXK发生差异表达,并发挥促癌作用。它们的激酶抑制剂可能有潜在的抗癌作用, 为喉癌的分子治疗提供新的切入点。     

分子实验技能课程教学模式初探

目的:探索适合临床研究生的分子实验技能课教学模式,提高研究生科研思维能力和实验技能。方法:根据临床研究生的特点,以学生为主体,注重学生科研思维的培养,运用多样化的教学手段,对研究生临床分子实验技能课程的教学方法进行探索。结果:通过实验技能课的学习与培训,临床研究生科研思维能力得到很大的提升,对医学实验研究兴趣增加,取得了很好的教学效果。结论:多元化教学模式比较适合临床研究生实验技能课的教学。