单点突变葡萄糖异构酶(GIG138P)基因在变铅青链霉菌中的高效表达及其稳定性研究

通过三步亚克隆 ,将单点突变葡萄糖异构酶 ( GIG1 38P)基因及其调控序列插入链霉菌质粒p IJ40 83,构建重组表达质粒 p IJ40 83- GI1 .用重组质粒转化变铅青链霉菌 TK54原生质体 ,经硫链丝菌素抗性 ( Th R)筛选 ,获得重组菌株 TK54/p IJ40 83- GI1 .酶活力测定和 SDS- PAGE分析表明 ,GIG1 38P基因在变铅青链霉菌中得到高效表达 ,GI1粗酶液比活力为 1 5U/mg,GI1表达量约占菌体可溶性蛋白的 2 5% .同时也研究了重组质粒的遗传稳定性 .重组菌株在无选择压力条件下经液体连续传代培养 ,GI1比活力和 GI1表达量在 2 0 0 h传代时间中呈平缓下降趋势     

可可西里自然保护区藏羚羊的微卫星多态性研究

藏羚羊是我国特有的珍稀濒危动物,对其开展遗传多样性的研究具有非常重要的科学价值。为了获取足够的遗传信息并进一步研究藏羚羊在核基因水平上的遗传多样性,对来自可可西里地区的75个藏羚羊干皮张样本进行了微卫星遗传多样性研究。研究从来自牛和绵羊的25个微卫星基因座中筛选到9个具有高度多态性的微卫星基因座(MCM38,MNS64,IOBT395,MCMAI,TGLA68,BM1329,BMS1341,BM3501和MB066)。用非变性聚丙烯凝胶电泳检测微卫星的PCR扩增产物,计算了这9个微卫星基因座的等位基因频率、多态信息含量、基因杂合度等指标并估算了种群数量。结果在75只藏羚羊中共检测到85个等位基因,9个微卫星基因座的等位基因数为7~12个,平均每个基因座检测到9.4个等位基因,有效等位基因数为处于4.676~9.169之间,平均为6.519;基因频率分布在0.007~0.313之间,多态信息含量在0.753~0.881之间,平均为0.818;观察杂合度为0.791~0.897,平均为0.844,期望杂合度为0.786~0.891之间,平均为0.838±0.0132,各基因座观察杂合度与期望杂合度比较接近。固定指数为-0.269~-0.097,平均为-0.163。Shannon’s指数为1.660~2.315,平均为1.990。种群数量的估算结果显示这75个体均来自同一种群。结果表明该种群在核基因水平仍具有丰富的遗传多样性。     

白桦脂酸通过抗氧化应激作用抑制脂多糖诱导的血管收缩功能损伤

白桦脂酸（betulinic acid,BA）有良好的抗心血管氧化应激损伤作用。然而,BA对脂多糖lipopolysaccharide,LPS）诱导血管收缩功能损伤是否具有保护作用,该保护作用是否与抗氧化应激有关,尚不清楚。本研究给予雄性SD大鼠白桦脂酸灌胃（25 mg/kg/d,3 d）预处理,于第4 d腹腔注射LPS（10 mg/kg）,4 h后麻醉处死,分离血浆及胸主动脉,测定大鼠胸主动脉环收缩性,测定炎症因子白细胞介素6（interleukin-6,IL-6）及氧化应激指标。结果显示,白桦脂酸明显抑制LPS诱导的血浆及胸主动脉IL-6水平（P<0.01）,降低LPS对苯肾上腺素、KCl及Ca²⁺血管收缩反应的抑制作用（84.8%±9.09% vs 42.80%±9.00%,P<0.01;127.48%±12.02% vs 99.78%±6.02%,P<0.01;52.07%±13.48% vs 20.83%±5.04%,P<0.01）,减少LPS诱导的胸主动脉丙二醛水平（P<0.01）及诱导型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase,iNOS）活性（P<0.01）,缓解LPS对超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）的抑制作用（P<0.01）。上述结果提示,白桦脂酸抑制LPS诱导血管收缩功能障碍的机制可能与增加机体SOD活性,抑制氧化应激及iNOS活性有关。     

利用秸秆类物质进行微生物共发酵生产单细胞蛋白

本实验采用固液混合共发酵方式,对绿色木霉和饲料酵母在纤维素材料上共生发酵,生产单细胞蛋白质的条件进行了研究。研究发现,在木霉接种９６ｈ后再接种酵母,混合培养后,培养物中蛋白质含量提高到２０－２５％,并可获得３０％的单细胞蛋白,产物中蛋白质含量在５３％以上,且富含多种酶类、氨基酸及维生素等,从而提高了纤维素原料的营养价值,该法使纤维素转化率达５１％。     

佐剂的研究进展

介绍了佐剂的起源、分类,综述了几种常用佐剂的特点、应用范围、作用机制、优缺点及改进,并论述了佐剂应用机制的最新进展及新佐剂的发展方向。     

固定化酶及双酶共反应

 <正> 葡萄糖异构酶(GI)将糖化酶(GA)的水解淀粉产物葡萄糖转化为果糖。这二种酶是生产高果糖浆(HFCS)不可缺少的酶。我们根据离子型载体可以改变固定化酶最适PH的道理,将GA固定在磺酸型聚苯乙烯载体上,其最适pH由4.6移到了6.8。将GI固定在季胺多羟基聚苯乙烯载体上,其PH-活力曲线变宽,在pH7.0的活力由48％提高到66％。本文首次创建了使两种酶的最适PH相向移动的双酶共反应体系。其意义在于更加广泛地利用固定化多酶体系的动力学优势。     

澳洲管膜虫纤毛器微管的荧光标记及其激光扫描共聚焦显微观察

应用激光扫描共聚焦显微术显示,由FLUTAX直接荧光标记的土壤腹毛类纤毛虫澳洲管膜虫(Cyrtohymena australis)细胞纤毛器微管中,口围带基部由小膜托架、小膜基部的微管束和托架间的连接微管构成,波动膜基部含微管骨架网,口围带后端与波动膜后端汇合处含口底托架;额、腹、横棘毛基部由前纵微管束、后纵微管束和横微管束构成,其横棘毛基部的前纵微管束显著发达,后纵微管束也明显可见;左缘棘毛基部含发达的前纵微管束和后纵微管束,但横微管束不明显;右缘棘毛基部含发达或较发达的横微管束和前纵微管束,但未见后纵微管束。分析表明,澳洲管膜虫纤毛器基部微管的分化特征具有种的特殊性,其中左、右缘棘毛基部微管的组成及发达程度不同在其他纤毛虫中未见报道。结合已有资料推测,游仆虫类、尾柱虫类和尖毛虫类纤毛虫中基部微管的发达程度和建构特征的不同与类群间系统演化关系有关。     

阴离子洗涤剂分析中常见问题及解决方法

本文介绍了用流动分析仪测定阴离子表面活性剂过程中的几点体会,主要包括试剂的配制,分析过程中存在的问题及对策,仪器的保养。     

胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的筛选和活性分析

报道了一种从噬菌体肽库中筛选胰凝乳蛋白酶短肽抑制剂的新方法．在通常的亲和富集筛选的基础上,利用胰凝乳蛋白酶自身的水解活力切割掉结合的底物噬菌体,再经抑制活力分析得到抑制性噬菌体克隆．这样筛得的噬菌体克隆具有明显的胰凝乳蛋白酶结合活力和抑制活力,ＤＮＡ序列分析发现其保守序列为（Ｓ／Ｔ）ＲＶＰＲ（Ｒ／Ｈ）．按此序列化学合成的短肽Ａｃ－ＡＳＲＶＰＲＲＧ－ＮＨ２、Ａｃ－ＡＳＲＶＰＲＨＧ－ＮＨ２同样表现出对胰凝乳蛋白酶的抑制作用．该方法为蛋白酶短肽抑制剂的筛选提供了一条有效途径