不同标签辅助的IBTX原核表达纯化及活性鉴定

目的:在原核体系中建立高效表达纯化IBTX(Iberiotoxin)的工艺,并比较不同标签对IBTX生物活性的影响。方法:利用引物搭桥的方法,经PCR扩增,获得IBTX编码基因,以此为模板分别构建了表达质粒PET32a(+)-IBTX、pGex-6p-1-IBTX、pDuet-MBP-IBTX,并将其转入E.coli(BL21)分别表达带有硫氧还原蛋白(TRX)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、麦芽糖结合蛋白(MBP)标签的IBTX融合蛋白,在经过亲和层析、烟草蚀纹病毒(TEV)蛋白酶酶切、C18反向层析纯化后真空冻干得到IBTX干粉,以电生理实验检测其生物活性。结果:在三种标签帮助下通过原核体系表达出的IBTX都能够特异性的阻断大电导Ca2+激活的钾通道(BK)电流,其中MBP帮助折叠的m-IBTX活性最佳。结论:建立了IBTX在MBP标签帮助下的原核表达纯化工艺,为进一步研究蝎钾离子通道α家族神经毒素及其突变体的原核表达奠定了基础。     

FMEA法在医疗风险管理中的应用现状与展望

面对日趋严峻的医疗风险问题,如何识别和应对风险已经成为整个医疗行业共同面对的议题。文章以失效模式与效应分析法在医疗风险管理中的应用为研究对象,探讨失效模式与效应分析法的具体实施方法和目前在国内外医疗行业的应用现状,并对失效模式与效应分析法在未来医疗风险管理中的应用予以展望。     

呼出气一氧化氮水平与支气管哮喘患儿病情及炎症因子的关系研究

目的:研究呼出气一氧化氮(FeNO)水平与支气管哮喘患儿病情及炎症因子的关系。方法:选择从2014年9月到2016年9月在我院接受治疗的支气管哮喘患儿115例作为观察组,另选同期来我院体检的健康儿童115例作为对照组,对比两组FeNO及炎症因子的水平,比较观察组不同病情患儿FeNO及炎症因子水平,分析患儿FeNO与病情及炎症因子的相关性。结果:观察组C反应蛋白(CRP)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)以及FeNO水平分别为(5.06±1.29)mg/L、(4.32±1.33)pg/mL、(2.37±0.21)pg/mL、(50.82±18.28)ppb,均分别显著高于对照组的(1.33±0.46)mg/L、(1.52±0.48)pg/mL、(0.28±0.11)pg/mL、(18.23±2.46)ppb(均P0.05)。观察组急性发作期患儿CRP、IL-6、TNF-α以及FeNO水平分别为(5.12±1.30)mg/L、(4.49±1.06)pg/mL、(2.48±0.19)pg/mL、(51.27±10.63)ppb,均分别显著高于缓解期的(2.97±0.82)mg/L、(2.39±0.62)pg/mL、(1.52±0.20)pg/mL、(32.41±5.52)ppb(均P0.05)。根据Spearman法相关性分析可知,患儿FeNO与病情及IL-6、CRP、TNF-α均呈正相关(r=0.736、0.684、0.713、0.594;均P0.05)。结论:支气管哮喘患儿的FeNO与炎症因子水平呈高表达,FeNO与病情及炎症因子之间密切相关,临床上可将其纳入监测指标,有助于辅助治疗支气管哮喘患儿。     

DFM菌株生理特性的测试以及摇床发酵条件的优化

以研究适合工业化生产的直接饲用微生物 (DirectFeedMicrobials,DFM )为目的 ,通过对 5株细菌的生理特性的测定结果 ,显示出这几株菌具有良好的性状 ,有助于改善目前饲料添加剂领域存在的问题。实验还对菌种的摇床发酵条件进行了正交优化 ,证明了 3株菌可以利用廉价的培养基实现高密度发酵[1] 。另外菌株利用玉米秸秆和麦秸秆的实验为进一步降低发酵的成本开辟了方向。     

水稻非特异性脂质转移蛋白的原核表达、纯化及抑菌功能

将编码水稻非特异性脂质转移蛋白 (nonspecificlipidtransferprotein ,nsLTP)基因 (LTP110 )的克隆到硫氧还蛋白融合表达载体PET32a( )中 ,在BL2 1(DE3)trxB-宿主菌中实现了融合蛋白的高表达。通过Ni2 chelatingSepharosefastflow柱纯化融合蛋白后 ,通过肠激酶酶切再过该亲和柱得到了重组LTP110。CD谱扫描表明重组蛋白质与体内提取的nsLTP二级结构相似 ;荧光脂质结合实验表明该蛋白质具有结合脂肪酸分子的活性。对该蛋白质的抑菌功能进行研究后表明 ,LTP110具有抑制稻瘟病菌孢子萌发的功能 ,在较低浓度即能发挥活性     

大豆基因型对根癌农杆菌菌株敏感性的研究

以栽培大豆［Glycine max (L.) Mer］吉林30、吉林43、绥农8、黑农35和东农42等的下胚轴为外植体,用EHA105和LBA4404 2个根癌农杆菌菌株（分别含有pGBI121S4ABC和pGBI4A2B质粒）研究大豆基因型对根癌农杆菌的敏感性,以及根癌农杆菌对大豆的侵染能力。结果表明,大豆基因型对根癌农杆菌的敏感性存在显著差异,以吉林43最敏感。根癌农杆菌菌株对大豆下胚轴侵染能力不同,含有pGBI121S4ABC质粒的LBA4404侵染能力较强,但差异未达显著水平。 Abstract:The sensitivity of genotypes in soybean to lines of Agrobacterium tumefaciens and the ability of A.tumefaciens infecting to soybean were investigated with hypocotyls of soybean (Jilin30,Jilin43,Suinong8,Heinong35 and Dongnong42) and lines of A.tumefaciens LBA4404 and EHA105 which including plasmid pGBI121S4ABC and pGBI4A2B respectively.The results showed that the sensitivity of genotypes in soybean to A.tumefaciens was significantly different.Jilin43 was the most sensitive materials to A.tumefaciens.The ability of A.tumefaciens infecting hypocotyls in soybean was different.LBA4404 including plasmid pGBI121S4ABC was easier to infect hypocotyls of soybean.     

光化学反应诱导大鼠视网膜水肿模型

目的:通过静脉注射光敏剂Erythrosin B联合激光照射诱导大鼠视网膜水肿模型,并观察该模型中大鼠视网膜及血管形态改变.方法:大鼠尾静脉注射光敏剂Erythrosin B后,使用532nm Nd:YAG激光(1.95±0.05 mw)照射大鼠视网膜8分钟.分别于建模后第1、2、3、5、7及14天进行眼底照相、眼底荧光造影(FFA)及视网膜光学相干断层扫描(OCT)检查.并在OCT图像上测量大鼠视网膜厚度(RT).结果:眼底照相、FFA及OCT结果显示大鼠视网膜在激光照射后可立即出现血管损伤及视网膜厚度增加,但未发现视网膜血管栓塞.激光照射前RT为219±2 μm,激光照射后第1天RT即增加至283±6μm,并在第2天到达顶峰(302±7μm),之后开始下降,至第5天恢复到激光照射前水平(234±9 μm),到第14天时视网膜发生明显萎缩,RT较激光处理前减小(198±6μm).结论:这一通过光化学反应诱导的视网膜水肿模型具有可靠及可重复性,可被运用于视网膜水肿的病理学及动力学研究.     

宫颈癌组织LRP11、SOX12表达与临床病理特征以及预后的关系研究

摘要 目的：探讨宫颈癌组织中低密度脂蛋白受体相关蛋白11（LRP11）、性别决定区域Y-BOX12（SOX12）表达特点，分析其与临床病理特征以及预后的关系。方法：选择2015年7月至2017年10月徐州医科大学附属医院收治的90例宫颈癌患者，取其手术切除的宫颈癌组织和癌旁正常组织，采用免疫组化法检测LRP11、SOX12阳性表达率。比较不同临床病理特征宫颈癌组织中LRP11、SOX12表达差异。术后随访至2022年10月，Kaplan-Meier生存曲线分析不同LRP11、SOX12表达水平宫颈癌患者无进展生存期（PFS）和总生存期（OS）差异。结果：宫颈癌组织中LRP11、SOX12阳性表达率高于癌旁组织（P＜0.05）。低度分化、FIGO分期II期、盆腔淋巴结转移宫颈癌患者癌组织中LRP11、SOX12阳性表达率高于中高度分化、FIGO分期I期、无盆腔淋巴结转移宫颈癌患者（P＜0.05）。中位随访时间35（15-45）个月。共4例失访，成功随访病例为86例。LRP11、SOX12阳性表达宫颈癌患者的5年PFS生存率分别为67.19%，63.79%，明显低于LRP11、SOX12阴性表达宫颈癌患者的86.36%、89.29%（P＜0.05）。LRP11、SOX12阳性表达宫颈癌患者的5年OS生存率分别为85.94%、84.48%，而LRP11、SOX12阴性表达宫颈癌患者的5年OS生存率均为100%（P＞0.05）。结论：宫颈癌组织中LRP11、SOX12阳性表达率显著增高，与宫颈癌恶性临床病理特征以及低PFS生存率有关。     

基于地理信息系统的区域医疗资源布局评价实证研究

以地理信息系统为工具,介绍了区域医疗规划中各类医疗资源布局的评价方法,并以上海市某区 “十三五”区域卫生规划方案为具体案例进行医疗资源布局的评价研究。