一种简单有效的克隆未知旁侧DNA片段的方法

操作含长插入片段的DNA克隆时 ,经常需要进行亚克隆和测序实验。通常的方法首先是得到插入片段的限制性内切酶谱 ,然后选择合适的内切酶消化DNA ,分离靶片段 ,将其连接入质粒载体中进行下一步操作。但这种方法工作量大 ,步骤繁琐。在此 ,介绍一种不需要做限制性内切酶谱分析 ,而根据靶片段的旁侧序列直接进行亚克隆实验的方法。首先 ,选择合适的限制性内切酶消化含长插入片段的DNA克隆 ,其中一种酶切在已知的旁侧序列上 ,另一为随机选择 ;然后酶切混合物与线性化的质粒载体连接 ,转化细菌得到一“亚克隆库” ;将其中的克隆挑选入 96孔板培养后 ,按行或列混合菌液得到相应的“pool” ;最后 ,用PCR方法筛选获得含靶DNA片段的阳性克隆 ,其中所用的引物一个与已知的旁侧DNA序列配对 ,另一个与质粒载体上序列配对 ,PCR扩增已知的旁侧DNA片段以鉴定阳性克隆。多次独立实验表明该方法简单有效 ,可广泛用于亚克隆和DNA步移实验     

金雀花碱的植物生长调节活性

应用植物激素生物试法测定了金雀花碱（cytisine)的某些植物生长调节活性,实验结果表明：金雀花碱抑制小麦芽鞘切段的伸长,但促进黑暗中（26℃）培养的离体黄瓜子叶鲜重的增加;能明显促进黑暗中（25℃）培养的离体黄瓜子叶的生根作用和根的生长。能显著提高离体黄瓜子叶中吲哚乙酸氧化酶的活性,这些现象说明,金雀花碱具有明显的植物生长调节活性。     

中华绒螯蟹二株呼肠孤病毒的初步研究

在研究中华绒螯蟹病害的过程中 ,分离到两株呼肠孤病毒 (分别命名为EsRV816和EsRV90 5 )。EsRV816从江苏某养殖场分离 ,EsRV90 5从武汉某养殖场分离。EsRV816和EsRV90 5的病毒粒子为球状对称结构 ,大小分别为 6 5nm和 5 5nm。病毒粒子基因组分别为 10和 12个节段的双链RNA。根据它们的宿主范围、基因组节段数及电泳型 ,这两种病毒很可能属于呼肠孤病毒科的两个新属     

我国不同季节陆地植被NPP对气候变化的响应

阐明不同季节陆地植被净第一性生产力（NPP）对全球变化的响应将有助于理解陆地生态系统和气候系统之间的相互作用以及NPP变化机制。本文使用1982－1999年间的AVHRR／NDVI、气温、降水以及太阳辐射等资料,结合植被分布图和土壤质地图,利用生态过程模型,研究不同季节我国陆地植被NPP的年际变化及其地理分异。结果表明,在1982－1999年的18年间,4个季节的NPP都呈显著增加趋势。其中,春季是NPP增加速率最快的季节,夏季是NPP增加量最大的季节,不同植被类型对全球变化的响应有很大差异。常绿阔叶林,常绿针叶林和落叶针叶林NPP的增加主要由生长季节的提前所致。而落叶阔叶林、针阔混交林、矮林灌丛,温带草原及草甸,稀树草原、高寒植被,荒漠以及人工植被NPP的增加主要来自生长季生长加速的贡献。从区域分布看,在四季中春季NPP增加量最大的地区主要集中在东部季风区域;夏季NPP增量最大的地区包括西北干旱区域和青藏高原的大部分地区,小兴安岭－长白山区,三江平原,松辽平原,四川盆地,雷州半岛,长江中下游部分地区以及江南山地东部;而秋季植被NPP增加量最大的地区主要有云南高原－西藏东部和呼伦湖的周围等地区。不同植被和地理区域NPP的这些响应方式与区域气候特征及其变化趋势有关。     

一种放线菌发醇产天然蓝色素的研究

对一种放线菌产生天然蓝色素的发醇条件作为详细探讨,单因素发醇试验表明,碳源以2％的蔗糖最佳,氮源以0．1％的KNO3为最好,正交试验表明,蓝色素发醇最佳配方为：4％蔗糖＋0.1%KNO3 0.075%盐＋10ug/mLFeSO4。最佳培养温度为30℃,最佳初始pH为7．4,并测定了罐发醇过程中的溶解氧,pH变化及碳,氮的利用情况,用HPLC法对该色素的各成分进行了分离,结果显示,该蓝色素至少含有以放线紫红素为代表的5种不同的成分。     

EB病毒潜伏膜蛋白1诱导人鼻咽上皮细胞端粒酶的表达

Telomerase activation has been linked to cell immortalization in vitro and tumorigenicity in vivo. In this study, for the first, we reported that Epstein-Barr virus activated the telomerase activity of human nasopharyngeal epithelial cells in the early stage of immortalization as tested by the PCR-ELISA. The telomerase activity in nasopharyngeal epithelial cells was only observed in presenescent cells. It was implicated that Epstein-Barr virus induced the escape of nasopharyngeal epithelial cells from senescence via the activation of telomerase. We further showed that telomerase activation in infected cells was dependent on the protein level of latent membrane protein 1 (LMP1) encoded by Epstein-Barr virus using a Tetracycline regulatory cell line expressing LMP1, pTet-on-LMP1-HNE2. The activity of telomerase in nasopharyngeal cells was decreased when the protein level of LMP1 was blocked by antisense LMP1 plasmid DNA. And the activity of telmerase was also related to the carboxyl terminus of LMP1. It was implicated that the ability of Epstein-Barr virus to suppress senescence is associated with telomerase activation by LMP1.     

猪圆环病毒2型ORF2基因序列分析及真核表达载体的构建

根据ＧｅｎＢａｎｋ中猪圆环病毒２型（ＰＣＶ－２）ＯＲＦ２基因序列,设计一　对引物,应用ＰＣＲ从疑患断奶仔猪多系统消耗综合症（ＰＭＷＳ）的死亡仔猪组织病料中扩增出ＯＲＦ　２全基因（７０２ｂｐ）。将此片段克隆入ｐＧＥＭ－Ｔ　ｅａｓｙ载体,筛选获得重组质粒ｐＴＯＲＦ２,并对此质　粒中的插入序列进行了测序分析,结果表明本试验克隆的ＯＲＦ２与美国ＰＣＶ－２分离株ＡＦ２６４０３９　的核苷酸及氨基酸序列同源性均达到１００％,与其他ＰＣＶ－２毒株同源性分别为９２．３％～９８．　６％和　９２．３％～９６．６％。重组质粒ｐＴＯＲＦ２经　Ｂａｍ　Ｈ　Ｉ、Ｅｃｏ　Ｒ　Ｖ双酶切,回收ＯＲＦ２基因,转　移入真　核表达载体ｐＳｅｃＴａｇ２／ＨｙｇｒｏＢ的相应酶切位点之间,构建成重组质粒ｐＳｅｃＴａｇＯＲＦ２。此重组表　达载体的构建成功为进一步研究ＯＲＦ２编码蛋白的生物学活性及建立ＰＣＶ诊断试剂盒打下基础。     

灯盏花中的糖苷

从灯盏花（Erigeron breviscapus (Vant.) Hand.-Mazz.) 全株的乙醇提取物的正丁醇部分分得10个化合物,通过波谱方法鉴定为erigeside I(1)、γ－吡喃酮－3－O－β－D－[6′－（4″－羟基－3″,5″－二甲氧基苯甲酰）-]-吡喃葡萄糖苷（erigeside D,2)、erigeside A(3)、erigeside B(4)、erigeside Ⅱ(5)、7-O-β-D-吡喃葡萄糖－6－甲氧基香豆素（6）、icariside B2(7)、blumenol C葡萄糖苷（8）、（＋）－丁香树酯醇O－β－D－吡喃葡萄糖苷（9）和野黄芩苷甲酯（10）。用X射线单晶衍射方法确定了化合物7的绝对构型。2是一个新化合物,7、8和9首次从该属植物分离得到,6首次从该种植物分离得到。     

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物,胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性,用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（HL－60）的抑制作用为指标,跟踪指导分离过程,提取物经反相C18中压液相色谱,Sephadex LH-20凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质。经NMR和MS鉴定为7－酮基胆固醇（7－ketocholesterol,7-KC)。体外琼脂培养条件下7－KC对小鼠WEHI－3和S－180细胞较对正常小鼠骨髓粒－巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用,7－KC对HL－60细胞增殖较对正常人骨髓CFU－GM有更强的抑制作用。