三七内切-β-1,4-葡聚糖酶基因PnCel1的表达及功能分析

内切-β-1,4-葡聚糖酶(endo-1,4-β-glucanases,EGases)广泛参与植物细胞壁的编辑,在组织伸长、果实成熟和脱落等过程中起重要作用。该研究采用RT-PCR方法,从三七(Panax notoginseng)中克隆了1个EGases基因(PnCel1),并对其进行表达和功能分析。结果显示:(1)外源茉莉酸甲酯、水杨酸、赤霉素、脱落酸和乙烯利处理显著诱导PnCel1的表达,而根腐病菌茄腐镰刀菌(Fusarium solani)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)以及交链格孢(Alternaria alternata)、木贼镰刀菌(Fusarium equiseti)侵染三七后显著抑制PnCel1的表达。(2)亚细胞定位分析表明,PnCel1-GFP融合蛋白定位于洋葱表皮细胞的细胞壁中。(3)采用染色体步移技术克隆出PnCel1的启动子序列[(-1)~(-828)bp],进而成功构建PnCel1启动子驱动的β-葡萄糖醛酸酶植物表达载体(pBI121-PPnCel1-GUS)并转入烟草(Nicotiana tabacum L.),经PCR筛选鉴定获得阳性转基因烟草7株。(4)GUS活性检测结果表明,5种植物激素能诱导PnCel1的启动子活性,但茄腐镰刀菌等4种病原菌侵染明显降低了PnCel1启动子的转录活性,且PnCel1启动子受三七WRKY转录因子PnWRKY5/9/12/15/27的负调控。(5)PnCel1过表达转基因烟草与野生型烟草相比,对茄腐镰刀菌的易感性增加,木质素含量降低,表明PnCel1可能参与改变细胞壁的结构。研究表明,植物激素能上调三七根中PnCel1的表达,而病原菌侵染降低了PnCel1的表达水平,并抑制PPnCel1的活性,推测三七PnCel1可能通过改变细胞壁结构而增加三七对根腐病菌的易感性。     

纳米缓释丁酸钠对草鱼生长性能、血清生化指标、肠道黏膜形态及PepT1基因表达的影响

以初始体重(18.65±0.21) g的草鱼为实验对象,研究不同浓度纳米缓释丁酸钠对草鱼的生长性能、血清生化指标、肠道黏膜形态及PepT1基因表达的影响,实验共配制6种等氮等能的草鱼实验饲料,在基础饲料中分别添加0、0.1%、0.2%、0.4%、0.6%和0.8%的纳米缓释丁酸钠,以不添加丁酸钠组为对照组。实验在室外网箱内进行,每网箱饲养50尾草鱼,每个处理重复3次,养殖时间60d。结果表明:当纳米缓释丁酸钠添加量为0.6%时,草鱼的增重率、特定生长率、肥满度和肠绒毛高度均显著高于对照组(P<0.05),具有较好的促进生长的作用;同时,草鱼血清中的球蛋白含量显著增加(P<0.05),尿素氮含量与对照相比显著降低(P<0.05),谷丙转氨酶GOT、谷草转氨酶GPT及葡萄糖含量与对照相比差异不显著;血清中总氨基酸含量及必需氨基酸含量相比对照组增加显著(P<0.05),小肠中PepT1基因表达量提高显著(P<0.05)。在饲料中添加适量的纳米缓释丁酸钠通过保护肠道黏膜和提高肠道PepT1的表达量,从而促进其生长,适宜添加量为0.6%。     

肠道菌群失衡对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭患者血浆降钙素原升高的影响

目的 探讨肠道菌群失衡对乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭（hepatitis B virus-related acute-on-chronic liver failure,HBV-ACLF）患者血浆降钙素原（procalcitonin,PCT）水平升高的影响。方法 检测29例HBV-ACLF（肝衰组）、14例慢性乙型肝炎（乙肝组）患者入院时的血浆PCT、内毒素（endotoxin,LPS）水平,收集患者新鲜尾便并通过高通量测序检测肠道菌群状况,统计分析两组患者间肠道菌群、B/E值、PCT和LPS水平的差异,以及肝衰组患者PCT、LPS、B/E值三者间的相关性。结果 与乙肝组患者比较,肝衰组厚壁菌门、放线菌门、双歧杆菌属、乳杆菌属等肠道菌群显著减少,而拟杆菌门、变形菌门、埃希菌属等肠道菌群过度生长,两组患者间各菌群比较差异均具有统计学意义（t=-4.84,Z=-2.84,Z=-2.57,Z=-4.39,t=3.59,t=2.64,t=2.19,P＜0.01、＜0.01、=0.01、＜0.01、＜0.01、=0.01、=0.04）;肝衰组PCT[0.50（0.96）]ng/mL、LPS（0.46±0.10）EU/mL、B/E值（0.04±0.01）,乙肝组PCT（0.08±0.02）ng/mL、LPS（0.05±0.02）EU/mL、B/E值（1.62±0.31）,各指标两组间比较差异均具有统计学意义（Z=-3.17,t=5.88,t=16.18,P＜0.01、0.01、0.01）;肝衰组B/E值与LPS水平呈负相关关系（r=‒0.81,P＜0.01）,B/E值与PCT水平呈负相关关系（r=‒0.79,P＜0.01）,且PCT水平与LPS呈正相关关系（r=0.76,P＜0.01）。结论 HBV-ACLF患者肠道菌群失衡导致肠源性LPS生成增多,而肠源性LPS促使PCT产生增多。     

中国藁本属叶柄的解剖学研究

本文首次观察了我国藁本属(Ligusticum)21种植物的叶柄解剖结构、基本特征和变异幅度。根据叶柄的维管束排列,结合横切面形状、近轴面沟槽的有无及形状、周缘的变化及髓腔的有无等特征,把21种藁本的叶柄解剖分为4个类型。依据各类型的结构特点及植物的外部形态,讨论了这4个类型可能的演化关系。作者认为滇西北地区不仅藁本属植物种类丰富,而且集中了叶柄解剖的全部类型,形态分化活跃,应是这个属的最大变异中心。     

抗EGFRvⅢ单链抗体的原核表达条件的优化及纯化

为了构建抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,优化抗EGFRvⅢ单链抗体在大肠杆菌中的表达条件,并建立纯化方法。构建抗EGFRvⅢ单链抗体的pET-22b(+)重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,研究不同温度、不同浓度诱导剂对目的蛋白表达效率的影响。用Ni2+亲和层析纯化蛋白,并通过免疫印迹对其进行鉴定。抗EGFRvⅢ单链抗体重组质粒经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,菌落PCR和测序验证,结果显示重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明BL21表达的目的蛋白相对分子量为29kD左右,与理论分子量一致,免疫印迹结果表明在29kD左右出现一条特异性条带,与SDS-PAGE结果一致。15℃和0.6μmol/L的诱导剂为抗EGFRvⅢ单链抗体的最佳诱导条件。本研究成功构建了抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,并获得了大肠杆菌表达单链抗体的最佳诱导条件。     

中国当归属新分类群

多年生草本,高 1～1.2m。根长圆锥形,棕褐色,长 10～12cm,根颈部直径 2～3cm。茎具纵条纹,被疏柔毛。基生叶有柄,长 10～15cm,被疏柔毛,叶鞘长圆形;叶片轮廊三角     

中国独活属叶柄的解剖学研究

本文首次观察了我国独活属１５种地柄解剖的结构的基本特变异幅度。根据叶柄的维管束排列,结合横切面形态,近轴面沟槽的有无及形态周缘的变化及髓腔的有无等特征,把１５种独活的叶柄剖分为５个类型。依据各类型的结构特点结合其植物的外部形态,以及细胞学和花粉形态等特征,讨论了这５个类型可能的演化关系和独活属的属下分类问题,作者认为我国西南部的横断山区不仅独活属植物的种类丰富。是该属的频度中心,而且形态分化活跃,     

带扩散项的周期捕食食饵模型的整体共存态的存在唯一性

本文通过构造迭代列,讨论了周期捕食食饵扩散系统的整体共存态的存在唯一性.     

胫骨螺旋形骨折合并后踝骨折与单纯踝关节骨折的区别

目的:比较后踝骨折两种不同类型的临床区别,为后踝骨折的临床诊治提供借鉴参考依据。方法:选取2010年1月-2013年1月我院收治的成人胫腓骨骨干骨折和单纯踝关节骨折患者3578例为研究对象,对两种骨折患者的后踝骨折发生率、后踝骨折合并外踝骨折的发生率等进行比较分析。结果:(1)TAF患者的后踝骨折发生率高于单纯踝关节骨折患者的后踝骨折发生率,差异具有统计学意义(P0.05);(2)TSPMF患者的外踝骨折发生率低于单纯后踝关节骨折的外踝骨折发生率,差异具有统计学意义(P0.05)。结论:胫骨螺旋形骨折与单纯踝关节骨折存在一定程度的差异,临床实践中应针对两种骨折的临床特点实施有针对性的治疗方案。