二咖啡酰奎宁酸对成纤维细胞增殖与功能的影响

探讨二咖啡酰奎宁酸（IBE5）对成纤维细胞活力,增殖及功能的影响。研究IBE5抗肝纤维化的机制,实验采用体外培养的NIH／3T3细胞作为成纤维细胞的替代模型,常规培养,质量深度为250,125,62.5,31.25,15.6,7.8mg/L的IBE5加入细胞中培养24h;[^3H]-TdR掺入法测定细胞增殖率;[^3H]-Pro掺入法测定细胞活力;[^3H]-Pro掺入,胶原酶消化法测定细胞内外胶原生成率,结果显示以上6个浓度的IBE5对细胞均无毒性,各组均可显著抑制细胞增殖,促进细胞活力,明显抑制胶原和透明质酸的合成,以250mg/L为最佳浓度,IBE5能显著抑制3T3细胞增殖,胶原和透明质酸合成并对细胞活力有促进作用,IBE5在 外具有显著的抗肝纤维化作用,对于防治肝纤维化可能有一定的临床意义和应用前景。     

药物靶点的选择和验证

药物靶点的选择和验证是药物开发研究中一个重要的环节.随着现代分子生物学技术的发展和人类基因组计划的完成,出现了大量可供治疗干预的新型分子靶点,对这些新型分子靶点进行验证成为药物开发科学家所面临的重要任务.为此,就药物靶点及其选择、验证所需的分子技术基础作一简要综述.     

一种新型的α-纤维蛋白原酶对血小板聚集的影响

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测中国眼镜蛇毒蛋白酶水解纤维蛋白原的作用方式,发现该蛋白酶可迅速水解纤维蛋白原Aα链,对γ链作用较弱,对Bβ链无作用,是一种新型的α-纤维蛋白原酶.用比浊法测定血小板聚集率,证实中国眼镜蛇毒蛋白酶低剂量(0.025 mg/kg)、中剂量(0.05 mg/kg)以及高剂量(0.1 mg/kg)体内给药浓度依赖性地抑制ADP(10 .Μmol/L)和胶原(100 mg/L)诱导的兔血小板聚集.     

重组人肝细胞生长因子真核表达的定性及定量检测

将人肝细胞生长因子（human hepatocyte growth factor hHGF)全长cDNA重组入pEE14真稳定表达质粒,用lipofectin脂质体将pEE14/rhHGF转染入CHO－K1细胞,蛋氨酸亚氨基代砜（methionine sulfoximine,MSX)筛选出阳性细胞克隆,利用RT－PCR检测rhHGF mRNA的表达通过ELISA法测定rhHGF的蛋白表达,3H掺入法检测培养上清液对大鼠原代培养肝细胞DNA合成的影响,结果表明转染pEE14/rhHGF的细胞可扩增出hHGF特异的396bp RT-PCR片段,培养上清液明显促进大鼠肝细胞DNA的合成,ELISA法测出上清液中,rhHGF的含量在8ug/L以上,显示rhHGF在CHO细胞中以活性形式得到表达。     

磷脂酰肌醇3-激酶调控IL-18诱导的AP-1活化

Lipofectin介导反义磷脂酰肌醇3(IP3)-激酶寡核苷酸(ODN)转染HepG2细胞．用逆转录PCR法检测IP3-激酶mRNA表达水平,以Sandwich ELISA法检测AP-1的活化．结果表明a)反义IP3激酶ODN抑制IP3激酶mRNA表达;b)白介素-18(IL-18)诱导AP-1活化,AP-1的光密度值从基础水平的O．134±O．009上升至1. 704±0．019;c)反义IP3-激酶ODN呈时间 (5～24h)和剂量(1～8μg)依赖性地抑制IL-18诱导的AP-1活化,反义IP3-激酶ODN 2μg与细胞孵育8h的抑制作用最强,AP-1的光密度值从对照组的1．704±O．019下降到O.722±0．026,抑制丰达57．6％．上述结果表明,IP3-激酶调控白介素-18诱导的AP-1活化．     

眼镜蛇毒纤维蛋白原溶解因子的纯化及理化性质的研究

经Heparin-SepharoseCL-6B亲和层析和SephadexG-150分子筛层析,从中国眼镜蛇毒(Najanajaatra)中纯化出一种可水解纤维蛋白原Aα链的蛋白酶——组分F.SDS-PAGE测得分子量为47100,为一含2%中性己糖的单肽链糖蛋白;它对纤维蛋白、酪蛋白和苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)均无水解作用,也无激活纤溶酶原的作用;100μg皮下或皮内注射,未见出血反应。组分F对酸和热均不稳定。EDTA,EGTA,PMSF和肝素等可抑制其纤维蛋白原溶解活性,benzami-dine,aprotinin和大豆胰蛋白酶抑制因子(SBTI)则无抑制作用。     

环孢霉素A抑制NIT-1胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌

为研究免疫抑制剂环孢霉素A对NIT-1胰岛β细胞增殖和胰岛素分泌的影响,体外培养NIT-1胰岛β细胞,用不同浓度的环孢霉素A处理48h和72h,MIT法检测NIT-1胰岛β细胞的增殖情况,放射免疫测定法(RIA)检测胰岛素释放。实验结果显示环孢霉素A处理48h和72h可显著抑制细胞的增殖和胰岛素的释放,可见免疫抑制剂环孢霉素A对NIT-1胰岛β细胞有直接的细胞毒作用。     

IL-1β对体外培养NIT-1β细胞胰岛素分泌的影响

利用小鼠胰岛β细胞系NIT 1细胞,对不同时间、不同浓度IL 1β作用下细胞的生长和胰岛素的分泌进行观察,以研究IL 1β对胰岛β细胞胰岛素分泌的影响,探讨细胞因子对胰岛β细胞功能的抑制作用.结果显示在IL 1β作用下,各组NIT 1细胞分泌胰岛素呈不同程度降低,表明IL 1β对NIT 1β细胞系胰岛素的分泌具有显著抑制作用.     

重组人白细胞介素-1β对小鼠骨髓基质细胞K+通道的影响

本文用细胞贴附式和内面向外式的膜片箝单通道记录方式研究了小鼠骨髓基质细胞K 通道的动力学特性以及重组人白细胞介素1β(IL1β)对通道的影响,发现了骨髓基质细胞膜上存在一类性质类似于延迟整流的K 通道的电压依赖性K 通道,单通道电导为167±14pS,通道的动力学特性具显著的电压依赖性。1000U/mlIL1β使单通道电导增加到261±36pS,显著增加通道的开放概率,延长开放时间τo2,缩短关闭时间τc2,并诱导通道出现多级开放。研究表明K 通道的激活参与了细胞因子IL1的生物信号转导。