内生菌复合接种对茅苍术生长和倍半萜积累的影响

组织培养和人工栽培是拯救濒危野生茅苍术、获取药材或其活性成分的主要途径。为了解决人工培育茅苍术活性成分倍半萜不足的问题,本课题组在前期研究中采取内生菌接种的方式模拟道地产区原生境,发现单一接菌在一定程度上能促进倍半萜积累,但效果有限,主要表现为不同内生菌对不同倍半萜合成的促进作用不一。为了更好模拟茅苍术的原生微生态环境,本研究采用1株优势内生细菌Pseudomonas fluorescens ALEB7B与几株效果较好的内生真菌以不同组合方式接种,以期优化出对倍半萜含量具有促进效果的复合菌。结果如下:(1)内生细菌ALEB7B和内生真菌Cunninghamella sp. AL4、Gilmaniella sp.AL12、Acremonium strictum AL16的组合效果最优;(2)复合菌对组培、田间时期的植物生长和倍半萜含量促进效果均明显,其中在田间越冬后的第二年孕蕾期,总倍半萜含量增加了136%;(3)从内源激素水杨酸、生长素的变化和倍半萜合成关键基因HMGR、DXS的表达方面,分析了复合菌如何从组培到田间的整个生长周期内影响茅苍术倍半萜产生。     

复杂型先天性心脏病诊断：低剂量大螺距双源CT 成像与超声心动图的对比研究

目的:探讨和比较双源CT和超声心动图对于复杂型先天性心脏病的诊断价值。方法:入选先心病患者47例,均使用SOMA TOM Flash CT扫描仪和超声心动图行心血管检查。所有入选患者均由外科手术或心血管造影证实。比较双源CT与超声心动图的诊断准确率。结果:经手术或心血管造影证实心内结构异常共38处,双源CT诊断34处,诊断准确率89.47%,超声心动图诊断37处,诊断准确率97.37%。两种方法比较无统计学差异;证实心外结构异常69处,双源CT诊断66处,诊断准确率95.65%,超声心电图诊断56处,诊断准确率85.51%,双源CT诊断准确率高于超声心动图(X2=7.07,P=0.008)。结论:双源CT诊断心外结构异常的诊断准确率高于超声心动图,两者结合有利于全面、准确的诊断复杂型先天性心脏病。     

软骨膜对兔耳颗粒软骨定形移植物组织学及生物力学特性的影响

目的:通过高密度聚乙烯模具构建兔耳颗粒软骨定形移植物,并观察软骨膜对其组织学及生物力学特性的影响。方法:8只雄性新西兰大白兔,取一侧耳软骨后制备定形颗粒软骨移植物,分为保留软骨膜及去除软骨膜组,埋植于背部皮下,术后1月、2月、3月取材进行组织学及生物力学检测。结果:无论保留软骨膜与否,颗粒软骨均可长为具备一定形状和机械强度的均一整体,保留软骨膜组中可观察到Ⅱ型胶原及胶原纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化阳性染色的新生软骨组织,其破坏应力和弹性模量均高于去除软骨膜组(P0.05)。结论:高密度聚乙烯模具可以很好地完成颗粒软骨定形移植物的构建,保留软骨膜的颗粒软骨具有更好的组织学活性,以及更佳的生物力学特性。     

弯齿风毛菊花部器官的海拔变异及其与种子质量和数目的关系

以青藏高原东北缘的12个弯齿风毛菊居群为对象,分析花部器官随海拔的变异机制及其与种子质量和数目的关系.结果表明:当海拔在3500~4500 m时,花丝长、花药长、花柱长和花柱分支长分别为0.52~1.01、0.23~0.63、0.74~1.58和0.11~0.22 cm,且均随海拔的升高而显著增长,而花粉数量(26.5×10^4~73.5×10^4)显著下降;花粉数量与花丝长、花柱长及花柱分支长均呈显著负相关,花柱长与花丝长呈显著正相关;种子数目与花丝长、花柱长及花柱分支长均呈显著负相关,与花粉数量呈显著正相关;百粒重与花丝长、花柱长及花柱分支长均呈显著正相关,与花粉数量呈显著负相关.随着海拔的升高,弯齿风毛菊在花期选择延长花部器官的长度来增大昆虫对花粉的携带量和输入量,到果期生产出具有更强竞争优势和生存能力的大种子(质量大、数量少)来提高适合度.     

MACF1与成骨细胞骨架之间的相互关系研究

采用激光共聚焦显微术研究微管微丝交联因子（MACF1）与成骨样细胞（MD63及MC3T3）微丝／微管骨架、黏着斑之间的相互关系．结果表明,MACF1不连续地分布于微管纤维上,与微丝骨架部分共定位于胞质中,在很多的成骨细胞中可见MACF1分布于骨架相关的粘着斑处：细胞松弛素B影响了MACF1在成骨细胞中的分布,并有使其向细胞核周围及核内转位的趋势．秋水仙素对MACF1的分布无明显的影响．转染了siRNA—MACFl的MG．63细胞微丝骨架纤维分布不连续、微管骨架纤维分布紊乱．这些结果提示MACF1不仅起交联微丝及微管细胞骨架的作用．而且还可稳定细胞骨架：成骨细胞MACF1的分布更依赖于微丝骨架的完整性．     

食药用菌功能性β-葡聚糖荧光法测定研究

以酵母功能性β-1,3/1,6-葡聚糖为对照品,利用苯胺蓝和β-1,3/1,6-葡聚糖特异结合荧光特性,研究了葡聚糖荧光法测定时的各影响因素,建立了荧光法测定食药用菌功能性β-葡聚糖的方法。pH9.6缓冲液,80℃条件下避光反应15min,室温30min冷却后,398nm激发波长,508nm发射波长,20℃下进行荧光测定。在测定浓度2-20μg/mL范围内,荧光强度与浓度具有良好的线性关系(R2=0.9977),其中检出限为45μg/L,测定精密度和加样回收率良好,相对标准偏差(RSD)分别为1.86%和3.40%,并与酶法进行了比对验证,一致性良好,且荧光法更为节约时间和成本,并对灰树花菌、巴氏蘑菇、香菇和鲍氏针层孔菌四种食药用菌β-葡聚糖提取样品进行了葡聚糖纯度和提取率测定。     

双孢蘑菇耐热相关基因的表达载体构建及转化研究

构建了双孢蘑菇Agaricus bisporus耐热相关基因028-1全长cDNA序列的双元表达载体,通过农杆菌介导转化双孢蘑菇非耐热菌株8213,经潮霉素抗性筛选和PCR鉴定,获得了一批双孢蘑菇转基因菌株。对10株转基因菌株进行了不同温度下的草管走菌试验,结果显示大部分转基因菌株的耐热性能有较为明显的提高。     

外源一氧化氮对铅胁迫下高羊茅生长和无机离子含量的影响

研究了外源一氧化氮对Pb2+1000mg/L胁迫下高羊茅生长及无机离子含量变化的影响。结果表明,与对照相比,单用Pb2+胁迫使高羊茅鲜重、干重、含水量、根系活力和无机离子如NO-3、K+、Na+、Ca2+、Mg2+和Mn2+含量均下降,而其根的丙二醛含量和质膜透性、Pb2+含量均上升;与单用Pb2+胁迫相比,用SNP(Sodium Nitroprusside,NO供体)0.01～1mmol/L处理Pb2+胁迫下高羊茅,其鲜重、干重、含水量、根系活力、无机离子如NO3-、K+、Na+、Ca2+、Mg2+和Mn2+含量呈先上升后下降的变化趋势,而根的丙二醛含量和质膜透性、Pb2+含量呈相反的变化趋势。综合结果表明,外源NO对Pb2+胁迫下高羊茅生长影响具有剂量效应,适宜浓度能缓解铅毒害,提高耐铅性。     

家蚕动力蛋白轻链8基因克隆及其对重力的响应

克隆家蚕动力蛋白轻链8(dynein light chain 8, Dlc8)基因开放阅读框架并对其序列进行分析．探讨Dlc8基因在家蚕胚胎、头、丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪和马氏管等组织中的分布．在细胞水平,应用RT-PCR和实时定量RT-PCR方法分析大梯度强磁场(large gradient high magnetic field, LGHMF)重力模拟环境(0 g、1 g、2 g)对家蚕Dlc8基因表达的影响．在整体水平,应用实时定量RT-PCR方法分析Dlc8基因在家蚕胚胎反转期和整个胚胎期对LGHMF模拟失重环境的响应．克隆的家蚕Dlc8基因开放阅读框架长度为270 bp,编码89个氨基酸．家蚕Dlc8基因推导的氨基酸序列与拟南芥(Arabidopsis thaliana)、果蝇(Drosophila melanogaster)、线虫(Caenorhabditis elegans)、热带爪蟾(Xenopus tropicalis)、小鼠(Mus musculus)、人类(Homo sapiens)等6个物种Dlc8基因的氨基酸序列同源性分别为67%、96%、91%、95%、92%、92%．信号肽分析结果显示,该蛋白质为非分泌蛋白,不存在糖基磷脂酰肌醇锚定位点．家蚕Dlc8分子质量与等电点分别为10.34 ku和6.81．Dlc8基因在家蚕的胚胎、头、丝腺、中肠、皮肤、血液、脂肪、马氏管中稳定表达．在细胞水平,家蚕Dlc8基因表达对重力变化较敏感,对磁场变化不敏感．在整体水平,Dlc8基因在家蚕胚胎发育的不同时期对重力的响应不同．整个胚胎发育期Dlc8基因在模拟失重条件下表达量与对照组接近．家蚕Dlc8基因可以作为重力生物学效应研究的分子靶标．该研究为深入探讨家蚕Dlc8基因重力生物学效应机制奠定了基础．     

冬凌草活性部位逆转SGC7901/ADR细胞多药耐药性的体外研究北大核心CSCD

以SGC7901和SGC7901/ADR为细胞模型,检测了冬凌草活性部位与化疗药物联用后,对SGC7901/ADR耐药性的逆转效应;冬凌草活性部位处理细胞后,检测耐药细胞内阿霉素的蓄积变化、耐药细胞P-糖蛋白(P-gp)的表达水平以及mdr1基因的表达变化。结果显示,冬凌草氯仿部位和乙酸乙酯部位可以有效提高化疗药物阿霉素在SGC7901/ADR细胞内的蓄积,降低P-gp的表达,降低mdr1基因的转录。冬凌草逆转胃癌耐药细胞SGC7901/ADR多药耐药性的活性部位是冬凌草氯仿部位和乙酸乙酯部位,其逆转作用与抑制P-gp的表达相关。