棉花体细胞增殖和胚胎发生中的细胞程序性死亡

棉花组织培养中愈伤组织褐化可能与细胞程序性死亡(PCD)有关.对棉花组培中不同时期的愈伤组织DNA进行琼脂糖电泳,观察到:仅在第一次愈伤组织继代后10 d左右和愈伤组织第一次继代到分化培养基中培养10 d左右,愈伤组织的DNA产生了180 bp左右的片断或其整数倍片断大小的DNA带,呈DNA梯(DNA ladder)状电泳,说明在这两个时期PCD达到了高峰.在这两次PCD高峰后1周均出现愈伤组织大规模的褐化死亡.显微镜观察到第一次PCD发生高峰的愈伤组织存在许多管状、内含物少的细胞,这些细胞分布在愈伤组织的边缘和内部;第二次PCD发生高峰观察到体细胞胚胎分化、PCD细胞的木栓化和水渍化.对体细胞胚胎分化时期的原生质体进行荧光染色(DAPI),荧光显微镜下观察到发生细胞程序性死亡的细胞核浓缩、染色质凝聚、结块、边缘化和形成PCD小体.     

毕赤酵母发酵生产T4溶菌酶的中试研究

研究了T4溶菌酶的中试发酵放大生产。在200L发酵罐中毕赤酵母诱导表达T4溶菌酶蛋白,发酵液蛋白表达量达到1.69g/L,酶活达到192U/mg;制得冻干酶粉211.1g。经测定粗酶粉中T4溶菌酶的含量达到68.9%,酶活为182U/mg,总收率达到66%,成功建立了一条T4溶菌酶的中试发酵生产工艺线路。     

稻田土壤氧化态有机碳组分变化及其与甲烷排放的关联性

稻田土壤有机碳是甲烷排放的关键底物之一,不同研究者由于采取的有机碳研究方法不同而得出稻田甲烷排放与土壤有机碳关系的结论不一.为明确影响稻田甲烷排放的土壤有机碳组分,设计了稻田施用不同外源有机碳(稻草还田、鸡粪和猪粪)的田间试验,对稻田甲烷排放和土壤有机碳组分的动态变化及其关联性进行监测和分析.结果表明,猪粪处理的甲烷排放与化肥处理无显著差异,而鸡粪和稻草2个处理的甲烷排放分别比化肥增加1.67倍(P＜0.05),2.69倍(P＜0.05);甲烷排放量与土壤易氧化有机碳含量显示相同顺序:稻草＞鸡粪＞猪粪＞化肥;通径分析表明,土壤易氧化有机碳组分1(被33 mmol/L KMnO4氧化的有机碳)与甲烷排放直接相关,其他有机碳组分仅通过组分1间接作用于水稻生育后期甲烷排放,且排放量较低.由此推断,易氧化有机碳组分1是甲烷排放的主要底物,通过有效措施降低肥源中易氧化态有机碳组分1是减排甲烷的关键技术之一.     

21世纪生物医学的三个主要发展趋势

<正>随着科学技术的发展和社会的进步,人类的预期寿命在20世纪有了显著的增长,各发达国家陆续进入老龄化社会。中国社会在改革开放的30年时间里取得了突出的成就,在20世纪末也进入了老龄化社会。老龄化社会带来了疾病谱的重大转变,即慢性非传染性疾病(慢性病)显著增加——年龄是慢性病发生的主要风险因素。世界银行在2015年一份题为《长寿与繁荣：东亚和太平洋地区的老龄化社会》的报告中指出,全球65岁以上的老年人中的36%目前居住在东北亚地区;预计到2030年,癌症、心脏病和糖尿病等与高龄相关的慢性病患者将占这个地区全部疾病患者的85%。     

我省又一批单位获实验动物生产、使用条件或质量合格证

四川省实验动物管理委员会最近又为成都制药三厂动物室、四川养麝研究所Beagle狗场、成都中医学院实验动物科、四川制药厂动物室颁发了生产或使用条件合格证。并为四川     

多巴胺转运体基因多态性与癌症患者性别关系研究

目的:探讨多巴胺转运体基因(DAT1)多态性与新疆汉族癌症患者性别的关系.方法:采用聚合酶链式反应和VNTR多态性分析技术对新疆汉族癌症患者DAT1多态性进行检测,比较各组间等位基因和基因型频率分布的差异及组内男女性别等位基因和基因型频率分布的差异.结果:在213例无关癌症人群个体中,DATI VNTR多态性表现出6～12倍重复的7种等位基因,共检出7种基因型.男女癌症患者的DATl VNTR等位基因及基因型频率的差异均无显著性(P>0.05).结论:多巴胺转运体基因(DAT1)3'端40bp可变串联重复多态性可能与汉族癌症患者的性别无关.     

食源性致病菌多重PCR快速检测方法建立与应用

利用PCR技术,建立多组多重食源性致病菌PCR快速检测方法。设计受试菌特异性引物,反应体系中加入多对引物和多种DNA模板,采用正交试验优化PCR反应条件,进行特异性引物的PCR扩增。建立了多组多重食源性致病菌PCR快速检测方法,方法中所检测受试菌株和模拟样品均出现特异性扩增条带,结果与实际相符。所建立多组多重PCR快速检测体系符合设计要求,可以应用于食源性突发公共卫生事件的应急检测和日常样品检测工作。     

叶酸、嘌呤、嘧啶拮抗剂

叶酸、嘌呤、嘧啶拮抗剂在肿瘤治疗和核酸代谢的研究上占有重要地位。叶酸拮抗物(Folic acid antagonist)的研究至今不过十余年的历史,1936—1946年间Lewisohn 氏等曾用乳酸桿菌的发酵产物作用于小鼠自发性乳癌,可使1/3的癌肿消退。1944年 Hitchings 及其同事证实其作用成分为蝶氨苯甲酰三谷氨酸(Pteroyltriglutamicacid)。1946年 Angier 及 Subbarow 等合成此物质获得成功,叶酸及其衍生物的研究有了进一步的发展。1947年 Farber 及其同事试用蝶氨苯甲酰三谷氨酸(“teropterine”)及蝶氨     

四种常见猪肠道病毒多重RT-PCR检测方法的建立及临床应用

【背景】猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(transmissible gastroenteritis virus,TGEV)、猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)和猪轮状病毒(porcine rotavirus,PoRV)是当前导致猪群发生病毒性腹泻的4种主要病原,并且常发生混合感染。【目的】建立一种可鉴别诊断这4种腹泻病毒病的检测方法,对于临床诊断具有重要意义。【方法】针对PEDV的M蛋白基因、TGEV的N蛋白基因、PDCoV的N蛋白基因和PoRV的VP7蛋白基因分别设计特异性引物,进而构建相应的重组质粒标准品。通过对PCR反应条件优化,建立可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的多重RT-PCR检测方法。随后通过敏感性、特异性和重复性试验对该方法的有效性进行验证。【结果】敏感性试验结果显示,对PEDV-M、TGEV-N、PDCoV-N和PoRV-VP7重组质粒标准品的最低检测下限分别为1.75×10²、1.5×10³、1.6×10²和1.6×10²copies/μL;特异性试验结果显示,仅可检出本研究中的4种靶病毒,而猪群常见病毒CSFV、PRRSV、PCV2和PRV未能检出。重复性试验结果显示,选取10⁸、10⁶和10⁴copies/μL 3个不同浓度的重组质粒作为模板,其他条件不变,分别进行5次重复试验,5次试验均扩增出清晰、均匀的条带。对山东各地区送检的52份临床腹泻样品通过建立的四重RT-PCR方法进行检测,发现PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的阳性率分别为37%(19份)、6%(3份)、10%(5份)和25%(13份)。其中PEDV和PoRV混合感染2份(4%),PEDV和TGEV混合感染2份(4%),PEDV和PDCoV混合感染1份(2%)。通过单重RT-PCR对该多重RT-PCR临床样品检测结果进行重复验证,结果显示多重RT-PCR与常规单重RT-PCR结果符合率为100%。最后随机挑选5个检测为阳性的临床样本进行测序验证,结果均为相应病毒的基因片段。【结论】本研究建立了可同时检测PEDV、TGEV、PDCoV和PoRV的四重RT-PCR检测方法,研究结果为临床4种猪腹泻病毒病的鉴别诊断及流行病学调查提供了技术手段。     

激素治疗IgA肾病大鼠对骨密度和TLR4信号通路的影响

摘要 目的：探讨糖皮质激素治疗IgA肾病大鼠对骨密度变化和TLR4信号通路活性的影响。方法：选择5月龄SPF级SD雄性大鼠共60只,平均体重185 g,随机分为4组,分别为对照组、非激素组、激素低剂量组和高剂量组,每组各15只。采用牛血清白蛋白灌胃+ CCl4和蓖麻油皮下注射+脂多糖尾静脉注射法复制IgA肾病模型,周期为9周。非激素组采用盐酸贝那普利片（1.041 mg/kg/d）,激素低剂量组采用甲泼尼龙15 mg/kg/d,高剂量组采用甲泼尼龙30 mg/kg/d,持续灌胃10周至实验结束。检测各组尿红细胞计数和24h尿蛋白定量,血清肌酐和尿素氮,采用双能 X 射线吸收法测量股骨的骨密度值,Micro-CT骨扫描并计算骨小梁微观结构参数,包括骨小梁数、骨小梁厚度和体积分数,Western blot法检测骨组织中Toll 样受体 4（TLR4）、髓样分化因子（MyD88）和核因子-κB（NF-κB）蛋白。结果：各组大鼠均存活至实验结束,激素低剂量组和高剂量组治疗后尿红细胞计数、24 h尿蛋白定量、血清肌酐和尿素氮均显著降低,骨密度值、骨小梁数、骨小梁厚度和体积分数也显著下降,但是TLR4、MyD88和NF-κB蛋白表达量明显升高（P＜0.05）。结论：糖皮质激素治疗IgA肾病能够改善临床症状和肾功能,但同时降低了骨密度和改变了骨小梁结构,可能与骨组织TLR4信号通路的异常激活有关。