磁性固定化胰蛋白酶的催化特性及应用的研究

详细研究了磁性固定化胰蛋白酶的催化特性,并与溶液酶进行比较,发现胰蛋白酶经固定化后最适pH值向碱性方向移动了1．0个pH单位,最适温度提高了5℃,K值略有增大。对该固化酶的热稳定性和操作稳定性也进行了研究,结果表明,胰蛋白酶经固定化后热稳定性明显提高,操作稳定性也得到了一定的改善,经3次重复使用后,活性保持43．8％,对啤酒澄清和裸皮软化显示较好的应用前景。     

檀香寄主根际pH值对檀香生长及其寄主偏好性的影响

为研究根际pH对檀香的生长和寄主偏好性的影响,用便携式酸度计检测了中国科学院华南植物园檀香园及附近的61种植物根部的pH值,并考察了檀香在不同pH梯度下的生长情况.结果表明,几乎所有优良寄主根部的pH值均为50～6.0;在pH 5.5的培养条件下,檀香茎和根的长度明显比在其他pH值下的要长.这说明檀香生长的最佳根际pH...     

肠道病毒EV71 IgM抗体参考品的建立

目的建立肠道病毒EV71 IgM抗体检测用参考血清盘。方法通过收集手足口病感染早期患者的咽拭子和血清,对咽拭子病毒进行分离、鉴定、基因分型,通过血清中和试验及酶联免疫吸附试验(捕获法)的验证,确定EV71 IgM抗体阳性样品,组建EV71 IgM抗体参考血清盘,并经3家实验室对该参考血清盘进行协同标定和确认。结果 12名患儿的咽拭子中均分离到EV71病毒,在RD细胞上引起细胞病变。通过套式PCR扩增、序列测定后进化树分析确认均为流行的C4基因亚型。每名患儿的双份血清均可中和EV71病毒,抗体效价为1∶512~1∶2048。通过捕获法进行EV71 IgM抗体检测结果均为阳性。以此12份样品为原料制备EV71 IgM抗体阳性参考品,同时以12份EV71 IgM抗体阴性血清制备阴性参考品,建立了由12份阳性参考品、12份阴性参考品、1份最低检出限参考品和1份精密性参考品组成的肠道病毒EV71 IgM抗体参考血清盘。通过3家实验室协同标定,各实验室间差异均无统计学意义。结论建立了EV71 IgM抗体检测参考血清盘,为相关检测试剂的质量控制和评价提供了参考标准。     

分枝杆菌质粒的提取

采用经典的碱裂解法从８株致病性分枝杆菌（其中包括两株结核杆菌耐药菌株）获得３个质粒,经凝胶电泳分析它们的大小分别为７．７ｋｂ、９．４ｋｂ、２３ｋｂ左右。     

血浆(1,3)-β-D-葡聚糖对深部真菌感染诊断的临床意义

目的研究血浆中(1,3)-β-D-葡聚糖检测和真菌培养对诊断深部真菌感染的临床应用价值。方法对我院2009年8月~2010年7月长期使用广谱抗菌药物、免疫抑制剂以及皮质类固醇激素等,且临床出现感染症状的1 868例住院患者,在其抽静脉血做(1,3)-β-D-葡聚糖检测的同时留取血液或痰、中段尿、脓等分泌物标本做真菌培养。通过回顾性调查,了解使用抗真菌药后患者临床症状是否缓解作为临床诊断标准,并以此为标准比较两种检测方法的差异。结果 1 868例患者中使用抗真菌药物后症状缓解757例,使用抗真菌药物后症状未缓解和临床未使用抗真菌药物症状缓解1 082例,无临床资料29例(剔除);实际有效病例1 839例。其中以20 pg/mL为临界值时(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测阳性778例,阴性1 061例,以50 pg/mL为临界值时(1,3)-β-D-葡聚糖含量检测阳性623例,阴性1 216例;真菌培养阳性457例,阴性1 382例。血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测试验分别以20 pg/mL和50 pg/mL为临界值时,均得到较好的敏感度(分别为89.3%,74.9%)和特异度(分别为90.6%,94.8%),阳性预测值(86.9%和91.0%)和阴性预测值(92.4%和84.4%)均较高,无显著性差别(P>0.05);真菌培养的敏感度(49.0%)较低但特异度较高(92.1%)阳性预测值和阴性预测值分别为81.2%和72.1%;两种方法联合检测后敏感度提高至93.0%,特异度为88.9%。结论 G试验的方法检测血浆(1,3)-β-D-葡聚糖较传统的真菌分离、培养与鉴定方法简便,快速,阳性率高,但有时发生假阳性。传统的真菌培养方法虽敏感性低,但特异性高,建议临床在诊断深部真菌感染时,同时行血浆(1,3)-β-D-葡聚糖检测及真菌镜检和培养等检查以提高侵袭性真菌感染诊断的敏感性和特异性。     

4PU—30对水稻叶片衰老与内源激素的调控

４ＰＵ－３０能显著地延缓水稻叶片衰老。根据叶片衰老过程中内源激素含量的变化,可明确减缓水稻叶片衰老期间内源ＡＢＡ含量的增加和内源ＺＲＳ,ＧＡＳ和ＩＡＡ含量的减少,使叶片中保持有较低水平的ＡＢＡ与较高水平的ＺＲｓ,ＧＡｓ和ＩＡＡ,是４ＰＵ－３０延缓水稻叶片衰老的主要调控机理。     

水痘-带状疱疹病毒糖蛋白E在昆虫细胞中的表达、鉴定及免疫原性分析

目的:利用昆虫-杆状表达系统建立表达和纯化分泌形式的水痘-带状疱疹病毒(varicellazoster virus,VZV)糖蛋白gE的方法,并鉴定其理化性质及免疫原性。方法:利用Gibson assembly同源重组试剂盒快速构建重组质粒pFastbac-VZV gE。在sf9昆虫细胞中鉴定序列优化前后表达量的差异,并在High FiveTM细胞中大量表达。通过Ni-NTA亲和层析方法得到高纯度gE蛋白,之后通过酶联免疫吸附试验等验证了其理化性质,并进行小鼠免疫分析其免疫原性。结果:构建了pFastbac-VZV g E1/2重组质粒,经过PCR及双酶切鉴定后均为阳性克隆。使用BAC/PAC试剂盒提取Bacmid转染sf9细胞制备杆状病毒,经Western blot检测,sf9细胞开始表达gE蛋白且随着病毒代次升高g E蛋白表达量增加。序列优化后表达量明显增加,但是大部分以胞内形式存在。通过Ni-NTA一步亲和层析获得纯度较高的gE蛋白,并与VZV单抗9C8具有较好的反应性。通过免疫小鼠产生高滴度抗体,且免疫荧光结果显示其血清可以与天然病毒上的gE抗原结合。结论:成功获得了杆状表达系统表达的gE蛋白并且纯化和鉴定了蛋白质的性质及免疫原性,为进一步研发具有自主产权的VZV亚单位疫苗研究奠定了基础。     

藜芦醇和吐温80对白腐菌产木质素降解酶的影响及在偶氮染料脱色中的作用

担子菌PM2在限氮液体培养下,分泌木质素过氧化物酶和锰过氧化物酶;藜芦醇、吐温 80的补充,提高了该菌锰过氧化物酶的产生,获得的最大锰过氧化物酶Mnp酶活为254.2u/L、190.2 u/L,分别是对照的3.4倍和2.5倍。选择三种偶氮染料,在染料体系下,进一步分析藜芦醇、吐温 80对担子菌PM2产过氧化物酶及染料脱色的影响。结果表明,担子菌PM2分泌的锰过氧化物酶Mnp与染料脱色有关,脱色程度受其分子结构特征影响;吐温80的补充,更有利于染料的脱色降解,48h后三种染料均可达到80%以上的脱色率。     

诊断性脑血管造影的术后并发症及其风险因素(附437例临床分析)

目的:观察脑血管造影患者的术后并发症,并分析影响并发症的风险因素。方法:437例动脉粥样硬化脑血管病、脑肿瘤、蛛网膜下腔出血、动脉瘤、动静脉畸形、癫痫、血管炎等的患者接受脑血管造影,观察术后24h以内发生的神经系统和局部并发症。用多因素分析方法确定与术后并发症相关的因素。结果:15例(3.43%)发生神经系统并发症,其中2例发生脑卒中并遗留永久残疾;2例死亡。手术造影侧穿刺部位血肿是最常见的并发症。与神经系统并发症相关的危险因素增包括动脉粥样硬化脑血管病,蛛网膜下腔出血,频繁TIA发作。结论:诊断性脑血管造影并发症发生率较低。具有并发症风险因素的患者应尽量减小手术创伤,加强术后观察。