过表达β 2-AR对心衰大鼠心肌细胞的保护作用及相关信号转导通路

目的:检测过表达β 2-AR蛋白的慢性心衰大鼠心肌细胞内与细胞存活相关蛋白的表达变化,探讨过表达的β 2-AR对心衰大鼠心肌细胞的保护作用的分子信号机制.方法:通过腹主动脉缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭(HF)模型并采用胶原酶消化法分离心衰大鼠心肌细胞,转染携带β 2-AR目的基因的重组腺病毒,通过免疫印迹方法检测正常细胞和心衰细胞内Gi-PI3K-Akt信号通路上关键蛋白的表达变化.结果:与正常大鼠心肌细胞相比,β 2-AR过表达促进了胞内Akt磷酸化水平的增加,而使得凋亡效应因子Caspase-3的激活减少(p＜0.05).结论:心衰大鼠心肌细胞过表达β 2-AR后,增加的B 2-AR通过Gi-PI3K-Akt信号对心肌细胞产生了保护作用.     

β2肾上腺素能受体过表达后大鼠心肌细胞收缩功能的改变及机制

目的:探讨大鼠心肌细胞过表达2-AR后心肌细胞收缩功能的改变及其可能机制.方法:采用胶原酶消化法分离培养大鼠心肌细胞,转染携带β2-A目的基因的重组腺病毒,通过免疫印迹方法检测细胞β2-AR蛋白表达的变化,通过ELISA方法检测细胞中cAMP水平的改变,采用单个细胞动态边缘检测系统测定细胞收缩功能的变化.结果:与正常心肌细胞相比,β2-AR的转染增加了细胞上β2-AR蛋白的含量(P＜0.05),并促进胞内cAMP水平的增加(14.76 3.15 pmol/ml vs 9.3 1.4pmol/ml,P＜0.05);进而增强了心肌细胞的基础收缩(8.203±2.596%vs 5.472±2.918%,P＜0.01),但不改变最大收缩(9.128±2.852%vs 9.366±2.646%).结论:β2-AR的过表达能够增加细胞内cAMP水平并改善心肌细胞的收缩功能.     

心衰大鼠心肌细胞β2-AR的表达与心功能改变的关系及机制

目的:探讨慢性心衰大鼠心肌细胞β2肾上腺素能受体(β2-AR)的表达变化,过表达β2-AR后心肌细胞收缩功能的改变及其可能机制.方法:通过腹主动脉缩窄术建立大鼠慢性心力衰竭(CCF)模型并采用胶原酶消化法分离心衰大鼠心肌细胞.转染携带β2-AR目的基因的重组腺病毒,通过免疫印迹方法检测正常细胞和心衰细胞β2-AR蛋白表达的变化,采用单个细胞动态边缘检测系统测定其收缩功能的改变.结果:与正常细胞相比,心衰时β2-AR蛋白的表达没有变化,转染β2-AR基因则使之表达增加(P＜0.05).与正常组相比,心衰组的基础收缩明显降低(3.955±1.684%vs5.472±2.918%,P＜0.01);过表达β2-AR逆转了心衰心肌细胞的基础收缩(5.882±2.208%vs3.955±1.684%,n=60,P＜0.01),但不影响心衰心肌细胞的最大收缩(9.366±2.646%vs9.066±3.509%).结论:心衰时大鼠心肌细胞BrAR的表达不变,但是其基础收缩功能降低,而β2-AR的过表达则能够改善心衰细胞的基础收缩功能.     

结核分枝杆菌PE＿PGRS15调控分枝杆菌细胞包膜结构与耐药性

【目的】研究结核分枝杆菌PE＿PGRS15的功能。【方法】构建过表达PE＿PGRS15蛋白的重组耻垢分枝菌酸杆形菌，通过细胞分级分离实验检测其细胞定位。通过涂布实验、扫描电镜和透射电镜观察细菌菌落形态、细菌表面形态及细胞包膜(cell envelope)结构。通过杀菌曲线法及微量肉汤稀释法检测重组菌对环境压力及抗生素的耐受性。通过染料摄取实验检测重组菌细胞壁通透性，并用气相色谱-质谱联用仪检测重组菌细胞壁脂肪酸谱。通过蛋白截短及融合实验分析PE＿PGRS15蛋白结构域的功能。【结果】PE＿PGRS15蛋白定位于重组菌细胞壁，其表达影响重组菌菌落形态和细胞包膜结构，增强重组菌对环境压力和抗生素的耐受。PE＿PGRS15的表达导致重组菌细胞包膜脂肪酸含量增加，也降低了重组菌的细胞壁通透性。PE＿PGRS15蛋白的PE结构域负责将该蛋白转运到细胞表面，而PGRS结构域介导重组菌对压力条件和抗生素的耐受。【结论】PE＿PGRS15蛋白可能通过调控耻垢分枝菌酸杆形菌细胞包膜的结构进而影响细菌菌落形态、细胞壁通透性及耐药性，为解析PE/PPE家族蛋白的功能奠定了一定的基础。