抗肠炎沙门氏菌单链抗体制备及其特异性分析

目的:利用基因工程技术制备抗肠炎沙门氏菌的单链抗体.方法:从抗肠炎沙门氏菌单克隆抗体的杂交瘤细胞中纯化RNA,反转录后扩增出抗体的重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)基因片段,采用重叠延伸的方法,用柔性多肽Linker接头(Gly4 Ser)3按VL-Linker-VH方式将VH基因和VL基因拼接成单链抗体基因片段后,连接到pGEX-4T-1载体上,进行重组转化.挑取阳性克隆,经IPTG诱导后,通过GST柱进行亲和层析,最后利用ELISA检测抗体的活性.结果:成功构建了表达抗肠炎沙门氏菌单链抗体的基因工程菌株,经SDS-PAGE和ELISA检测结果表明,诱导表达的单链抗体scFv分子量约为60 kDa,其能特异与肠炎沙门氏菌结合,但与副甲伤寒沙门氏菌、鸭沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌有轻度交叉反应.结论:成功构建了抗肠炎沙门氏菌单链抗体的表达菌株,表达的单链抗体scFv可作为沙门氏菌的检测的候选抗体分子.     

桃园生草对桃树上主要害虫及天敌生态位的影响

调查了种植白三叶草桃园(生草区)与不种草桃园(对照区)桃树上主要害虫及天敌数量,并对其生态位进行了测定.结果表明:生草区桃树害虫的水平生态位、垂直生态位和时间生态位宽度最大的分别是桃红颈天牛(0.999)、茶翅蝽(0.964)和茶翅蝽(0.795),而对照区其值分别是0.918、0.792和0.632;生草区桃树天敌的...     

AM真菌和施磷量对不同叶位烟叶生长和化学成分的交互效应

采用土培试验研究了不同施P水平下接种AM真菌摩西球囊霉（Glomus mosseae)和苏格兰球囊霉（Glomus caledonium)对烤烟不同叶位烟叶生长和化学成分的影响,结果表明,接种AM真菌提高了烟草根系菌根侵染率,增加了烟叶总干重,其中对下位和上位烟叶效果明显,中位叶因菌种而异,接种G.mosseae显著提高了中位叶总糖,烟碱,P,K含量和上位叶K含量,而接种G.caledonium则提高了下位叶总糖和上位叶总糖,还原糖,烟碱含量,促进了上,下位烟叶P含量的增加,烟叶N,Mg,Fe,Zn含量因菌种和施P量不同而变化,施P量为0．056－0．112g/kg^-1土时接种效果最好。     

值得警惕的一种大豆害虫——银纹夜蛾

银纹夜蛾(Phytometra agnata Staud.)群众众叫“豆青虫”、“豆步曲”,是近年来我区新发展起来的一种大豆害虫。1960—1962年曾连续发生,1961年8月初全县发生面积达13万多亩,一般单株虫口3-5头,多至数十头,大豆被害减产15％左右。 经过两年的饲养观察,初步结果整理如下。 (一)生活习性 银纹夜蛾在我县一年发生1—2代。6月下旬始见成虫,7月后蛾量增多。成虫白天潜藏在茂密的豆棵间,傍晚开始飞舞,飞翔很快,阴天白昼也有活动。趋光性弱。7月中旬为产卵盛期,卵散产于豆叶背面,经三、五天孵化幼虫。7月中下旬幼虫     

乳酸菌Enterococcuse faecalis TN-9低温蛋白酶的提纯及性质

对产自乳酸菌Enterococcuze fecalis TN-9的蛋白酶,进行了硫酸铵沉淀,DEAE—Sephadex A-25以及DEAE Cellulofine A-500离子交换层析的3步纯化和特性研究。纯化酶Native PAGE显示1条蛋白带。SDSPAGE和凝胶层析分子量分别为30ku及69ku。纯化酶最适作用温度为30℃,最适作用PH为7．5～8．0,在pH6．0～9．5和45℃以下条件下稳定,在0℃下显示了6．1％的相对活性,60℃以上热处理完全失去酶活。该酶被EDTA-2Na,Hg^2＋、Cu^2＋、Ni^2＋、Ag^2＋、Co^2＋及Pepstatin A不完全抑制。Zn^2＋对蛋白酶具有明显的激活作用。纯化酶作用于偶氮酪蛋白的Km和Vmax分别为0．098％和72mg／（h·mg）。该酶为N末端VGSEVTLKNS的明胶酶（Gelatinase）的一种,性质属于低温蛋白酶。     

AtWRKY40参与拟南芥干旱胁迫响应过程

以拟南芥(Arabidopsis thaliana)野生型、AtWRKY40缺失突变体和过表达株系为材料,研究AtWRKY40在植物干旱胁迫响应过程中的作用及其生理和分子机制。结果显示,AtWRKY40受干旱胁迫诱导;AtWRKY40缺失导致干旱胁迫下种子萌发率降低,叶片失水加剧,而AtWRKY40过表达植株呈现出相反的表征;干旱胁迫下,At WRKY40缺失突变体植株叶片过氧化氢(H_2O_2)、超氧阴离子(O_2~-·)及丙二醛(MDA)含量显著高于野生型及其过表达株系,超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性、脯氨酸(Pro)和可溶性糖含量以及相关基因AtCu/ZnSOD、AtCAT1、AtP5C1S、AtG6PD5和AtBAM4表达量显著低于野生型,同时AtWRKY40过表达株系的渗透物质含量和保护酶活性及其基因表达量则高于野生型。由此说明,AtWRKY40通过调节植株抗氧化能力及渗透调节能力参与拟南芥干旱胁迫响应过程。     

植物绿叶粗蛋白在SDS-PAGE中向负极泳动的富含苯丙氨酸的碱性蛋白的测定

提取菜心(BrassicacampestrisL.ssp.chinensis(L.)Makinovar.utillisTsenetLee)和生菜(LactucasativaL.)绿叶粗蛋白,经SDS-变性后作醋酸纤维素薄膜电泳,证实这两种蔬菜含有分别向负极泳动和向正极泳动的蛋白。菜心绿叶粗蛋白经SDS-PAGE电泳后,从负极电泳缓冲液中获得向负极泳动的蛋白,其苯丙氨酸含量为57.05%,碱性/酸性氨基酸残基的比例为3.04,表明是富含苯丙氨酸的碱性蛋白。     

环介导等温扩增技术对解脲脲原体的临床检测

目的建立并优化环介导等温扩增(LAMP)技术对解脲脲原体(U.urealyticum)的检测,并应用于临床样本分析。方法针对U.urealyticum的urease基因设计LAMP引物;研究LAMP的最适温度、最佳检测时间及灵敏度和特异度;与传统PCR检测进行方法学比对。结果 LAMP技术检测U.urealyticum的最适温度和最佳时间分别是61℃和60 min,并且具有良好灵敏度和特异度,较普通PCR检测的灵敏度高出1 000倍。临床样本检测中,PCR和LAMP技术达到的灵敏度分别为25.00%和87.50%。两种方法的特异度均为100.00%。结论 LAMP与PCR相比在基层检测和大规模筛查方面有显著的优势和巨大的利用价值。     

抗热应激添加剂对奶牛产奶量、生理及血液指标的影响

为研制一种有效的奶牛抗热应激添加剂,将50头健康荷斯坦奶牛随机分为5组,对照组饲喂基础日粮,4个试验组饲喂基础日粮添加不同抗热应激添加剂,连续饲喂30d,测定产奶量、生理及血液指标。结果显示：中草药组、中草药＋纤维素酶组、中草药＋缓冲盐组、中草药＋缓冲盐＋纤维素酶组比对照组产奶量分别提高24．8％、27．9％、37．2％、39．5％;中草药剂和缓冲盐可减缓热应激奶牛的体温（P〉0．05）、呼吸和心率（P〈0．05）的升高,缓解外周血中自细胞数（WBC）、淋巴细胞数（LYM）、单核细胞数（MXD）、淋巴细胞百分比（LYM％）和单核细胞百分比（MXD％）（P〈0．05）的变化;添加中草药剂组肾上腺皮质醇（Cort）、促肾上腺皮质激素（ACTH）、三碘甲状腺原氨酸（T3）和甲状腺素（T4）水平基本稳定（P〉0．05）;使用中草药添加剂组谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）活性比对照组下降较慢（P〈0．05）,添加中草药加缓冲盐组GSH—Px活性可基本保持稳定（P〉0．05）。试验表明中草药剂可明显增强奶牛抗热应激力,和瘤胃缓冲盐同用效果更好,和纤维素酶同用作用不明显。     

中华蜜蜂精巢和卵巢差异表达基因分析

[目的]在蜂群中,雄蜂与蜂王都有着发育完全的性腺,但两者达到性成熟的时间却是不同步的.本研究旨在探究中华蜜蜂Apis cerana cerana雄蜂与蜂王生殖腺的基因表达差异.[方法]利用Illumina测序技术对中华蜜蜂雄蜂精巢与蜂王卵巢转录组差异表达基因(differentially expressed genes...