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47kD尾连蛋白(tail interacting protein of 47kD, TIP47)是PAT蛋白家族成员,主要定位于脂滴(lipid droplets, LDs)表面及细胞质中,参与脂质代谢调节及病毒复制、转运、组装、释放过程,而且人类免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus, HIV)、丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)和登革病毒(dengue virus, DENV)等多种病毒感染与此过程密切相关。现就目前TIP47在HIV、HCV、DENV等多种病毒感染中所起的作用作一概述,旨在为抗病毒治疗及疫苗研制提供新的思路与途径。 相似文献
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丙型肝炎病毒ns3区全长基因在大肠杆菌中的高效表达及纯化 总被引:1,自引:0,他引:1
利用PCR技术扩增HCV ns3基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX—HTb连接,转化感受态细胞Ecoli DH50α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX—HTb—ns3并测序;pProEX—HTb—ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni^2 -NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患阳性血清做为一抗行Western—Blot证实特异性和抗原性。结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His—NTA纯化后获得目的蛋白,Western—blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性。HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础。 相似文献
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以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5α、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP—N3中,构建重组质粒pEGFP—N3-ns5a和pEGFP—N3-ns5a—△ISDR。对重组质粒进行酶切分析和序列测定。将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定。经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR。RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达。以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP—N3-ns5a和pEGFP—N3-ns5α—△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCV NS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料。 相似文献
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杨桃园桔小实蝇的防治适期研究 总被引:2,自引:0,他引:2
杨桃园桔小实蝇种群数量动态具有明显的规律,且与杨桃果实的成熟期密切相关。通常3月实蝇种群数量开始上升,4月~10月为发生盛期,其间出现3—4个发生高峰,11月次至年2月虫量较低。桔小实蝇对杨桃果实的成熟度具明显选择性,偏好硬度(成熟度)在89度以下的果实。单个果实中约有6个产卵孔、30头幼虫,杨桃从被害到落果时间长度一般为9d。经分析,发现产卵孔数和落果中的幼虫数量、产卵孔数与落果时间长度之间显著相关,建立了两者间关系方程。在以上研究基础上,确定了杨桃园桔小实蝇防治的一些关键时期。 相似文献
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转运RNA衍生小RNA(tRNA-derived small RNAs, tsRNAs)是一类来源于tRNAs的新型非编码小RNA,广泛存在于动物、植物的组织细胞以及体液中,在胚胎发育、细胞命运决定、机体免疫调控、获得性遗传以及包括癌症在内的多种人类疾病的发生发展中发挥着不可或缺的作用。然而,由于tsRNAs含有从其tRNAs前体继承而来的多种RNA修饰,这些RNA修饰一方面增加了tsRNAs信息编码的深度,丰富了tsRNAs在细胞内功能和作用机制的多样性,另一方面也增加了其功能研究的复杂性。近年来, tsRNAs的作用机制成为该领域的研究焦点和关键点。该文系统性地综述了tsRNAs的最新研究进展,包括其生成途径、检测方法、作用机制以及生物学功能的多样性,并探讨了tsRNAs作为生物标志物在临床疾病诊断中的应用前景。 相似文献
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目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γI、L-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响。结果免疫后第10 d检测结果表明,2μg/只和10μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1 000,100μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000。第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1 000,肌内注射降低为1∶500。2μg/只和10μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100μg/只肌内注射免疫。但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平。在不同的效靶比情况下,10μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100μg/只肌内注射免疫。结论基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫。 相似文献
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构建HCV la/1b嵌合型全长cDNA克隆,进行体外转录,脂质体法转染HepG2细胞,以RT-PCR法检测HCV正、负链RNA,Western印迹检测HCV蛋白表达.结果表明,细胞在转染后8代(约35d)内,能间断检测到HCV正、负链RNA以及相对分子质量约70000的HCV NS3蛋白,证明该HCV嵌合体可以在细胞中复制和表达.本研究表明含有该嵌合型全长cDNA的质粒可以为后续HCV的研究提供大量可重复的性质均一的病毒模板,有助于深入了解HCV的复制机制. 相似文献