精制狂犬病疫苗纯化方法的比较研究

地鼠肾细胞狂犬病疫苗原液经１００ ｋＤ 膜浓缩 ３０ 倍,分别选用（１）ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析法;（２）Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００ ＨＲ 分子筛选层析法;（３）二次蔗糖等密度区带离心法对其进行纯化。用此三种方法各试制３ 批精制疫苗,结果表明,经ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析纯化后疫苗总蛋白含量减少９９％ 以上,抗原比活性提高１５９ 倍,抗原回收率达５０％ ,纯化疫苗以ＮＩＨ 法效力测定平均为５．４ ＩＵ／２ｍ ｌ;经Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００ＨＲ 分子筛层析纯化后疫苗总蛋白含量减少 ９８％ 以上,抗原比活性提高４１ 倍,抗原回收率达６３％ ,纯化疫苗效力平均为６．２５ ＩＵ／２ｍ ｌ;经一次蔗糖等密度区带离心法纯化后疫苗总蛋白含量减少９８％ 以上,抗原比活性提高３２１ 倍,抗原回收率达４３％ ,纯化疫苗效力平均为６．１８ ＩＵ／２ｍ ｌ,三种纯化疫苗均符合Ｗ ＨＯ 规程要求。     

MMTV SQg的分子结构及其T细胞免疫特异性

ＭＭＴＶ是一种典型的逆转录病毒,有内源性,外源性之分,其３‘－ＬＲＴ端有一个ＯＲＦ,５’－ＬＴＲ端在不同的ＲＦ中与ｅｎｖ基因的３‘－端相互交叠,编码ＳＡｇ在氨基酸水平上有８５％左右的同源性。     

X射线对小牛胸腺脱氧核糖核酸的隐藏破坏作用

(1)用X射线照射小牛胸腺DNA溶液,以还原粘度和紫外吸收光谱的变化为指标,证明射线对DNA大分子除有直接显露的降解之外,还可导致对76度保温不稳定性的出现。这反映了结构上隐藏破坏的存在。隐藏破坏与所接受照射的剂量成比例地增加。(2)按Zamenhof法制备的DNA样品储存液中合有“保护物质”。在“保护物质”的存在下,DNA溶液可耐受6×10~4r的照射而无直接显露的降解发生。但隐藏破坏却不可避免,在一定剂量下可以单独地存在,并随剂量之增加而发展,当剂量增加到一定程度时,显露的降解随之出现。(3)“保护物质”是可透析的,它具有抗射线的作用,而不是保全已遭受降解的DNA的大小外形。实验结果表明“保护物质”可能是钙-柠檬酸盐。讨论了钙-柠檬酸盐保护作用的机制。(4)比较隐藏破坏单独存在和与直接显露的降解同时存在的实验结果表明,隐藏破坏的本质包括了:1)主链的单侧打断,2)部分氢键的破坏,3)残余氢键不稳定性的增加。在三者之间有平行的比例关系。主链的打断可能是后二者出现的原因。分子的直接降解可能又是隐藏破坏积累的结果。(5)在“保护物质”存在下照射DNA,为人工制造隐藏破坏,研究DNA的结构与功能提供了一个简便的方法。     

布氏潜蝇茧蜂对橘小实蝇幼虫寄生作用的研究

在试验室条件下研究了布氏潜蝇茧蜂Fopius vandenboschi(Fullaway)的寄生习性。结果表明:该寄生蜂嗜好寄生低龄的橘小实蝇幼虫;橘小实蝇幼虫的密度对布氏潜蝇茧蜂的寄生有明显的影响;被寄生的幼虫数随寄主自身密度的增加而增加,当寄主幼虫密度达每果片30只以上时,寄生数量的增加幅度就趋于下降,用Holling圆盘方程模拟为Na=0.9051N/(1 0.0163N)。此外,布氏潜蝇茧蜂的自身密度对寄生作用也有影响,随着寄生蜂数量的增加,寄生蜂的发现域逐渐变小,用Hassell-Varley方程表示为α=0.4655P-0.5807。     

口服结核Ag85A-CD226 DNA疫苗在小鼠脾与肠道的表达水平检测

目的了解结核Ag85A-CD226 DNA疫苗经灌胃方式接种小鼠后在脾淋巴细胞与肠道的表达情况。方法将构建的pcDNA3.1-Ag85A-CD226、pcDNA3.1-Ag85A和pcDNA3.1-CD226真核表达质粒转化DH5α感受态大肠杆菌,扩增并提取纯化质粒,用脂质体包裹制成DNA疫苗。经灌胃方式将制备的DNA疫苗接种C57BL/6小鼠,设置Ag85A-CD226疫苗组、Ag85A疫苗组、CD226疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组。采用间接免疫荧光法检测Ag85A和CD226在肠道的表达。采用流式细胞术检测脾CD4+T细胞、CD8+T细胞和NK细胞的CD226表达。结果 CD226在Ag85A-CD226疫苗组脾脏CD4+T细胞和NK细胞的表达均明显强于Ag85A疫苗组、CD226疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P0.01);CD226在Ag85A-CD226疫苗组脾脏CD8+T细胞的表达明显强于Ag85A疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P0.01),与CD226疫苗组相比虽有所增加,但差异无统计学意义(P0.05)。CD226在Ag85A-CD226疫苗组小肠派氏淋巴结表达明显强于Ag85A疫苗组、CD226疫苗组、pcDNA3.1质粒组和生理盐水对照组,差异具有统计学意义(P0.01)。Ag85A只在Ag85A-CD226疫苗组和CD226疫苗组小肠固有层表达,且在Ag85A-CD226疫苗组的表达明显强于CD226疫苗组,差异具有统计学意义(P0.01)。结论 Ag85A-CD226 DNA疫苗接种后,CD226在脾淋巴细胞和肠道表达增强,Ag85A在肠道表达增强,CD226的表达增加会增强Ag85A在肠道的表达水平。     

MADS-box 基因家族基因重复及其功能的多样性

基因的重复(duplication)及其功能的多样性(diversification)为生物体新的形态进化提供了原材料。MADS-box基因在植物(特别是被子植物)的进化过程中发生了大规模的基因重复事件而形成一个多基因家族。MADS-box基因家族的不同成员在植物生长发育过程中起着非常重要的作用, 在调控开花时间、决定花分生组织和花器官特征以及调控根、叶、胚珠及果实的发育中起着广泛的作用。探讨MADS-box基因家族的进化历史有助于深入了解基因重复及随后其功能分化的过程和机制。本文综述了MADS-box基因家族基因重复及其功能分化式样的研究进展。     

优雅蝈螽转录组和基因组浅层测序结果中SSR位点鉴定、特征及分布规律

优雅蝈螽Gampsocleis gratiosa是一种在我国具有悠久人工饲养历史的鸣虫。简单重复序列(Simple sequence repeats,SSR)非常适用于种群遗传研究。本文运用MISA软件分别在优雅蝈螽转录组和基因组浅层测序结果中发现15 042和40 611个SSR位点。转录组中,双碱基型最为丰富5 444个(36.19%),其次为单碱基型4 785个(31.81%)和三碱基型4 273个(28.41%),而四碱基型514(5.83%)和五碱基型26(0.33%)极少,没有发现六碱基型。基因组浅层测序结果中,以三碱基型(38.89%)和四碱基型(38.43%)最为丰富,单碱基型(10.34%)和双碱基型(11.72%)次之,五碱基型(0.54%)和六碱基型(0.08%)最少。基因组浅层测序结果中SSR位点的密度为876.20个/Mb,约为转录组143.06个/Mb的6倍。利用primer 3_2.2.3搜索发现优雅蝈螽转录组和基因组浅层测序结果中侧翼序列满足设计引物条件的完整型SSR位点数分别为9 969个(70.18%)和21 437个(67.75%)。本研究加深了对优雅蝈螽基因组的认识和了解,并为下一步大量开发和筛选高质量微卫星标记提供数据支持。     

常用食品防腐剂抗菌作用的研究

采用杯碟法和琼脂平板点种法分别测定２０种常用食品防腐剂对３０株菌的抑菌圈直径和最低抑菌浓度,借此判断药剂抗菌力的大小。实验结果表明,在所测２０种防腐剂中,对细菌抑制力最强者是乙酸,对霉菌和酵母菌抑制力最强者是富马酸二甲酯。     

基于人类信号网络和表达谱数据研究静脉血栓复发机制

目的:静脉血栓是一种高复发风险和高致死率的疾病,其形成和复发的分子机制尚不明确。基于人类信号网络和基因表达谱数据可针对静脉血栓经华法令抗凝治疗后的复发机制进行研究。方法:结合表达谱数据和人类信号网络,设计差异模块筛选策略,通过功能分析、差异表达分析和已知血栓相关基因及药物靶基因的互作关联研究,获得与静脉血栓复发相关的显著差异模块。结果:最终获得8个与静脉血栓复发密切相关的显著差异模块,评估了华法令治疗静脉血栓的效能,提出了联合用药的3种可能途径。结论:应用本文提出的整合筛选策略,能识别与静脉血栓复发相关的模块,探究静脉血栓复发的分子机制和评估华法令的治疗效能。还提供了潜在的联合用药途径,这对治愈血栓、防治血栓复发及复发机制的研究具有重要意义。     

西花蓟马诱导的番茄植株防御反应对B型烟粉虱行为的影响

【目的】明确外来入侵害虫西花蓟马Frankliniella occidentalis (Pergande)取食诱导的番茄植株防御反应对B型烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius) B-biotype行为的影响, 探讨西花蓟马与B型烟粉虱的种间竞争机制。【方法】利用“Y”型嗅觉仪行为分析法、 选择性试验法, 研究了不同处理组合（健康植株CK vs烟粉虱为害植株B、 健康植株CK vs西花蓟马为害植株F、 烟粉虱为害植株B vs烟粉虱和西花蓟马共同为害植株B+F）下, 烟粉虱对不同处理植株的取食行为反应及寄主偏好的差异性, 并利用GC-MS分析了不同处理植株挥发性物质的差异性。【结果】“Y”型嗅觉仪行为分析结果表明, 在CK vs B和CK vs F两个组合中, 烟粉虱雌成虫对健康植株和昆虫为害植株的偏好性差异不显著; 而在B vs B+F组合中, 烟粉虱为害株对烟粉虱雌成虫具有极显著的引诱作用（P<0.01）。选择性试验结果表明, 在CK vs B和CK vs F这两个组合中, 烟粉虱成虫均偏好健康株并喜好在其上产卵（P<0.01）, 在B vs B+F组合中, 烟粉虱成虫偏好烟粉虱单独为害株并喜好在其上产卵（P<0.01）。GC-MS分析结果显示, 本实验收集到9种挥发性物质, 其中有5种烯萜类物质, 其相对含量高达90%以上。与烟粉虱单独为害株相比, 烟粉虱和西花蓟马共同为害株所释放的挥发性物质中, 对烟粉虱具有排斥作用的β-水芹烯显著升高, 而对其具有吸引作用的β-月桂烯却显著减少。【结论】综合分析认为, 西花蓟马诱导的番茄植株防御反应可以显著影响B型烟粉虱的寄主选择行为及产卵选择性。