新的重组蛋白表达系统——植物根分泌和叶分泌

多种基因工程抗体、酶、激素、血浆蛋白和疫苗等都已在植物的叶、茎、根、果实、种子以及植物细胞和器官中得到表达 ,然而提取和纯化始终是大规模利用植物生产重组蛋白的主要障碍 .Ｂｏｒｉｓｊｕｋ和Ｋｏｍａｍｙｔｓｋｙ等 (1999年和 2 0 0 0年 )依据内质网和内质网信号肽在蛋白质合成中的作用 ,把 3种重组蛋白 ,嗜热细菌来源的木聚糖酶、水母的绿色荧光蛋白和人胎盘分泌的碱性磷酸酶 (ＳＥＡＰ) ,定位到质外体中 ,通过植物根分泌和叶分泌途径获得表达 ,从而建立了 2种新的重组蛋白表达系统———植物根分泌和叶分泌 ,简化了分离和纯化程…     

小肽多拷贝基因表达载体的构建及其高效表达(英文)

介绍一种快速、高效构建小肽多拷贝基因表达载体的策略 ,并构建了相应的表达载体pETE coT .用人工合成的编码 2 8个氨基酸残基的胸腺素α1基因为模型 ,采用限制酶EcoT14I识别序列CCAAGG为小肽基因两末端序列 ,利用其酶切后可产生非镜相对称粘性末端 ,一次连接反应就构建出一系列不同基因拷贝数的表达载体 ;在小肽基因两端分别引进编码FactorXa和羟胺蛋白切割位点的序列 ,表达出的融合蛋白可被FactorXa和羟胺剪切出不残留任何外源氨基酸的小肽 .不同拷贝数的小肽融合蛋白在大肠杆菌BL2 1(DE3)中均获得高效表达 .     

土人参原生质体培养再生植株

分别由土人参（Ｔａｌｉｎｕｍ ｐａｎｉｃｕｌａｔｕｍ （Ｊａｅｑ．） Ｇａｅｒｔｎ．）组织培养再生苗的叶片和幼茎诱导的愈伤组织游离出原生质体．叶肉原生质体在培养中未能进行正常分裂,存活不过１ 周．愈伤组织原生质体在Ｐ４ 培养基中（Ｋ８ｐ＋ ２,４－Ｄ ０．２ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＮＡＡ １．０ ｍ ｇ／Ｌ＋ ＺＴ ０．５ ｍ ｇ／Ｌ＋椰乳５０ ｍ Ｌ／Ｌ＋ 葡萄糖０．５ ｍ ｏｌ／Ｌ）培养３ ｄ 开始第一次分裂,培养７ ｄ 时分裂频率为３６．７％ ． 愈伤组织再生率在液体培养中为０．３１％ ,在双层培养中为０．３４％ ． 愈伤组织在含有较低浓度的６－ＢＡ 的分化培养基上分化出不定芽． 幼苗生根后移栽到花盆中继续生长,２～３个月后开花结实,长出粗壮的肉质根． 再生小植株在试管中继代培养２～３ 个月开花结实． 研究结果还表明∶（１）愈伤组织在液体培养基或增殖培养基中培养时间过长,或继代次数过多均不利于分化．（２）较低浓度的６－ＢＡ （０．５～０．７ ｍ ｇ／Ｌ）对愈伤组织的分化是合适的．（３）ＧＡ３ 对幼苗的发育有促进作用． （４）多效唑（ＭＥＴ）对土人参试管苗有明显的壮苗和壮根作用     

大豆单细胞培养再生植株的研究

近些年来,大豆组织培养的研究进展较快。大豆花药,叶片,下胚轴、子叶节,茎尖等外植体均能再生植株。大豆单细胞和原生质体再生植株的研究对大豆的遗传操作和突变体选择都有重要意义。迄今,关于大豆单细胞培养再生植株仅李宝健等人在国外有过报道,而国内尚无成功的报告。本文用大豆幼胚子叶的愈伤组织分离出单细胞,经培养再生成植株。     

大连蛇岛蝮蛇类凝血酶在大肠杆菌中的表达与纯化

将编码大连蛇岛蝮蛇类凝血酶 (Gloshedobin)的基因克隆于表达载体pET-32a( + )中 ,以融合蛋白形式在大肠杆菌中获得表达。在 2 5℃下经 1mmol/LIPTG诱导 6h ,SDS-PAGE和蛋白质印迹分析表明 ,部分融合蛋白以可溶形式存在于大肠杆菌的细胞质中。针对金属螯合亲和层析分离某些含His-标签重组蛋白质时专一性不高 ,并且存在配基泄漏的缺陷 ,设计合成了以抗重组类凝血酶的鸡卵黄免疫球蛋白为配基的免疫亲和层析柱。通过疏水色谱OctylSepharoseFF ,IgY免疫亲和层析以及强阴离子交换色谱SourceQ等三步柱色谱分离纯化获得比活力为 454.7U/mg的重组蛇毒类凝血酶 ,活力回收率为 34.8%。蛋白质印迹分析和纤维蛋白原凝结活性分析表明 ,该表达产物具有相应的免疫活性和酶活性     

雌激素受体p在胃腺癌中表达的研究

目的：检测雌激素受体β（ERβ）在胃组织的存在状况并研究其在人胃腺癌中的作用。方法：使用免疫组化方法,在蛋白水平对配对的原发性胃腺癌患者的癌组织及其癌旁非癌组织的ERB亚型进行检测,采用20例正常胃粘膜作为对照。结果：ERβ蛋白在部分胃腺癌及其癌旁非癌组织表达,但ERβ阳性率及表达模式不同。与配对的非癌组织相比,部分癌组织发生了ERβ表达减少或丢失,而且ERβ表达减少与低分化程度相关（P=0．041）,丢失的ERβ仅见于低分化癌。结论：ERβ可作为识别某些进展期胃腺癌发生发展的标志物,ERβ表达改变在低分化癌中更常见,也提示ERβ阳性胃腺癌可能比ERp表达丢失者预后更好;另外,在非癌组织腺上皮存在E邢的表达提示在正常胃组织中ERB很可能具有一种保护性作用。     

新的抗流感药市场前景看好

在日本．一说到流感治疗药首先想到的就是罗氏集团公司旗下的中外制药公司销售的达菲（oseltamivir）。甚至有人说日本的消费量曾达到过达菲销售量的70％。据中外制药公司报告,2009年度达菲的销售额增加了9．1倍．金额达到762亿日元（1日元=0．0768元人民币．仅供参考,下同）。     

贯叶马兜铃的组织培养与快速繁殖

1植物名称贯叶马兜铃（Aristolochia delavayiFranch）。2材料类别腋芽。3培养条件基本培养基为MS。启动培养基：（1）MS＋NAA 1 mg·L-（-1）（单位下同）＋6-BA 0.5;增殖培养基：（2）MS＋NAA 0.5＋6-BA 2;生根培养基：（3）1/2MS＋IBA 0.5。以上培养基中均加入30 g·L-（-1）蔗糖、7 g·L-（-1）琼脂,pH 5.8。培养温度（25±3）℃,光照时间12 h·d-（-1）,光照强度40～50μmol·m-（-2）·s-（-1）。     

Bcl-2、PIM1、P53基因异常在弥漫大B细胞淋巴瘤中的预后价值

目的:探讨B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、PIM1及P53基因异常在弥漫大B细胞淋巴瘤(DLBCL)中的预后价值。方法:选取在2010年3月～2014年3月期间我院收治的DLBCL患者86例进行研究。采用间期荧光原位杂交检测Bcl-2、PIM1、P53基因。对患者进行为其5年的随访,采用Logistic多因素回归分析Bcl-2、PIM1、P53基因异常与预后的关系。结果:在86例患者中,29例(33.72%)患者存在P53基因缺失;27例(31.39%)患者发生Bcl-2基因多拷贝,3例(3.49%)患者发生Bcl-2基因易位;26例(23.26%)患者发生PIMI基因重排。各基因异常患者在性别、发病年龄、侵犯部位、LDH水平及β2-MG水平上比较,差异均无统计学意义(P0.05);但是各基因异常患者Ⅲ～Ⅳ期的比例显著高于Ⅰ～Ⅱ期,差异具有统计学意义(P0.05)。各基因异常组患者的无进展生存期(FPS)1年、总生存期(OS)3年比例显著低于各基因正常组,但在国际预后指数(IPI)评分指标上却显著高于各基因正常组,差异具有统计学意义(P0.05)。P53、PIMI及Bcl-2基因异常是患者的FPS、OS的独立影响因素。结论:Bcl-2、PIM1、P53基因在DLBCL患者的预后评估中具有重要的临床价值,且Bcl-2、PIM1、P53基因异常是患者预后不良的独立影响因素。