碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中DNA的探讨

采用碳酸钙沉淀法回收琼脂糖凝胶中的DNA,达到分离纯化目的,回收后的DNA可用于重组、PCR等研究。首先将含有目的DNA的琼脂糖凝胶用Nal溶液融解,然后加入cacl2,和NaHCO3,生成CaCO3,沉淀,DNA与cac03形成复合物,通过离心分离出沉淀复合物,利用稀酸溶解沉淀,再用无水乙醇沉降,即可回收目标DNA。利用该方法回收了质粒、毛白杨和转基因羊基因组DNA,同收率为20％～50％,0D260／OD280,为1．7～19,最大回收了21kb片段,最小回收250bp片段,回收后的DNA样品进行了PCR扩增和限制性内切酶反应,PCR可以扩增出目的片段,同时限制性内切酶可以将回收后的DNA切开,表明DNA质量良好。利用碳酸钙沉淀法可以回收琼脂糖凝胶中的DNA,此法简单、易行,较为有效。     

夜间增温对冬小麦根系生长和土壤养分有效性的影响

气候变暖存在明显的昼夜不对称性,夜间气温升高幅度显著高于白天.本研究采用夜间被动式增温系统,于2009-2010年在我国冬小麦主产区（石家庄、徐州、许昌和镇江）进行全生育期田间增温试验,研究了土壤pH值、速效养分和抽穗期冬小麦根系对夜间增温的响应.结果表明： 与不增温对照相比,夜间增温显著降低了土壤pH值和速效养分含量,并在一定程度上提高了根系干质量和根冠比.冬小麦整个生育期,夜间增温分别使石家庄、徐州、许昌和镇江试验点土壤pH值平均降低0.4%、0.4%、0.7%和0.9%,碱解氮含量平均降低8.1%、8.1%、7.1%和6.0%,速效磷含量平均降低15.7%、12.1%、19.6%和25.8%;速效钾含量平均降低11.5%、7.6%、7.6%和10.1%.增温处理下,石家庄、徐州和镇江试验点抽穗期冬小麦根系干质量分别平均增加31.5%、27.0%和14.5%;石家庄、许昌和镇江试验点抽穗期冬小麦根冠比分别平均提高23.8%、13.7%和9.7%.夜间增温可能通过改变土壤化学特性影响土壤养分供应和冬小麦生长     

温度对台湾红罗非鱼能量收支的影响

于１９９６年７－８月在盐度为１４的条件下,测定了台湾红罗非鱼（体重２５．３３４－２６．２２５ｇ）在水温为２２、２８和３４℃时的能量收支,结果表明,温度对台湾红罗非鱼的特定生长率,转化效率和最大摄食率均有显著影响,２８℃时上述各值均达到最大,分别为１．７９,６０．０１％和２．５９％Ｂ．Ｗ．ｄ＾－１;对吸收率无显著影响,对于物质的吸收率的平均值为６４．５８％、温度对食物能分配于能量支出各部分的比例有显     

产植酸酶菌株的筛选及其植酸酶基因的克隆

从土壤中筛选到产植酸酶活性较高的烟曲霉菌株WY-2,其植酸酶最适pH为5.5,最适温度为55℃。通过对烟曲霉WY-2植酸酶基因进行PCR扩增,获得了一个1.5kb大小的特异性产物,将其克隆到载体pMD18-T中。测序结果分析表明,该基因片段含有植酸酶基因完整的阅读框架(ORF),基因全长1459bp,其中包含一个61bp的内含子,编码465个氨基酸,有7个潜在的糖基化位点,5′端有一编码26个氨基酸的信号肽序列。该基因与已报道的烟曲霉ATCC34625植酸酶基因有91%同源性,编码的氨基酸序列同源性为91%。     

气候速度影响下中国周边海域鲨鱼保护优先区识别

鲨鱼在气候变化和人类活动等因素的影响下面临着种群衰退的风险,开展鲨鱼保护优先区研究是鲨鱼保护行动的重要工作.将气候速度引入鲨鱼保护优先区的识别过程,旨在阐明中国周边海域鲨鱼现状保护成效和保护空缺,并预测气候速度影响下的鲨鱼保护优先区空间格局及其变化趋势.以集成物种分布模型模拟的146种鲨鱼栖息地作为保护对象,以2015年至2100年两种气候变化情景下的气候速度作为保护的机会成本,基于系统保护规划理论模拟现状和未来情景下的鲨鱼保护优先区选址方案.研究结果表明：（1）长江口以南至台湾海峡和北部湾近岸海域为鲨鱼多样性分布的主要区域,台湾海峡区域亦为珍稀濒危物种的重要分布区;（2）在两种气候情景下,南海中南部将面临较高的气候变化风险,而长江口以南至珠江口的近岸海域气候速度均相对较低,提示了这些区域或能成为气候变化影响下的生物避难所;（3）现有保护区仅保护了1.33%的海域和不到4%的鲨鱼物种,尚存在较大的保护空缺.当保护海域比例提升至10%时,可覆盖绝大多数鲨鱼物种.而当比例提升至30%时,珍稀濒危物种的栖息地将得到有效保护;（4）气候变化影响下保护优先区选址将发生不同程度的变化,尤其是在中国南海区域,如在保护规划时兼顾气候速度,可在满足相似保护目标的前提下减少保护优先区内25%以上的气候压力,以使其具有较强的应对气候变化潜力。     

大连蛇岛蝮蛇类凝血酶基因在毕赤酵母中的克隆表达及分离纯化

根据同源性分析设计引物,通过RT-PCR方法从大连蛇岛蝮蛇毒腺总RNA中合成扩增出类凝血酶基因,之后将该基因克隆到表达载体pPIC9K中,经电激转化后整合至毕赤酵母细胞基因组中.经筛选得到甲醇快速生长型转化子His+Mut+在500 ml摇瓶中培养,甲醇诱导分泌表达.上清液中重组类凝血酶是通过两步柱层析得到:Q Sepharose FF和Benzamidine-Sepharose 4BCL.与天然蛇毒类凝血酶一致,分泌表达的重组类凝血酶具有较强的酯酶活性,但精氨酸甲酯如TAME的水解活性较弱.此重组类凝血酶在37℃中性溶液中保存过夜将分解成小肽,但在0℃下很稳定.该酶的最适pH为8.0.     

水稻扇型植硅体野生–驯化特征研究进展

近年来,植硅体分析方法被广泛应用于考古学领域,为世界农业起源、演化研究提供了新的手段和关键证据,其中在稻作农业起源和传播的研究中,水稻扇型植硅体对于发现、鉴定水稻遗存起到了重要的作用。研究农业起源的关键,是找到地质考古记录中的植物遗存,并准确鉴定野生–驯化特征,本文介绍了水稻扇型植硅体鉴定方法从定性到定量研究的历史,重点阐述了现代野生稻生长区、驯化水稻田、旱稻田表土中水稻扇型植硅体鱼鳞状纹饰研究的新进展,明确了野生、驯化水稻扇型植硅体研究中关于个体鉴定、选择和鱼鳞状纹饰计数的标准,在此基础上讨论了野生和驯化水稻扇型植硅体纹饰产生差异的可能原因和机制。希望通过本文的总结与讨论,能够使植硅体分析方法在作物起源和传播的研究中得到更准确、更广泛的应用。     

PCCA表达与肾透明细胞癌患者预后相关性

[目的]探究PCCA基因与肾透明细胞癌(KIRC)患者预后的联系。[方法]下载TCGA数据库中KIRC患者基因表达数据及临床信息,利用PCCA基因表达差异分析探究KIRC患者中PCCA的表达情况;生存分析测定PCCA基因表达与患者生存时间的联系;采用逻辑回归和Cox回归分析研究PCCA基因表达与患者grade、stage、T分期和M分期等临床特征的相关性;基因集富集分析(GSEA)测定KIRC患者中与PCCA表达相关的通路。[结果]基因表达数据包含肿瘤组织539例,正常组织72例;临床数据包含537例患者信息;患者肿瘤组织中PCCA表达显著低于正常组织(P <0.000);生存分析显示PCCA低表达组患者生存时间显著低于高表达组(P <0.000); PCCA表达与临床特征显著相关(P <0.000),肿瘤等级、分期越高,PCCA表达越低;丙酸代谢,赖氨酸减少,胰岛素信号通路、色氨酸代谢、过氧化物酶体以及丙酮酸代谢等通路富集于PCCA高表达组。[结论]对于539例肿瘤组织,72例正常组织及537例病人的数据进行初步分析发现,PCCA低表达组患者6年生存率低于50%,而...     

microRNA研究进展

小分子RNA家族中的一员——microRNA,是一段非常短的非编码RNA序列,对多种生物学过程起调控作用。本文试从microRNA的结构特点、合成及作用机制和功能等方面对microRNA的研究进展作一个简单回顾。