重组人TNFR-Fc基因水稻种子特异表达载体构建

重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白(TNFR-Fc)在治疗系统性自身免疫疾病中有很好的功效。目前TNFR-Fc主要通过动物细胞系生产,高昂的成本限制了其大规模应用。使用水稻种子作为生物反应器有望大幅度降低TNFR-Fc的生产成本,提供优质足量的目标产品。为使TNFR-Fc基因能够在水稻中高效表达,该研究拟构建经水稻偏好密码优化的TNFR-Fc基因的种子特异表达载体。通过对水稻和人全基因组密码子使用偏好性进行比较分析并按照水稻最优密码对TNFR-Fc氨基酸序列进行逐一优化,命名为Rf TNFRFc,通过全基因合成法制备该基因片段;同时采用PCR法扩增水稻种子特异表达启动子Glu-4,构建种子特异表达启动子驱动的Rf TNFR-Fc基因表达载体。结果表明:水稻与人多数氨基酸中密码子使用偏好性较为一致,但在L、S、P、R这4种氨基酸的密码子使用偏好性差异较大,优化时对这些密码子进行逐一替换,优化后30.8%的氨基酸密码子发生了变化;PCR扩增获得种子特异启动子,并连接至p CAMBIA1381载体,同时将全基因合成法制备的Rf TNFR-Fc基因连入该载体,PCR、双酶切验证及测序分析表明载体成功构建。该研究构建的Rf TNFR-Fc基因种子特异表达载体,为在水稻种子中大规模生产TNFR-Fc奠定了基础。     

人核糖核酸抑制因子基因在人脐血干细胞中的转染表达及对小鼠黑色素瘤基因治疗的研究

探讨人核糖核酸抑制因子 (hRI)基因在人脐血干细胞中的转染及表达情况 ,及转染后对小鼠B16黑色素瘤生长的影响。用免疫磁珠分离系统 (MACS)分离纯化人脐血CD34⁺ 细胞后 ,用制备的含hRI基因的逆转录病毒上清转染脐血CD34⁺ 细胞 ,采用克隆形成法和PCR法检测转染效率 ,Western blot和免疫荧光法检测基因表达 ,同时观察RI对荷瘤C57BL小鼠B16黑色素瘤生长的影响。应用MACS能高度纯化人脐血CD34⁺ 细胞 ,使分选后的脐血CD34⁺ 细胞纯度平均达96.15%。hRI基因能够转染到脐血CD34⁺ 细胞上 ,转染效率达 35% ,Western blot和免疫荧光检测转染后CD34⁺ 细胞hRI基因有阳性表达。经转hRICD34⁺ 细胞治疗 ,使小鼠B16黑色素瘤的生长速度减慢 ,成瘤率和瘤重降低 ,成瘤潜伏期延长。     

从小黑麦未授粉的幼嫩子房培养出小植株

通过未授粉子房的离体培养技术,在Ms无机盐十甘氨酸(7.7毫克/升)十天门冬素(1480毫克/升)十烟酸(0.15毫克/升) VB_1(0.25毫克/升)十VB_6(0.25毫克/升)十泛酸钙(0.25毫克/升) 2%蔗糖的固体培养基上,由小黑麦1号未授粉的幼嫩子房中诱导出愈伤组织,诱导率为53.4—66.8%。将愈伤组织转移到N_6 2.4-D(0.5毫克/升) 动力精(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂的培养基上,或在愈伤组织转移到N_6 2.4-D(2毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖 1%琼脂培养基前后,分别注入2毫升的N_6 IAA(1毫克/升) 6-BA(2毫克/升) 2%蔗糖的培养液,均可由愈伤组织分化出小植株,但幼苗移栽时多数未成活,仅一株抽穗开花,然而不育。本文还讨论了外源激素对植株分化的作用问题。     

浅谈儿科护理的临床带教

儿科护理工作面对的不仅是患儿,还有他们的家长。与成人各科室相比,儿科护理工作难度相对较大,这给儿科护理临床教学带来一定的困难。现将儿科护理临床带教中常遇到的问题和防范对策浅述如下。     

三角草属和冠毛草属的系统关系与地理分布的初步研究

根据外部形态上小穗的结构特征分析了针茅族中三角草属和冠毛草属的系统发育关系,并结合地理分布和生境条件对两属植物的起源中心进行了探讨。结果表明:三角草属和冠毛草属是针茅族中亲缘关系最近的类群;冠毛草属高级于三角草属;三角草属中的三角草是两属植物中最原始的种型,它可能既派生了属内的假冠毛草,同时又派生了属外绝灭了的黑穗茅祖种,而黑穗茅祖种又在自身属内间接衍生出了冠毛草和单蕊冠毛草;冠毛草属和三角草属皆起源于我国的西藏地区,其中三角草属可能源于西藏西部,冠毛草属可能源于西藏东部。     

一种改良的羊促滤泡激素(FSH)放射免疫测定方法

建立一种特异性强,灵敏度高的羊促滤泡激素放射免疫测定法不仅是畜牧业繁殖所必需的,也是进行生殖生物学研究所不可缺少的。而异源性羊放射免疫测定系统亦能作为测定灵长类如人、猴以及鼠等实验动物体内微量 FSH 之用,这是临床医学及计划生育等基础研究所需要的一种重要手段。目前,世界上除少数几个国家进行这方面的工作以外,在我国似未见有报道。     

小鼠Lin28基因的克隆及原核表达

目的探讨获取小鼠Lin28蛋白的方法。方法 提取8.5 d ICR小鼠胚胎mRNA后反转录为cDNA序列,用一对两端引入特定酶切位点（NcoⅠ及XhoⅠ）引物,从该cDNA中扩增出Lin28基因编码区序列;将获得的Lin28基因编码区序列克隆到pMD18-T载体上。对质粒双酶切回收其中Lin28基因片段,与pET-30a（+）载体相连接并转化Rosetta（DE3）型大肠杆菌,用IPTG诱导表达,最后采用SDS-PAGE对表达结果进行分析。结果对所克隆的Lin28蛋白编码区的DNA序列分析表明,Lin28 CDS区包括终止密码子在内为630 bp,与参照DNA（NM₁45833）相比同源性为99.37%,与参照氨基酸序列相比同源性为100%;在IPTG诱导下pET-30a（+）-Lin28重组质粒可表达与预期相符的约为27.5×103的蛋白质。结论利用克隆的小鼠Lin28基因,采用原核表达方法,成功获得小鼠Lin28蛋白,为进一步开展以重组蛋白诱导体细胞重编程研究奠定基础。     

植物lncRNA及其对低温胁迫响应的研究进展

低温限制植物生长区域,决定种植范围;导致作物产量和品质下降,严重可能造成植株死亡。为了抵抗低温胁迫,植物进化出了复杂的防御机制。lncRNA是存在于细胞核和细胞质中、由体内基因组转录产生的一类转录本。近年来,已证实lncRNA可以通过多聚腺苷酸化、与某些蛋白酶协同作用、与miRNA竞争性结合等方式来响应植物低温胁迫。本文就lncRNA的定义、来源、分类以及低温条件下lncRNA在模式植物拟南芥和农经作物中的研究进展进行了总结,期望为植物耐低温机理研究及植物耐冷分子育种提供参考。     

金川镍矿可培养细菌的多样性及耐镍菌株筛选

目的:了解金川镍矿可培养细菌的多样性和分离筛选有较高镍耐受性的菌株.方法:2007年8月从金川镍矿采集土壤样品,经过在TSA固体培养基上稀释涂布和划线分离得到55株纯培养菌株,对分离的所有菌株均提取基因组DNA,利用通用引物27F和1492R扩增得到16S rDNA的序列并测序,同时利用含不同浓度镍离子的MH培养基对所分离的菌株做了MIC分析.结果:55株菌属于11个属14个分类单元(16S rDNA序列相似性在97%以上为同一个分类单元),其中2株属于变形菌门γ亚群(Gammaproteobaaeria)(3.6%)、3株属于变形菌门α亚群(Alphaproteobacteria)(5.5%)、12株属于厚壁菌门(Firmicutes)(21.8%)、38 株属于放线菌门(Actinobacteria)(69.1%),优势菌是节杆菌属(60%),其中菌株C4、D3、D7的MIC最高达到20mmol/L.结论:金川镍矿有着较丰富的细菌多样性,菌株C4、D3、D7有潜在的应用价值.     

现代基础医学教育学生学习评价体系改革实践与思考

教育评价(education evaluation)的概念由泰勒(R.W.Tyler)于1930年提出,旨在通过一定手段了解教学质量和价值。随着经济科学文化的发展,社会对医学生的素质要求也越来越高,在基础医学教育过程中,单一的传统考试方式已经无法适应培养全面高素质人才的需要。形成性评价与终结性评相结合的学生学习评价体系,能够把单纯的教育评价转化为真正为了促进学生学习而进行的评价。可促进教学以学生为中心,并充分释放学生个性,使学生从被动学习转化为主动。