人eya2基因小干扰RNA表达载体的构建及表达

目的：设计并构建人eya2（eyes absent2）基因小干扰RNA（siRNA）的真核表达载体,并观察其沉默效果。方法：以人eya2为靶基因,以pSliencer2．1-U6 neo质粒为载体,根据人eya2的cDNA序列,设计含有小发卡结构的2条寡核苷酸序列,将其克隆到siRNA表达载体上;转化大肠杆菌DH5Ⅸ菌株,抽提质粒,测序分析;将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过荧光分析、Westemblot和转录活性实验检测其抑制效果。结果：重组体测序结果与目的序列相一致,证明构建了eya2 siRNA真核表达载体;荧光观察表明siRNA能显著减弱细胞中绿色荧光强度,抑制eya2基因表达;Westemblot分析证明构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性eya2基因表达;转录活性测定表明,构建的siRNA能有效抑制eya2基因表达。结论：构建了eya2 siRNA真核表达载体,该siRNA能有效地抑制eya2基因表达。     

TGF-β/Smads信号转导通路的研究进展

转化生长因子（TGF）-β超家族成员的重要生物学功能正日益引起人们的重视。受体介导的胞内信号转导研究近年有较大进展,特别是Smads蛋白介导的信号转导通路为阐明TGF-β超家族的作用机理提供了一条重要线索。TGF-β/Smads信号的转导受到机体严密的调控,并与其他信号通路存在着广泛的交叉对话效应。综述了对TGF-β/Smads信号转导通路的机制、调控,及其在维持机体正常生理功能和疾病发生中的作用的研究进展。     

XBP-1在乳腺癌细胞株中的表达及其在ERα信号途径中的作用

雌激素受体(ERα)在乳腺癌的发生发展过程中起重要作用。在乳腺癌中,人X盒结合蛋白-1(XBP-1)与ERα共表达,并在一些乳腺肿瘤中过表达。最近发现xBP—l有两种剪切形式,即XBP-1S和XBP-1U,但它们在乳腺癌细胞中的表达形式和在ERα信号途径中的作用还不清楚。采用RT-PCR技术,检测到XBP-1的两种剪切形式在正常乳腺细胞株和不同乳腺癌细胞株中均表达。利用ERE-LUC报告基因,检测XBP-1S和XBP-1U在乳腺癌细胞株MDA-MB-435中对ERα转录活性的影响表明,它们均以激素不依赖但以XBP-1剂量依赖的形式提高ERα的转录活性。XBP-1S的活性高于XBP-1U。XBP-1S和XBP-1U高效提高ERE-LUC报告基因的活性依赖于ERα的存在。结果提示．XBP-1S和XBP-1U可能通过ERα信号途径在乳腺癌的发生发展中起重要作用。     

慢病毒介导RNA干扰HPIP蛋白抑制肿瘤细胞增殖

目的:建立高效稳定的造血相关的PBX相互作用蛋白质(HPIP)小干扰RNA(siRNA)细胞导入方法,检测HPIP的表达对肿瘤细胞生长增殖的影响。方法:构建人HPIP慢病毒siRNA干扰载体,将重组质粒转染人胚肾293T细胞,通过实时定量RT-PCR及Western印迹分析检测Lenti-H1 HPIP siRNA的干扰效果;将Lenti-H1 HPIPsiRNA与4个包装质粒共同转染293T细胞,包装成慢病毒后,感染宫颈癌HeLa和肝癌HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选2周后,收集细胞进行Western印迹检测;用结晶紫实验检测其对肿瘤细胞生长增殖的影响。结果:构建的Lenti-H1 HPIP siRNA能有效抑制HPIP的表达;结晶紫实验显示,慢病毒介导的HPIP siRNA导致细胞增殖的显著抑制。结论:慢病毒介导的HPIP敲减能明显抑制肿瘤细胞的增殖,HPIP可能是一个潜在的肿瘤治疗新靶点。     

含VEGF启动子的报告基因的构建及雌激素受体对其活性的影响

目的：构建含血管内皮生长因子（VEGF）基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并检测其在雌激素受体作用下的转录活性。方法：以乳腺癌细胞系MCF-7基因组为模板,扩增VEGF启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中。用脂质体介导的基因瞬时转染法,将重组正确的报告基因载体转染293T细胞,检测重组质粒中荧光素酶报告基因的表达。结果：酶切鉴定和DNA序列分析表明构建了正确的pGL3-basic—VEGF报告基因载体;转录活性实验表明构建的报告基因载体具有启动子活性,雌激素受体α（ERα）能以剂量依赖的方式升高VEGF启动子调控下的报告基因的转录。结论：克隆了VEGF启动子,为ERα共调节子的功能研究奠定了基础。     

杏芎氯化钠注射液联合依达拉奉对急性脑梗死患者神经功能、脑血流灌注及氧化应激水平的影响

摘要 目的：探讨杏芎氯化钠注射液联合依达拉奉对急性脑梗死（ACI）患者神经功能、脑血流灌注及氧化应激水平的影响。方法：随机将2018年1月至2019年7月我院收治的120例ACI患者分为两组,均给予常规神经内科治疗,对照组（60例）在常规治疗基础上给予依达拉奉静脉滴注2周,观察组（60例）在对照组基础上加用杏芎氯化钠注射液滴注两周。观察两组临床疗效和安全性,并比较治疗前后神经功能、认知功能、残疾程度、脑血流灌注以及氧化应激水平的差异。结果：观察组治疗总有效率均高于对照组（P＜0.05）。观察组治疗后美国国立研究院脑卒中评定量表（NIHSS）、改良RANKIN量表（MRS）评分、脑缺血区平均通过时间(MTT)、峰值时间 (TTP)、丙二醛(MDA)、晚期氧化蛋白产物(AOPP)低于对照组（P＜0.05）,简易智能精神状态检查量表(MMSE)评分、脑血流量(CBF)、脑血容量(CBV)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、总抗氧化能力(T-AOC )高于对照组（P＜0.05）。两组不良反应率比较无统计学差异（P＞0.05）。结论：杏芎氯化钠注射液联合依达拉奉治疗可有效地改善ACI患者神经功能,增加缺血区脑血流灌注量,改善氧化应激,提高临床疗效。     

雌激素受体与Ⅰ型胶原蛋白存在相互作用

目的:利用酵母双杂交技术筛选与雌激素受体(ER)αAF1转录激活结构域相互作用的蛋白,为乳腺癌发生、发展机制的研究奠定基础。方法:将编码ERαAF1的cDNA片段克隆到诱饵蛋白载体pGBKT7中,以构建的pGBKT7-ERα-AF1为表达靶蛋白的质粒,筛选人乳腺文库。将筛选到的含Ⅰ型胶原基因的质粒与表达ERα和ERβ不同结构域的质粒共转化酵母细胞,验证Ⅰ型胶原与ERαAF1作用的特异性。结果:经酶切鉴定,证实重组质粒pGBKT7-ERα-AF1含有目的基因片段;Western印迹证实ERαAF1在酵母中获得表达;酵母双杂交筛选得到与ERαAF1相互作用的Ⅰ型胶原蛋白。酵母细胞共转化实验证实,Ⅰ型胶原蛋白与ERα和ERβ的AF1结合,但与ERβ的DBD、AF2不结合。结论:Ⅰ型胶原与ERα和ERβ的AF1及ERβ的DBD存在相互作用。     

由质粒R91-5:: Tn501, R68.45和Rp4: :mini-Mu所引起的条纹状假单胞菌染色体转移

假单胞菌是一类具有多种代谢功能的革兰 氏阴性菌，在工、农和医方面都具有一定的作 用。近年来人们对它作了广泛的研究，在遗传 学方面也有不少的工作^[10]，但是，由于缺少适当 的遗传学工具，对其它的假单胞菌还研究得很 少。我们为了对维生素C前体一2-酮基一古龙酸 的产生菌之一— 条纹状假单胞杆菌(Pseudomonas striata）进行遗传学研究，试验了不同质粒 对该菌染色体基因转移的作用，发现R91-5:: Tn501, R68.45和Rp4: : mini-Mu等质粳都有 明显的促进作用，为构建该菌的遗传图等提供 了方法。     

由质粒R91-5::Tn501、R68.45和Rp4::mini-Mu所引起的条纹状假单胞菌染色体转移

假单胞菌是一类具有多种代谢功能的革兰氏阴性菌,在工、农和医方面都具有一定的作用。近年来人们对它作了广泛的研究,在遗传学方面也有不少的工作,但是,由于缺少适当的遗传学工具,对其它的假单胞菌还研究得很     

无尾两栖类性腺发育研究进展

脊椎动物的性腺发育一直是生物学领域研究的热点,无尾两栖动物因其胚胎发育的独立性和易观察性而成为发育生物学研究领域的良好材料,并取得了许多成果.本文综述了无尾两栖类原始性腺形成、性腺分化、精巢和卵巢的发育,以及配子发生等方面的研究进展.无尾两栖类原始性腺形成主要发生在鳃盖褶和后肢芽形成时期,不同物种略有不同;性腺分化通常...