USP1通过调控E2F1对膀胱癌细胞增殖和周期的作用研究

该文探讨了泛素特异蛋白酶1(USP1)对膀胱癌细胞增殖和周期等生物学行为的作用,并进一步探索其作用机制。通过分子克隆技术构建膀胱癌T24细胞USP1过表达细胞株; CRISPRCas9技术构建膀胱癌UMUC3细胞USP1敲除细胞株; CCK8和克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力;划痕实验检测细胞迁移; PI染色流式细胞术检测细胞周期;转录组测序检测USP1敲除后基因表达差异及其相关的功能与信号通路;双荧光素酶报告基因检测USP1对信号通路的影响,并通过免疫印迹技术进行验证。结果显示, USP1过表达可以促进膀胱癌细胞增殖,敲除后显著抑制了膀胱癌细胞的增殖和克隆形成及迁移能力,促进S期细胞阻滞。转录组测序结果显示, USP1敲除后差异表达基因共4 522个,其中上调基因2 078个,下调基因2 444个。KEGG分析结果显示,这些基因涉及多个方面,包括细胞周期调控、细胞信号转导、转录翻译、蛋白折叠降解、自噬凋亡等。Hallmark数据库分析结果显示,差异表达基因与E2F信号通路密切相关。双荧光素酶报告基因显示, USP1过表达后, E2F1信号通路明显上调并且呈剂量依赖式,免疫印迹结...     

1968−2014年中国甲型H3N2流感病毒PB1基因进化分析

【目的】分析季节性H3N2流感病毒PB1基因序列的变异情况,揭示H3N2流感病毒PB1基因的分子特征与进化趋势。【方法】对1968?2014年中国地区82株人H3N2毒株、2012?2014年江苏省分离的81株甲型H3N2流感病毒、6株SIV和4株AIV H3N2亚型PB1、PB1-F2基因进行分子进化分析。【结果】1968?2014年中国H3N2流感毒株PB1核苷酸和氨基酸相似性分别为90.91%?100%和96.91%?100%。系统进化树分析,1968?2014年共173株H3N2流感病毒总体上分为4个分支,2002?2014年分离毒株位于第IV分支上,1968?1994年分离毒株位于第II和III分支;猪源H3N2亚型分布于第I、II、IV分支上;分子特征显示PB1氨基酸52、113、179、216、576、586、619、621、709位在2002年以后发生适应性改变,替换了原来的氨基酸;PB1-F2基因编码截断型蛋白长度有52、34、25、24、11 aa (猪源),PB1-F2蛋白毒力关键位点上未出现高致病性特征突变。【结论】自1968年起H3N2亚型PB1基因变异逐步趋于稳定,且PB1-F2截断型毒株正逐渐成为一类新的进化特征,但PB1基因与其他亚型之间发生重配以及关键毒力位点的变异仍应是监测的重点。     

顾及土地利用强度和生态-经济权衡的四川省陆地生态系统碳储量预测与热点分析

中国致力于在2060年前实现碳中和,为缓解气候变化的全球性目标贡献力量。人类活动引起的土地变化是造成碳排放的主要原因之一。四川省森林资源丰富,具有较高的经济增长潜力和重要的生态地位,是中国实现碳中和的关键区域之一。为从土地管理的角度为中国的碳中和提供政策支持,本文在顾及土地利用强度和生态-经济权衡的情景下预测了四川省2030年的土地变化,提出了顾及土地利用强度的陆地生态系统未来碳储量估算方法,并估算了四川省2030年的碳储量。结果表明,四川省若能在未来平衡经济效益和生态效益,可在2030年同时实现经济生产总值(相对于2020)增加约34%和碳储量增加约3%。为实现上述目标,四川省未来具体需加强西北部高原温带湿润/半湿润地区和高原亚寒带半湿润地区的林地和湿地的保护与扩张,并促进以成都为核心的四川省东南部中亚热带湿润地区城市的均衡发展。     

大豆异黄酮对大鼠骨骼肌纤维组织形态及肌收缩蛋白表达的影响

为了探究SIF对肌肉生长的影响,我们用6周龄SD雄性大鼠作为实验对象,运用苏木精–伊红染色法、免疫组织化学法和实时荧光定量PCR法研究不同浓度大豆异黄酮(soybean isoflavone,SIF)作用下的雄性大鼠肌纤维形态学变化和α-肌动蛋白(α-actin)、肌球蛋白(myosin)及其m RNA表达量的变化。苏木精–伊红染色结果显示,中、高剂量组肌纤维直径极显著高于溶媒对照组(P0.01)。免疫组织化学结果显示,中、高剂量组α-actin表达量极显著高于溶媒对照组(P0.01);myosin表达量高剂量组极显著高于溶媒对照组(P0.01),中剂量组显著高于溶媒对照组(P0.05)。实时荧光定量PCR结果显示,目的基因α-actin和myosin m RNA的表达量变化与蛋白表达基本一致。以上结果表明,SIF能够通过促进α-actin和myosin蛋白及m RNA在肌肉中的表达,使雄性大鼠肌纤维增粗。可为大豆异黄酮改善肌肉收缩、促进骨骼肌纤维增粗提供理论指导和实验依据。     

第一滴和第二滴末梢血血糖值差异性的多中心临床研究

目的:本研究旨在探讨在洗手消毒和不洗手消毒两种情况下,第一滴与第二滴末梢血血糖值之间的差异,以及第一滴末梢血血糖值与对照血糖值之间的差异,及此差异对临床治疗决策的影响。方法:研究于2014年5月20日至5月29日在全国四个城市的四家糖尿病专科医院中同步进行,共纳入住院糖尿病患者240例,分别测定洗手消毒以及不洗手不消毒情况下第一滴和第二滴末梢血的血糖值,使用Wilcoxon符号秩和检验方法比较第一滴与第二滴末梢血血糖值及第一滴末梢血与对照血糖值,利用误差栅格分析(Error Grid Analyze,EGA)图分析第一滴与第二滴末梢血血糖值及第一滴末梢血与对照血糖值的一致性。结果:分别获得洗手消毒和不洗手消毒情况下的血糖监测结果 1183对和715对。无论是否洗手消毒,第一滴与第二滴末梢血的血糖值以及第一滴末梢血与对照血糖值之间的差异均具有统计学意义(P值均为0.000)。在洗手消毒和不洗手消毒情况下,第一滴与第二滴末梢血血糖值偏差小于20%的百分比分别为98.6%和97.8%,落于EGA图的A区;第一滴末梢血与对照组血糖值的偏差小于10%的百分比分别为98.2%和97.6%,在EGA图中,落于A区的百分比分别为99.8%和99.6%。结论:在糖尿病的自我管理和临床实践中,无论是否洗手消毒,使用第一滴末梢血进行血糖监测已经足够准确可靠,且更为方便快捷。     

天麻共生菌——蜜环菌的培养及其在福建的最适菌材与最适生态变种的探讨

天麻(Gastrodia elata Bl.)属兰科(Orchidaceae)多年生草本。是一种重要的常用中药。在我国已有两千多年的药用历史。天麻含香荚兰醇(Vanillyl alcoh01)、维生素A等。能益气,定惊,去风湿,通经脉,强筋骨;治四肢拘挛、半身不遂、眩晕、头痛及惊痛等症。     

基于SRAP标记的甜瓜耐盐种质资源遗传多样性分析

研究不同耐盐程度甜瓜种质资源的亲缘关系和遗传多样性,为甜瓜种质资源有效利用提供理论依据。该试验以不同耐盐程度的27个甜瓜品种为材料,利用SRAP标记分析甜瓜种质资源的遗传多样性,从364对引物组合中筛选出24对扩增清楚且多态性丰富的引物,共扩增出415个清晰的位点,其中多态性位点241个,多态比率达58%。平均观测等位基因数(Na)为1.588 0,平均有效等位基因数(Ne)为1.347 0,平均Nei's基因多样性指数(H)为0.201 3,平均Shannon's信息指数(I)为0.301 0,表明供试甜瓜具有丰富的遗传多样性。UPGMA聚类结果显示:遗传相似系数在0.36～1.00之间,遗传相似性系数在0.72时,可将27个甜瓜品种划分为4个类群,耐盐型甜瓜在其中3个类群有分布,中等耐盐型甜瓜在4大类群中均有分布,盐敏感型均集中在第Ⅰ类群,表明耐盐型和中等耐盐型甜瓜种质的遗传多样性比盐敏感型种质丰富。遗传相似系数与UPGMA聚类结果的Cophentic矩阵相关系数为0.749,说明聚类分析结果较准确。研究认为,耐盐型甜瓜的遗传多样性较丰富,要得到耐盐的杂种优势品种,需要融入更多遗传关系较远的新种质。     

膜型基质金属蛋白酶亚家族和基质金属蛋白酶-2在人恶性造血细胞株中的表达谱及其相关性

为探讨不同恶性血液病中膜型基质金属蛋白酶（memberane-type matrix metalloproteinases, MT-MMPs）和基质金属蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2,MMP-2）的表达差异,用半定量RT-PCR检测了13株不同谱系恶性造血细胞株中MT-MMPs和MMP-2的mRNA表达差异.明胶酶谱法分析各细胞株MMP-2的酶活,并用流式细胞术检测了MT1-MMP蛋白的表达,用SPSS10.0分析了各基因的表达与细胞来源的相关性和各基因相互间表达的相关性.结果提示,各种MT-MMPs和MMP-2在13株细胞中呈现不同的表达谱,其中MT2、MT4、MT1-MMP和MMP-2表达较广泛,而MT3、MT5、MT6-MMP在检测的细胞株中较少表达.统计分析显示,MT-MMPs和MMP-2的表达与细胞的来源无明显的相关性（P>0.1）,而MT1-MMP和MMP-2的表达有相关性（P<0.05）.同时也发现,MT3-MMP和MT5-MMP的表达有相关性（P<0.05）.MT-MMPs在恶性造血细胞中的表达差异,提示它们在不同类型的血液系统肿瘤发展中发挥各自独特的作用.另外,MT1 MMP和MMP-2,MT3-MMP和MT5-MMP之间表达的相关性提示,它们在功能上密切相关.     

细胞衰老和凋亡相关蛋白表达在宫颈鳞癌变中的意义

目的:许多细胞周期调控因子和衰老相关标志物如p14ARF、p15INK4b、p16INK4a和p53在G1细胞周期阻滞和癌基因诱导的衰老中意义重大。这些关键的调节蛋白在多种恶性肿瘤中经常发生突变或是缺失。在本研究中将探讨这些因子在宫颈癌发生中的意义。方法:在本研究中在正常宫颈上皮、宫颈上皮内瘤变和宫颈鳞癌中,应用免疫组织化学方法检测p14ARF、p15INK4b、p16INK4a、Bcl-2、p53表达,并分析它们的表达与宫颈癌变的相关性。结果:p16INK4a在正常宫颈鳞状上皮10%(2/20)表达阴性,在大部分CIN和宫颈鳞癌中表达阳性,其中在85%(17/20)CIN和75%(15/20)鳞癌中呈弥漫性强阳性表达,CIN和宫颈鳞癌中的阳性表达率显著高于正常上皮(P0.01),CIN和宫颈鳞癌的间表达率无显著差异。p15INK4b在正常宫颈鳞状上皮中65%(13/20)表达弱阳性,在100%(20/20)CIN和95%(19/20)宫颈鳞癌中表达弥漫性阳性,各组之间阳性表达率无显著性差异(P0.05)。p14ARF在40%(8/20)正常宫颈上皮细胞中表达呈弱阳性(1+),在宫颈鳞癌中表达呈弥漫性强阳性90%(18/20),在45%(9/20)CIN中表达阳性,各组之间阳性表达率无显著性差异(P0.05)。Bcl-2在20%(4/20)正常宫颈上皮表达呈弱阳性,在18/20CIN中其表达强度和比率均增加,阳性表达率为90%(18/20),Bcl-2在鳞癌中700%(14/20)呈强阳性和弥漫阳性,CIN和宫颈鳞癌中的阳性表达率显著高于正常上皮(P0.01),CIN和宫颈鳞癌的间表达率无显著差异。P53免疫组化染色显示在正常宫颈上皮为表达为20%(4/20),在大多数CIN25%(5/20)和鳞癌中核阳性85%(17/20),在鳞癌中的阳性表达率显著高于正常宫颈上皮和CIN病变(P0.05)。结论:宫颈鳞癌变涉及包括细胞凋亡和细胞衰老在内的多种信号分子表达异常,这些分子可能在宫颈鳞癌发生发挥重要作用并在宫颈癌早期诊断中有重要意义。