Constitutive expression of human coagulating factor IX in HeLa cells by homologous recombination of the promoter

Constitutive expression of hFIX protein in nonhepatocytes was studied. The gene targeting vector was constructed and transferred into HeLa cells. With the detection system of PCR, we demonstrated that the endogenous hFIX promoter was replaced with an hCMV promoter when targeted insertion of the constructor was directed by the sequence homology. The expression of hFIX in the modified HeLa cells, 11.2 ng/106 cell/24 h, strongly suggested that hFIX gene could be activated by a powerful promoter in nonhepatocytes. The results would make it possible to examine the feasibility of re-regulate gene expression by promoter replacement.     

微小腺病毒载体介导的人凝血IX因子小基因的离体表达

将带有内源内含子的人凝血ＩＸ因子ｃＤＮＡ（ｈＦＩＸ小基因）构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序（ＩＴＲ）和包装信号ψ等顺式元件的微小腺病毒（ｍｉｎｉ－ａｄｅｎｏｖｉｒｕｓ）载体ＧＴ２０７３上,得到载体ＧＴｉ’ＩＸ。将该载体与带有ｌａｃＺ报告基因的微小腺病毒载体ｐＲＰ１００１分别转移４入腺病毒馐细胞２９３Ｃｒｅ４中,随后专杂辅助病毒ＡｄＬＣ８,从而馐出微小腺病毒ＡｄＧＴｉ’ＩＸ和ＡｄＲＰ１０     

城市鸟类对斑块状园林栖息地的选择性

园林因在城市中呈斑块状分布而具有许多岛屿栖息地的特性,其内部结构和景观水平的结构同时也受到城市化的影响。对杭州市20个园林中鸟类物种的选择性分布进行了调查和分析,重点探讨了鸟类物种与园林面积、内部结构、微栖息地类型的分布、景观水平的结构、人为干扰等栖息地因素的关系。结果表明,杭州城市鸟类对园林栖息地具有较强的选择性,这不仅与园林的面积有关,还与园林的形状、植被盖度、微栖息地类型、连通性、隔离度、周围用地以及人为干扰等多种因素密切相关。园林栖息地间的异质性以及鸟类物种与栖息地结构的密切关系是园林鸟类选择性分布的主要原因。     

斑海豹组织LDH同工酶的初步研究

该文采用聚丙烯酰胺凝胶圆盘电泳技术,对斑海豹心肌、肝脏、胰腺、肾组织和骨骼肌的ＬＤＨ同工酶谱进行了分析。结果表明斑海豹不同组织ＬＤＨ同工酶的区带数目、相对活性和亚基含量均具组织特异性,并且计和胰腺中不存在ＬＤＨ１。     

耐氨固氮菌分泌物对水稻秧苗生长的影响*

研究了催娩克氏菌(Klebsiella oxytoca)的不同菌株(耐氨固氮型、野生型、不固氮型)对杯栽水稻秧苗生长的影响,发现耐氨固氮菌可分泌某种植物生长促进物质。此类物质可被阳离子树脂吸附,在80℃下活性不受影响。在适宜浓度下,可使水稻秧苗的根重和苗重增加30％。     

3个与艾滋病病程相关的基因的多态位点在中国不同地区人群中的分布研究

趋化因子受体基因CCR5 -Δ32 ,CCR2 -6 4I及配体基因SDF1- 3′A突变可推迟艾滋病的病程 .以 1 0 46份来自中国 2 6个省市的DNA样本为对象研究上述 3种多态位点在中国不同地区人群中的分布 ,发现在所观察的群体中没有CCR5- Δ32存在 ,CCR2 -6 4I的基因频度为 2 0 8% ,SDF1 -3′A的基因频度为 2 4 8% ,后两者在中国人群中出现相反的梯度分布 ,并进行了进一步的艾滋病相对风险 (relativehazard ,RH)估计 .对中国人艾滋病流行病学研究及了解这些基因多态位点在中国人群中的起源及扩散提供了重要信息     

人凝血因子ⅨcDNA在C2C12成肌细胞及C3H小鼠中的高效表达

以小鼠C2C12成肌细胞为对象开展血友病B基因治疗研究.除已有的XLIX,LNCIX和GlNaCIX反转录病毒载体外,又首次将微小MCK(muscle creatinekinase)增强子顺序构建到hCMV(human cytomegalovirus)启动子上游,共同控制FIXcDAN的转录.用带有上述4种载体的病毒悬液分别感染C2C12细胞后,ELISA检测结果发现,FIX蛋白离体表达水平为:G1NaMCIX>GlNaCIX>LNCIX>XLIX.其中C2C12/G1NaMCIX混合克隆高达640ng/(10~6细胞·24h).C2C12/G1NaMCIX细胞注射C3H小鼠后肢骨骼肌肉组织,人FIX蛋白持续表达35d,其中最高表达峰达206ng/mL血浆.此结果对于研究FIX cDNA在脱细胞中的表达调控以及采用成肌细胞移植途径开展血友病B基因治疗研究有重要意义.     

常见青草药资料库的建立

我国地大物博,自然界有许多可以治病的青草药。我校所处闽西山区,民间传统就有用青草药治病的习惯。如：用鲜“鱼腥草”（蕺菜）治痢疾,“风草子”（爵床）治伤风感冒,用“苦斋”（白花败酱）制凉茶等等。本人通过对生物课及自然选修课教学经验的总结,结合“园丁科技...     

内含子在人凝血Ⅸ因子反转录病毒载体中的表达及剪接作用

构建了带有内含子的反转录病毒表达载体,研究内含子对hFⅨ的表达影响。反转录病毒载体经过PA317细胞包装后,稳定保留内含子是进一步研究内含子对hFⅨ表达影响的关键。首先构建了GlNaC－i－Ⅸ、GlNaC－i'-Ⅸ表达元件正向插入的反转录病毒载体。其中,GlNaC－i－Ⅸ带有源于IL－2的异源内含子,GlNaC－i'－Ⅸ带有来自hFⅨ自身的第一内含子;其中间部分顺序缺失,只包括剪接供体和剪接受体位点。用RT－PCR方法发现,反转录病毒介导基因转移的载体中的内含子都被剪切掉。为避免内含子的剪切,又构建了表达元件反向插入的反转录病毒载体GlNaC－i'－ⅨR、GlNaPAi'ⅨBAM。用同样的方法证明,反向插入载体中的内含子被保留下来。证明表达元件反向插入的反转录病毒载体可以得到稳定的含有内含子的表达载体,ELISA检测证明内含子能提高hFⅨ表达。为进一步提高hFⅨ在体外细胞和体内的表达水平提供依据。     

与食品相关的致癌因子及抑癌因子

与食品相关的致癌因子及抑癌因子卢大用陈健君（上海大学生命科学学院,上海２０１８００）肿瘤产生的原因相当复杂,存在内在因素和外来原因。当今环境的影响比人体自身的影响（人体本身基因易感性等）所占比重正变得越来越重要。除空气和水污染、日晒、射线等原因外;从...