In vitro flowering of Dendrobium candidum

Dendrobium candidum, a wild orchid species from China, normally requires three to four years of cultivation before it can produce flowers. The effects of plant hormones and polyamines on flower initiation of this species in tissue culture were investigated. The addition of spermidine, or BA, or the combination of NAA and BA to the culture medium can induce protocorms or shoots to flower within three to six months with a frequency of 31.6% -45.8%. The flowering frequency can be further increased to 82.8 % on the average by pre-treatment of protocorms in an ABA-containing medium followed by transfer onto MS medium with BA. The induction of precocious flowering de-pends on the developmental stage of the experimental materials (protocorms, shoots and plantlets) used , and usually occurs only when root formation is inhibited.     

文心兰铁氧还蛋白基因克隆定位及表达分析

采用RACE-PCR法,从‘小樱桃’文心兰中克隆到一个全长989bp的铁氧还蛋白基因cDNA序列,命名为OnFd(登录号KX461907)。OnFd基因开放阅读框长为465bp,预测可编码154个氨基酸;gDNA和cDNA序列比对结果显示OnFd基因不含内含子。生物信息学分析表明,OnFd具有1个典型的[2Fe-2S]结构域;同源分析显示,OnFd与玉米Fd3的相似度最高(64.29%)。蛋白亚细胞定位结果显示OnFd定位于叶绿体。实时荧光定量PCR检测发现:OnFd基因在花中表达量最高,其次是叶与根,在假鳞茎中表达量最低;接种病原菌研究显示,文心兰感染软腐病后,各个部位的OnFd基因表达量均呈上升趋势,尤其是接种部位假鳞茎在接种病原菌1d后表达量便表现出极显著上调,并且在5个感病阶段的表达量是健康植株的2.83~3.98倍。研究表明,OnFd基因可能在文心兰响应抗软腐病过程中具有重要作用。     

利用固定化啤酒酵母合成5'-核苷三磷酸

固定化啤酒酵母细胞由5’-核苷一磷酸(NMPs)合成5’-核苷三磷酸(NTPs)。在250mL摇瓶中加入20g固定化酵母细胞和20mL反应液(NMP 40mmol/L,葡萄糖150mmol/L,K2HPO4-KH2PO4缓冲液250 mmol/L,硫酸镁10mmol/L),pH 7.0,35℃,反应2.5h,NTP转化率达到80%。底物溶液添加NAD 后,该固定化酵母细胞可反复使用10次,NTP的转化率稳定维持在70%以上。     

日本囊对虾Kunitz型蛋白酶抑制剂在毕赤酵母中的表达纯化及活性分析

SKPI(shrimp Kunitz-type protease inhibitor)是日本囊对虾(Marsupenaeus japonicus)体内的一个小分子多肽, 含有一个Kunitz型结构域, 属于丝氨酸蛋白酶抑制剂。目前已知丝氨酸蛋白酶抑制剂在节肢动物免疫系统中起着非常重要的作用, 为了了解SKPI在对虾天然免疫系统中的作用, 首先对其进行了重组表达。从日本囊对虾肝胰腺中扩增skpi的cDNA片段, 插入改造后的pPIC9K酵母表达载体, 获得的重组质粒转化至毕赤酵母GS115进行表达。由于改造的pPIC9K载体加入了6-His标签, 因此利用Ni?Sepharose?High?Performance对SKPI进行了高效纯化。初步的活性研究表明, 重组表达的SKPI能特异性地抑制胰蛋白酶的水解活性。     

胶胨状芽孢杆菌拮抗菌株活性物质形成条件及其性质初步研究

探索了培养基组分和培养条件对胶胨状芽孢杆菌拮抗菌株抗菌活性形成的影响。确定了菌株的最适发酵条件 :即以 1 %麦芽糖为碳源 ,以 0 1 % (NH4 ) 2 SO4 为氮源 ,32℃～ 37℃摇瓶培养 ,在培养过程中保持pH近中性有利于菌株生长和积累活性产物。从发酵液中获得抗生物质粗品 ,该物质对G+ 的蜡样芽孢杆菌 ,金黄色葡萄球菌和G- 的大肠杆菌等均有较强抗菌活性。经热处理、酶处理和生化定性分析 ,表明此活性产物为肽类化合物     

CBR2激活与小胶质细胞的活化和损伤的关系

目的：探讨大麻素CBR2受体激动剂AM1241预处理对脂多糖（LPS）和γ-干扰素（IFN-γ）所致炎症反应对小胶质细胞活化和损伤的影响。方法：联用LPS和IFN-γ作为小胶质细胞损伤模型,将细胞分为Control组、AM1241组、LPS/IFN-γ组和AM1241＋LPS/IFN-γ组;AM1241组和AM1241＋LPS/IFN-γ组经AM1241预处理2h,LPS/IFN-γ组和AM1241＋LPS/IFN-γ组用含LPS和IFN-γ的培养基培养24h。采用MTT法检测细胞代谢率,硝酸还原酶法检测细胞培养液中一氧化氮（NO）释放量,酶联免疫吸附剂测定细胞培养基中炎症因子释放量,倒置相差显微镜观察细胞形态。结果：与LPS/IFN-γ组相比,AM1241＋LPS/IFN-γ组细胞代谢率明显升高（P〈0.05）,NO、TNF-α、IL-1β和IL-10释放量明显减少（P〈0.05）,活化和损伤程度明显减轻。结论：大麻素CBR2受体激动剂AM1241预处理可减轻LPS和IFN-γ对小胶质细胞的活化和损伤。     

胰岛素强化治疗对胃癌围手术期营养代谢的影响：随机对照研究

目的:探讨胃癌围手术期能量及营养物质的代谢特点,研究强化胰岛素治疗对围手术营养代谢的影响.方法:选取胃中、下部癌病理诊断明确并且外科病房ICU住院时间不少于24h的患者64例,取得知情同意后随机分到强化胰岛素治疗(IIT)血糖控制在4.4～6.1 mmol/L.和传统治疗(CIT)组血糖控制在10mmol/L以下;应用CCM营养代谢监测系统测定围手术期静息能量消耗(REE),呼吸商(RQ),每公斤体重静息能量消耗(REE/kg)和脂肪氧化比率,应用多频人体生物电阻抗分析仪测定围手术期人体组分的变化及应用稳态模式评估法计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR).结果:64例病人入选,每组32例,手术创伤引起术后第1、3天REE水平增加约22%和12%,呼吸商降低至0.759和0.791,REE/kg增加28 kcal/kg和26 kcal/kg,脂肪氧化比率增加至78%和65%,Ln-HOMA-IR明显增加(P<0.05);IIT治疗能降低术后第1、3天Ln-HOMA-IR和REE/kg水平;术后人体指标如细胞内液、脂肪组织、蛋白组织、肌肉组织、瘦体组织和体质量较术前水平明显降低(P<0.05);IIT能明显减少脂肪组织、蛋白组织和细胞内液的消耗量(P=0.009,t=0.026).结论:IIT能够有效降低胃癌围手术期胰岛素抵抗程度、降低静息能量消耗的水平和减少脂肪及蛋白质的消耗.     

大肠杆菌腺苷脱氨酶基因的克隆、表达与缺失

利用途径工程的基本原理,拟在大肠杆菌核苷酸代谢途径中构建腺苷（AR）转化为腺苷三磷酸（ATP）的新途径,故需使细胞内的腺苷脱氨酶基因（add）缺失。通过构建大肠杆菌MC4100　DNA的基因文库,筛选得到含腺苷脱氨酶基因的DNA片段。构建表达质粒pBD1和pBD2并实现了表达。在此基础上构建了add基因缺失的带卡那霉素抗性基因的线性52kb DNA分子,同时转化JM83、MC4100、BL21（DE3）。经遗传稳定性实验和DNA分子杂交鉴定,确认得到了来自JM83的两株add基因缺陷株J1和J2。再对菌株J1、pUC18／JM83、pBD1／JM83的细胞粗提液做腺苷脱氨酶的酶活鉴定比较,结果表明则没有腺苷脱氨酶活性,pBD1／JM83有比pUC18／JM83强的腺苷脱氨酶活性。     

水葫芦中叶绿素铜钠提取及其抗细胞氧化损伤作用研究

目的:从水葫芦中提取叶绿素铜钠初产物,完善叶绿素铜钠盐的提取工艺,研究叶绿素铜钠的抗细胞氧化损伤作用。方法:采用丙酮乙醇混合液提取水葫芦中的叶绿素铜钠,通过红外光谱分析、分光检测、X射线衍射等方法对产物产率、样品成分、纯度进行检测,之后利用连二亚硫酸/PC12制作细胞模型,研究了叶绿素铜钠的抗细胞氧化损伤作用。结果:采用本文工艺提取得的叶绿素铜钠产率较佳,提取物中未见Pb、Cd等水葫芦生长流域常见的重金属污染;MTT法显示叶绿素铜钠未见细胞毒作用,且对细胞氧化损伤具有明显抑制作用。结论:研究结果如可应用于叶绿素铜钠的工业提取,可降低目前含叶绿素铜钠类药物与保健品的生产成本,为入侵植物水葫芦的综合利用提供有价值的参考。     

药用异喹啉生物碱的研究 Ⅳ.峨眉紫堇生物碱

从峨眉紫堇(Corydalis omeienensis)的根茎中分得十二种生物碱、经UV,IR,[α]_D,CD,~1H-NMR,~(13)C-NMR,MS及物理性质鉴定了它的结构。其中,(-)-tetrahydrocorysamine,为(-)-13-methylprotoberbrine类生物碱,为第二次从植物中获得,至今报导过的该类生物碱从天然得到的也仅此一个。