鹿科动物线粒体控制区序列分析与系统进化

通过测定鹿科麂亚科中的小麂、赤麂和黑麂的线粒体全基因组,从而定位它们的控制区,并从GenBank获得鹿科另外3个亚科9种动物的线粒体控制区全序列。利用MEGA软件计算了各物种控制区序列的碱基组成、遗传距离和遗传相似度,通过比较序列同源性,以羊线粒体控制区序列为外群,构建NJ分子系统树,探讨了鹿科4个亚科12种动物的系统进化关系。序列分析表明,鹿科12种动物控制区序列的碱基长度在909～1049bp之间,A T含量约占62．06％,其中363个核苷酸位点存在变异(约占34％)。系统进化关系结果表明：(1)以线粒体控制区构建的鹿科12种动物分子系统树基本与NCBI分类一致;(2)美洲鹿亚科驼鹿属驼鹿在鹿科这12种动物中处于最为原始的地位;(3)小麂比赤麂和黑麂更为原始;(4)獐亚科獐属的獐与美洲鹿亚科狍鹿属的狍鹿和美洲狍鹿聚为一支。     

赤麂线粒体全基因组的序列和结构

提取赤麂细胞株总DNA,参照我们实验室已测定的同属动物小麂线粒体全基因组序列设计引物,PCR扩增、测序、拼接,获得赤麂线粒体全基因组序列并进行生物信息学分析。赤麂线粒体全基因组序列全长16354bp。定位了22个tRNA基因、2个rRNA基因、13个蛋白编码基因和1个D-loop区。赤麂与小麂及其它哺乳动物线粒体的基因组结构相同,它们的序列同源性都较高。     

乌龟Sox基因的克隆及测序

参照人SRY基因HMG-box保守区的序列,设计1对兼并引物,扩增了乌龟（Chinemys reevesii)的Sox基因,并对扩增产物进行了克隆和测序,结果在雌雄个体中均筛选出4个不同的Sox基因,无性别差异性;其DNA序列和编码的氨基酸序列与人相应的SOX基因的相似性分别为92%、91%、84%、92%和100%、93%、98%、98%,显示出高度的保守性。     

中华鳖7种组织SOX基因表达的RT-PCR分析

In this paper, RT PCR analysis on SOX gene of seven tissues from the Chinese soft shelled turtle (Pelodiscus sinensis) was studied, and SOX gene fragments of expression from the testicle, brain, heart, kidney and spleen were cloned using RT PCR products.The results show that SOX genes has specific expression in the testicle, brain, spleen, cardiac muscle and kidney and isn't expression in muscle, liver and ovary of femel.The results of sequence reveal that the SOX genes of expression in the testicle are TSSOX1、TSSOX4 TSSOX5 and TSSOX9, and those are TSSOX2 and TSSOX4 in the brain, and this is TSSOX4 in the spleen and heart tissue, and those are TSSOX2 and TSSOX3 in the kidney tissue.This suggests that the SOX gene act important role not only on the sex determination, but also on the development of neural system, immunocyte system and the differentiation of male germ cell.     

小麂Sry基因的克隆和测序

应用人的性别决定基因SRY(Sex-determining Region Y gene,SRY)中HMG框内的一对引物,对小麂细胞株的基因组DNA进行PCR扩增,得到雄性小麂细胞的220bp扩增产物,而在雌性小麂细胞中未发现扩增产物。将雄性小麂细胞的220bp扩增产物通过T-A互补法克隆到质粒pGEM-T 载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果表明小麂Sry基因保守序列与人的SRY基因保守区相同碱基的比值为152/184,达到82.6%。提示小麂Sry基因与人的SRY基因存在着较高的同源性,说明SRY基因在进化过程中高度保守。 Abstract:Using the primers from SRY gene——HMG Box for PCR amplification in genomic DNA of Muntiacus reevesi cell strains,a 220bp fragment was obtained in the male but not in the female.The 220bp fragment was cloned into the pGEM-T vector using T/A clone method.The identified positive clone was sequenced.The result shows that 82.6% nucleotides(152bp/184bp) are homologous between Muntiacus Sry and human SRY gene.It suggests that SRY is highly conserved during evolution.     

小麂线粒体基因组全序列的测定和分析

通过建立麂属动物小麂线粒体DNA文库、鸟枪法测序,获得了小麂线粒体基因组全序列并对其基因组成、蛋白质的编码序列、tRNA基因等结构作了详细分析,这也是国内有关哺乳动物线粒体基因组全序列的首次报道。与其他哺乳动物线粒体基因组全序列的比较研究发现：全长为16 354bp的小麂线粒体基因组同样编码13种蛋白质、2种rRNA和22种tRNA,除了用于调控线粒体DNA复制和转录的D-Loop区以外,小麂线粒体基因组各基因长度、位置与其他哺乳动物相似,其编码蛋白质区域和rRNA基因与其他哺乳动物具有很高的同源性。     

戊型肝炎病毒第4基因型中国株ORF2编码蛋白的抗原表位分析

以戊型肝炎病毒(HEV)第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体(McAbs), 同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白, 与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起, 通过ELISA、免疫印迹(Western blot)以及竞争抑制实验对主要存在于我国的HEV第4基因型毒株进行抗原表位分析。结果发现所制备的McAbs与p166Chn截短蛋白的免疫反应有两种类型, 以1G10为代表的McAbs能与N端不短于aa477、C端不短于aa613的截短蛋白反应, 其针对的抗原表位是构象依赖型表位, 依赖于aa477~aa613肽链区段; 而McAb 2F11则能与N端不短于aa474、C端不短于aa617的截短蛋白反应, 其针对的抗原表位也是构象表位, 但需依赖于较长的肽链区段(aa474~aa617)。竞争抑制实验显示两类McAbs互不抑制, 进一步证实了所发现的两个抗原表位在空间位置上的不同。更有意义的是, 两类McAbs均能与其他不同HEV基因型和亚型来源的p166重组蛋白发生阳性反应, 表明这两个抗原表位是HEV基因型共同性的, 可以在世界各国分布的不同基因型HEV毒株中诱导交叉免疫。     

金丝猴的染色体组型

本研究通过外周血淋巴细胞培养的方法,对二只金丝猴的染色体组型和染色体带型进行了分析。现已确证,金丝猴的2倍体细胞的染色体数目为2n=44。雄性为XY,雌性为XX。在染色体组型分析中,测量和计算了每一染色体的相对长度,臂比和着丝点指数。染色体和染色单体的“自发”畸变率分别为0.67％和2％。从姬姆萨(Giemsa)氏带型分析表明,每一对同源染色体都有自己的特殊带型,因此所有的染色体都能予以识别,并能准确无误的配对。     

云南野牛的染色体

云南野牛与家养黄牛(Bos taurus)同属。1958年寿振黄等人首次报道,发现于云南省南部西双版纳地区。李致祥等人(1963)对此种野牛也进行过多年的驯化及研究工作。鉴于云南野牛染色体资料尚缺,需要观察研究;另一方面为了准备进行野牛与家养黄牛的杂交育种试验,也需要对野牛的染色体组型加以分析,并与黄牛比较,了解它们之间的不     

应用PCR产物直接银染测序技术检测大肠癌p53基因点突变 Detection of p53 Point Mutation in Colorectal Carcinoma Using PCR-product DNA Silver Sequencing

应用PCR-SSCP结合PCR产物直接银染测序技术对24例大肠癌p53基因第5-7外显子进行点突变的研究。结果检出5例(26.7%)阳性,均为错义突变;其中3例为碱基GC到 AT的转换, 1例为GC到TA的颠换,另1例为AT到CG的颠换,后者尚未见报道。突变位点分布在p53基因第141、175、245、248和258位密码子,其中4例发生在CpG位点。本文对p53基因点突变谱的分析为大肠癌的病因学研究提供了科学依据, 并讨论了PCR产物直接银染测序技术的优越性。 Abstract:Mutations in exon 5~7 of p53 were screened in 24 cases of colorectal carcinoma by a combination of PCR-SSCP and PCR-product DNA silver sequencing.The results showed that all 5(26.7%) cases of point mutations detected were missense mutations,including 3 cases of GC to AT transitions,1 case of GC to TA transversion and another case of AT to CG transversion.The latter has not been reported before.The mutations occurred at codons 141,175,245,248 and 258 respectively,and 4 cases of these five mutations occurred at CpG dinucleotides.The analysis of p53 mutation spectra can provide clues to the etiology of colorectal carcinoma.The advantages of DNA silver sequencing are also discussed.