一株高浓度多环芳烃降解菌的鉴定和降解特性

采用选择性富集培养方法,从沈抚灌区土壤中分离得到多环芳烃(PAHs)高效降解菌NI2,应用此降解菌制备固定化菌剂,修复焦化厂内高浓度PAHs污染土壤,并通过生理生化和16S rDNA测序进行微生物鉴定.经过30 d的降解实验,菌N12对污染土壤中各PAH的去除率＞66％,总去除率为80％.生理生化和16S rDNA测序分析表明,分离得到的菌株N12为分支杆菌属(Mycobacterium sp.),该菌具有与其他分枝杆菌同源的双加氧酶基因nidA和pdoA2.结果表明,从土壤中筛选获得的分枝杆菌可以修复高浓度PAHs污染工业土壤.     

杨梅水溶性红色色素的提取和性质的研究

用离子交换层析法,从新鲜的杨梅[Myrica rubra Sieb et Zucc.]果中提取红色色素。最大吸收波长是515nm。34％色素水溶液达到饱和,几乎不溶于乙醇。温度、光和pH值的改变对色素稳定性均有影响。色素对Mg^2 和Fe^3 金属离子敏感性强。大多数食品添加剂对色素稳定性影响不大,但蔗糖对稳定性有影响。色素耐氧化性较弱,而耐还源性较强。色素的毒性实验表明：无毒性。     

组成型表达chi基因的Bt工程菌株构建及其特性

【目的】通过构建能够组成型高效表达几丁质酶的苏云金芽胞杆菌工程菌株,以提高其抑真菌活性。【方法】首先通过PCR扩增获得Bti75菌株chiB全长及系列缺失启动子片段,与本室构建的启动子探测型载体pCB连接,转化Bti75菌株,通过β-半乳糖苷酶活性检测及β-半乳糖苷酶mRNA的Real time-PCR检测,确定了一段长度为190 bp的组成型高效表达启动子。将这一启动子分别与Bti75自身几丁质酶基因chiA以及地衣芽胞杆菌(Bacillus licheniformis)的几丁质酶基因chiMY连接构建了组成型高效表达的工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)。应用几丁质酶酶活检测、SDS-PAGE及酶谱分析检测了工程菌几丁质酶的表达情况。最后,通过检测工程菌发酵粗酶液对真菌孢子萌发和菌丝生长的影响,评估了工程菌对3种植物病原真菌的抗真菌活性。【结果】在没有诱导物存在的情况下,Bti75(pBPΔ7)菌株表达的β-半乳糖苷酶酶活和β-半乳糖苷酶mRNA的转录量分别是Bti75(pBP)菌株的7倍和2.5倍左右。在没有几丁质诱导的情况下,与野生株Bti75相比,工程菌株Bti75(pDA)和Bti75(pDM)的几丁质酶活性均提高了3.5倍左右。SDS-PAGE及酶谱分析证明目的几丁质酶在非诱导条件下达到组成型高效表达,抑真菌实验显示工程菌Bti75(pDA)和Bti75(pDM)抑制3种植物病原真菌的活性明显提高。【结论】发现190 bp的缺失启动子能够组成型高效表达不同来源的几丁质酶,无需诱导物的诱导,工程菌株就能展现良好的抗真菌能力。     

外源EGFP基因在肿瘤细胞中的稳定表达

通过将增强型绿色荧光蛋白（EGFP）基因转染到人肺腺癌细胞（A549）内,建立以EGFP为探针的体外抗癌药物细胞株。使用电穿孔法导入EGFP基因到A549细胞;然后用G418筛选以及梯度稀释法筛选出EGFP高度表达的细胞株。初步建立稳定表达绿色荧光蛋白的人肺癌细胞株。     

链霉菌壳聚糖酶的纯化及其酶学性质

分离纯化从烟台近海土壤筛选的链霉菌来源壳聚糖酶,并对其酶学性质进行研究。通过(NH4)2SO4分级沉淀分离得粗酶,透析后经Sephadex G-100柱纯化,得到2种壳聚糖酶(ChA和ChB)。SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳及Sephadex G-75凝胶过滤确定ChA的相对分子质量,研究ChA的最适底物水解条件、热稳定性、水解动力学及金属离子对酶活性影响。结果表明:ChA为单亚基蛋白,相对分子质量为4.16×104,在220和280 nm处呈现两个紫外吸收峰,催化水解壳聚糖的最适pH为5.0～5.5,最适温度为55℃。热稳定性实验表明:30℃温育1 h后酶活为初始酶活的33.3%,40℃温育1 h后酶活为初始酶活的22.2%。ChA的酶促反应初速率为6.2×10-3μmol/(mL.min),Vmax为0.318μmol/(mL.min),Km为1×10-2mg/mL,且对底物表现相对专一性。K+、Na+、Li+、Mg2+、Ca2+、Ba2+Zn2+、Cu2+和Co2+对ChA活力均表现为抑制作用,过渡金属离子Mn2+对酶有激活作用,重金属离子Hg2+、Ag+、Cd2+和Pb2+对酶均有较强的抑制作用。Mn2+和Zn2+的动力学研究表明,Mn2+对酶为混合型激活作用,Zn2+对酶为竞争性抑制作用。     

CD自杀基因系统对胶质瘤细胞作用的实验研究

将含大肠杆菌胞嘧啶脱氨酶（ＥＣ－ＣＤ）基因的重组逆转录病毒感染大鼠神经胶质瘤细胞Ｃ６,获得稳定表达ＣＤ的克隆细胞Ｃ６／ＣＤ。ＣＤ可以将无毒性的原药５－氟胞嘧啶（５－ＦＣ）转化成高度细胞毒性物质５－氟尿嘧啶（５－ＦＵ）。生长抑制试验表明Ｃ６／ＣＤ细胞对５－ＦＣ高度敏感。ＩＣ５０为３μｍｏｌ／Ｌ,５－ＦＣ对Ｃ６细胞基本无毒性,ＩＣ５０近６０００μｍｏｌ／Ｌ;而Ｃ６／ＣＤ和Ｃ６细胞均低浓度５０ＦＵ敏感。     

石油生物催化脱硫的研究进展

石油生物催化脱硫技术是新兴的极具潜力的石油非加氢脱硫技术,在降低轻质油品生产成本、提高油品质量和环境保护等方面显示出潜在的优势,被誉为21世纪的石油脱硫技术。本文主要对石油生物催化脱硫技术特点、各种降解路线和研究现状进行了综述,指出了石油生物催化脱硫技术存在的问题,并提出了进一步研究发展的方向。     

酵母丙氨酸转移核糖核酸分子中一个十二核苷十一磷酸片段(顺序46～57)的合成

我们用T_4RNA连接酶,通过两条路线分别将GpUpCpU,CpCpGpG和TpψpCpG三个寡核苷酸片段连接成十二核苷十一磷酸,GpUpCpU~(32)pCpCpGpG~(32)pTpψpCpG,即相当于酵母丙氨酸转移核糖核酸分子中顺序46～57的一段序列。我们找到了供体3′-端不带磷或其他保护基时,其自聚或自身环化的产生都不明显的条件,从而使供受体用量比大大降低。在有的情况下,供体量大于受体,也获得了比较满意的连接产率。此外,在我们的实验中,5′端是二个稀有嘧啶碱基T和ψ的供体~(32)pTpψpCpG与受体CpCpGpG连接的产率不低于由普通碱基供体的连接产率。我们合成的GpUpCpU~(32)pCpCpGpG~(32)TpψpCpG已用于酵母丙氨酸转移核糖核酸3′端半分子和全分子的合成中。     

SiRNA沉默Notch2表达对Lewis肺癌细胞增殖和周期的影响

目的:采用RNA干扰技术下调Notch2基因在Lewis肺癌细胞(LLC)的表达,探讨Notch2表达下调对LLC增殖和周期的影响.方法:通过脂质体2000将Notch2-siRNA和对照con-siRNA分别转染LLC后,通过PCR,RT-PCR检测Notch2的表达情况;通过MTT、软琼脂克隆形成实验检测LLC的生长情况;并使用流式细胞技术检测细胞周期.结果:SiRNA转染LLC48小时后,PCR和RT-PCR检测结果显示Notch2在实验组的表达受到显著抑制;MTT实验显示干扰Notch2的表达显著抑制了LLC的增殖(P＜0.001);软琼脂克隆形成实验表明干扰Notch2的表达将影响LLC的克隆形成;细胞周期实验进一步证实干扰Notch2的表达使处于活跃增殖期(S期)的LLC数量明显减少.结论:Notch2在LLC中的表达发挥重要的促癌作用,干扰Notch2的表达能显著抑制LLC的分裂增殖和克隆形成,从而抑制肿瘤的生长.     

ISSR分子标记技术在金针菇菌株鉴别中的应用

利用简单重复序列区间扩增多态性（ISSR）分子标记对来源不同的6种金针菇（Flammulina velutipes）菌株进行了分子鉴定。从20条ISSR引物中筛选出8条可用引物,共获得136条DNA片段,其中多态性条带111个（占总条带数的81．6％）。供试菌株间遗传相似系数从0．5674（农大04—1和全禾04—1）至0．8947（太行05—1和河北03-1）不等。利用UPGMA软件据此进行聚类分析,可将供试金针菇菌株分为3个组群。结果表明,ISSR分子标记可以有效地用于金针菇生产菌株快速准确鉴别,是金针菇指纹图谱分析的有效工具。