丹参酮生物合成途径关键酶CYP76AH3的晶体结构与分子对接

丹参在治疗心绞痛、冠心病和心肌梗死等疾病中具有广泛应用。CYP76AH3是其活性成分丹参酮合成途径中的关键P450酶,位于丹参酮复杂合成网络通路的分支处,其晶体结构解析及关键氨基酸分析对丹参酮的合成生物学具有重要意义。作为跨膜蛋白的Ⅱ型P450酶的蛋白质纯化、晶体培养和晶体结构解析的难度一贯较大。本研究通过构建原核表达重组质粒,纯化目的蛋白质,成功培养了CYP76AH3晶体,解析了晶体结构。根据CavityPlus分析确定对接范围,采用分子对接程序Discovery Studio筛选出与底物相互作用的关键氨基酸,包括与底物有氢键相互作用的Gly298和Asp294,以及与底物有疏水相互作用的Phe479、Leu367和Leu293;通过点突变模拟进一步预测了关键氨基酸的突变对蛋白质结构稳定性的影响。本研究将为CYP76AH3的蛋白质工程提供目标,为丹参酮的合成生物学研究奠定了基础。     

江西省庐山地区蜻蜓多样性的研究

于2004~2005年对江西庐山地区蜻蜓资源进行调查,通过对春、夏、秋三季蜻蜓多样性的研究,共收集蜻蜓1145只,隶属于10科、35属、52种。种类个体数量均表现为夏季最多,春季次之,秋季最少;属数和科数也是以夏季最多,春季次之,秋季最少。三季多样性指数(H′)的排序为春季(2.7603)>夏季(2.6420)>秋季(2.5601)。     

甲型副伤寒杆菌抗噬菌体及生物膜形成基因的筛选及鉴定

细菌生物膜(bacterial biofilm,BF)与大部分的细菌感染相关,有助于病原菌抵抗外部不利的环境,包括抗生素和抗噬菌体等.为了研究生物膜和抗噬菌体的作用机制,本文以6株抗噬菌体甲型副伤寒杆菌(副甲菌)突变菌作为研究对象,在Rif+(利福平)(200 mg/L)平板中划线并滴加噬菌体验证能否抗噬菌体,将6株突变菌接种于96孔板中,每组3个重复,观察其成膜能力以及生物膜的形态,定点突变和互补实验验证突变菌的噬菌体抗性是否由突变基因所引起.结果显示:划线平板中野生型副甲菌在滴加1.2×106个噬菌体处出现空缺,而6株突变菌在滴加2.4×109个噬菌体后仍能生长,表明6株突变菌具有抗噬菌体特性;6株突变菌中,σ-54依赖的翻译调节器突变菌成膜能力(A595=1.1±0.2)较野生型副甲菌(A595=0.5±0.1)显著性增强,且差异显著(P0.05),光学显微镜下菌体聚集成粗大的不规则团块;同源重组敲除野生型副甲菌σ-54依赖的翻译调节器,突变菌出现噬菌体抗性,将表达σ-54依赖的翻译调节器的载体转化该突变菌,突变菌又恢复了噬菌体敏感性.结果表明,σ-54依赖的翻译调节器是抗噬菌体和生物膜形成相关的基因.     

仙琴蛙颜色感知具有左脑优势

蛙类在暗视条件下能辨别不同颜色,但颜色感知时大脑神经活动的动态神经机制尚不清楚.本文通过分析峨眉仙琴蛙(Nidirana daunchina)在蓝、绿、黄三种颜色光刺激下脑电信号δ、θ、a、β 4种节律的功率谱,研究脑电节律与颜色感知之间的关系,探索颜色感知的动态神经机制.首先采集不同颜色刺激下端脑、间脑和中脑的脑电信...     

候选门级辐射类群（candidate phyla radiation）细菌的生理生态与进化

候选门级辐射类群（candidate phyla radiation,CPR）细菌是一大支与绝大多数已知细菌系统发育地位、基因组大小、细胞形态和生理代谢特征具有显著差异的独特细菌类群。CPR细菌在地球上分布广泛,且群落多样性极高。然而,由于被发现较晚,人们对CPR细菌的认识还非常有限。针对CPR细菌发现历程、细胞形态、基因组学特征、生理代谢潜能、生态学功能、实验室纯培养以及遗传进化等方面进行系统地归纳与总结,以期为未来CPR细菌的生态生理和遗传进化等研究提供参考,进一步加深对地球微生物物种多样性和生命进化的认识。     

醋酸钙不动杆菌PHEA-2苯酚降解调控蛋白MphR化学信号域的研究

MphR是醋酸钙不动杆菌PHEA-2调控苯酚代谢的激活蛋白。通过分析苯酚羟化酶启动子的lacZ融合子(PmphK::lacZ)在21种苯酚及苯酚衍生物诱导时的β-半乳糖苷酶活性,确定了调控蛋白MphR化学信号域可以识别苯酚,邻甲酚,间甲酚,邻氯苯酚等酚类衍生物。大肠杆菌中逐段截短MphR化学信号域试验证实,当化学信号域截短后,MphR受苯酚诱导激活转录的功能丧失。结果表明,化学信号域对于苯酚激活转录功能极为重要。     

非编码RNAs在细菌代谢网络调控中的研究进展

非编码RNAs(non-coding RNAs,ncRNAs)是一类非常重要的调节子,此类调节子能够使细胞通过调节它们的生理特性而适应环境的改变。已有的研究表明ncRNAs在细菌的蔗糖代谢、细胞外膜应激反应、群体感应和细菌毒力等方面发挥了重要的调节作用,其调控模式已经成为细菌调控网络中的重要“分支”。本文综述了细菌ncRNAs近年来的研究进展,详细介绍了细菌ncRNAs的合成及调控机制,由于ncRNAs结构的独特性及调控网络的复杂性,因此ncRNAs的功能研究已经成为近几点的研究热点之一。     

胃癌血管靶向肽GX2 对胃癌血管内皮细胞靶向性的鉴定

目的:证明胃癌血管靶向肽GX2能够与胃癌血管内皮细胞特异性结合,在体内对胃癌血管具有靶向性。方法:体外实验,合成GX2与FITC的复合物FITC-GX2,分离原代人脐静脉内皮细胞HUVEC,将HUVEC与人胃癌细胞系SGC7901共培养,建立共培养血管内皮细胞模型来模拟胃癌血管,利用免疫荧光的方法观察GX2与共培养内皮细胞Co-HUVEC的结合情况;体内实验,构建99mTc标记的GX2分子示踪探针,SPECT显像观察GX2的胃癌血管靶向性。结果:免疫荧光结果显示GX2能与Co-HUVEC特异性结合,而与人胃癌细胞SGC7901不结合;SPECT显像结果证明了GX2在荷瘤裸鼠体内能够浓集到肿瘤部位,具有良好的靶向性。结论:GX2能与胃癌血管内皮细胞特异性结合,且具有在体靶向到胃癌血管的能力;GX2具有胃癌诊断的潜在价值,并能应用于胃癌血管抑制治疗。     

红平菇产漆酶条件优化及对孔雀绿染料脱色的研究

采用LNAS(低氮天冬酰胺-琥珀酸)培养基添加方式,对红平菇Pleurotus djamor HP1进行培养,检测不同时间培养液对不同底物的氧化作用,进而得到光密度值的变化情况,作为漆酶的产生及活性测定的主要依据。结果表明:在含Cu2+的培养液中漆酶最大酶活为235.4 U/L。含Cu2+的培养液添加底物木屑后漆酶最大酶活为458.8 U/L。提取经优化筛选后的培养基培养出的漆酶粗酶液,对4种具有不同化学结构的染料进行了脱色试验。结果表明:三苯基甲烷类的孔雀绿在6 h时脱色率为87.5%,蒽醌类的SN4R在24 h时脱色率为49.4%,偶氮类的甲基橙在24 h时脱色率为45%,杂环类的中性红在24 h时脱色率为23.6%。因此,显示出红平菇漆酶对孔雀绿染料脱色具有较大的应用潜力,进而对废水处理具有更好的应用前景。