抗EGFRvⅢ单链抗体的原核表达条件的优化及纯化

为了构建抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,优化抗EGFRvⅢ单链抗体在大肠杆菌中的表达条件,并建立纯化方法。构建抗EGFRvⅢ单链抗体的pET-22b(+)重组质粒,将其转化到大肠杆菌BL21中,研究不同温度、不同浓度诱导剂对目的蛋白表达效率的影响。用Ni2+亲和层析纯化蛋白,并通过免疫印迹对其进行鉴定。抗EGFRvⅢ单链抗体重组质粒经NdeⅠ和XhoⅠ双酶切,菌落PCR和测序验证,结果显示重组质粒构建成功。SDS-PAGE结果表明BL21表达的目的蛋白相对分子量为29kD左右,与理论分子量一致,免疫印迹结果表明在29kD左右出现一条特异性条带,与SDS-PAGE结果一致。15℃和0.6μmol/L的诱导剂为抗EGFRvⅢ单链抗体的最佳诱导条件。本研究成功构建了抗EGFRvⅢ单链抗体大肠杆菌表达体系,并获得了大肠杆菌表达单链抗体的最佳诱导条件。     

贵州黑山羊、黔北麻羊IL-2基因的克隆与生物信息学分析

为获得贵州特色品种黑山羊与黔北麻羊IL-2基因,本试验以Con A刺激的贵州黑山羊与黔北麻羊外周血淋巴细胞为材料,采用RT-PCR方法分别扩增贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因,进行克隆与生物信息学分析。结果显示,(1)贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因核苷酸与氨基酸一致性为100%,完整编码阅读框大小为468 bp,编码155个氨基酸;(2)黔北麻羊、贵州黑山羊IL-2基因与Gen Bank中羊源IL-2基因核苷酸一致性为95.9%~100%,氨基酸一致性为91.1%~100%;(3)遗传进化树结果表明,贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因处于同一进化分支,与羊源IL-2基因亲缘关系较近;(4)生物信息学分析结果显示,IL-2蛋白二级结构中以α螺旋与无规则卷曲较多,该蛋白为亲水性蛋白,含信号肽序列,无跨膜结构,无特征功能结构域;(5)不同动物IL-2蛋白的抗原性分析存在差异,贵州黑山羊/黔北麻羊IL-2蛋白与羊源IL-2蛋白的比较差异较小,与人和其它动物的比较差异较大。由此得出结论,获得贵州黑山羊与黔北麻羊IL-2基因完整编码区序列,二者核苷酸与氨基酸序列一致。贵州黑山羊/黔北麻羊IL-2基因与羊源IL-2基因亲缘关系近,预测其编码的蛋白为亲水性的分泌型蛋白,不同动物IL-2基因抗原性存在差异。     

输尿管软镜联合钬激光治疗肾结石对患者肾功能影响较小

为了探讨输尿管软镜联合钬激光治疗肾结石对患者肾功能影响,本研究选取我院泌尿外科119例肾结石患者进行了回顾性研究。根据手术方法不同,本研究将这些患者分为输尿管软镜联合钬激光治疗组(A组,57例)和经皮肾镜取石术治疗组(B组,62例),并对比了两组患者的治疗效果及术后肾功能变化。本研究结果显示,A组患者的手术出血量、住院时间低于B组(p0.05);A组患者和B组患者的一期及二期结石清除率差异无统计学意义(p0.05);术前,两组患者的血清肌酐(Scr)、血胱抑素C(Cysc)、尿肾损伤分子-1(KIM-1)、β2微球蛋白(BMG)、视黄醇结合蛋白(RBP)的水平差异无统计学意义(p0.05);术后24 h、48 h,A组患者的Scr、Cysc、KIM-1水平高于B组(p0.05),术后48 h、72 h,A组患者BMG、RBP的水平高于B组(p0.05);A组患者术后发热4例,血尿2例,B组患者出现术后疼痛9例、发热7例,血尿4例,A组患者的手术并发症率低于B组(χ~2=6.757,p=0.009)。本研究表明,输尿管软镜联合钬激光治疗肾结石具有手术创伤小、恢复快的优势,对患者的肾功能具有一定程度的影响,但会尽快恢复。     

2型糖尿病患者代谢清除率与血清游离脂肪酸的相关性

目的:探讨2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)患者代谢清除率(metabolic clearance rate,MCR)与血清游离脂肪酸(nonesterified fatty acid,NEFA)、甘油三酯(triglyceride,TG)和胆固醇的相关性。方法:选择2014年10月至2016年12月我院收治的127例T2DM患者,测量患者身高、体重,并计算身体质量指数(BMI),进行口服糖耐量试验、胰岛素释放试验,检测血清脂质的水平。将T2DM患者按MCR值分为低MCR组(63例)、高MCR组(64例),比较两组间临床指标的差异,评价MCR、HOMA-IR与变量间的相关性。结果:T2DM患者BMI、TG、空腹血糖和糖化血红蛋白(Hb A1C)均高于参考值;T2DM患者低MCR组Hb A1C、空腹血糖、总胆固醇(total cholesterol,TC)、TG、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和NEFA明显升高(P0.05),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)明显降低(P0.05);相关分析显示:MCR与HDL-C呈显著正相关(P0.05,r=0.215),与TC、TG、LDL-C、Hb A1C、NEFA均呈显著负相关(P0.05;r=-0.191,-0.380,-0.216,-0.587,-0.356)。结论:2型糖尿病患者MCR降低,与Hb A1C与血清NEFA水平呈负相关。MCR不仅能评价胰岛素抵抗,而且能反映机体糖脂代谢水平。     

六十载春华秋实 而今迈步从头越——写在中国科学院微生物研究所建所六十周年之际

正六十年,在历史的长河中只是弹指一挥间,却是微生物所极不平凡的一甲子。六十年来,全所上下,和衷共济,倾力奉献,在探索中前行,在改革中发展,在创新中升华。半个多世纪的不舍昼夜、风雨兼程,微生物所已经发展成为一个具有雄厚基础、强大实力和广泛影响的综合性微生物学研究机构。微生物所六十年的发展历程,是中国微生物学科发展的缩影,也是微生物所人响应国家需求、推进微生物科技事业发展和服务国计民生的纪实篇章。     

柑橘大实蝇滞育和非滞育蛹体内海藻糖含量的调控

【目的】通过比较柑橘大实蝇Bactrocera minax蛹滞育期与滞育前和滞育后以及滞育蛹与非滞育蛹体内海藻糖和葡萄糖含量的变化、海藻糖合成代谢途径中关键酶的活力变化以及关键酶基因的表达量变化,明确蛹滞育期间海藻糖合成代谢途径中关键酶对海藻糖含量的调控。【方法】利用分光光度法检测柑橘大实蝇滞育前(1日龄蛹)、滞育期(30,60和90日龄蛹)以及滞育后(120和150日龄蛹)蛹体内海藻糖与葡萄糖含量的变化,以及海藻糖合成代谢途径中的海藻糖-6-磷酸合成酶(TPS)、海藻糖-6-磷酸磷酸酯酶(TPP)和海藻糖酶(Tre)活力的变化;利用实时定量荧光PCR(qPCR)检测TPS,TPPB,TPPC-1,TPPC-2和Tre-1基因表达量的变化。向1日龄蛹体内注射20-羟基蜕皮酮(20E)作为处理(以注射10%乙醇为对照),分别于注射后1和30 d比较处理组与对照组蛹体内海藻糖与葡萄糖含量、关键酶活力以及上述基因表达量的差异。【结果】柑橘大实蝇蛹进入滞育后,海藻糖含量显著升高,葡萄糖含量无显著变化; TPS和TPP的酶活力以及TPS,TPPC-1和TPPC-2表达量在化蛹后逐渐升高,于滞育期达到最高水平,维持至羽化前显著下降;TPPB表达量在整个蛹期无显著差异; Tre酶活力以及Tre-1表达量在化蛹后逐渐升高,于滞育早期达到最高水平,随后显著下降,羽化前再次显著上升。注射20E后1 d,与对照组相比,处理组蛹体内海藻糖与葡萄糖含量、关键酶(TPS,TPP和Tre)活力以及TPS,TPPC-2和Tre-1表达量无显著变化,TPPB表达量显著下降,TPPC-1表达量显著上升;注射后30 d,与对照组滞育蛹相比,处理组非滞育蛹海藻糖含量显著上升,葡萄糖含量、TPS和Tre酶活力、TPS和Tre-1表达量显著下降,TPP酶活力以及TPPB和TPPC-2表达量无显著差异。【结论】柑橘大实蝇蛹体内海藻糖的含量在合成代谢途径中关键酶的调控下,随着滞育状态发生变化,表明海藻糖与滞育之间存在密切的关系,但其作用机理仍待进一步研究。     

甜瓜S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶基因的克隆及白粉病诱导表达分析

为探讨S-腺苷甲硫氨酸脱羧酶(S-adenosylmethionine decarboxylase,SAMDC)基因在甜瓜抵御白粉病菌中的作用,根据已知EST序列和甜瓜基因组数据库,在甜瓜抗白粉病品种‘Yuntian930’中克隆获得该基因的全长编码序列,命名为CmSAMDC(GenBank登录号为KF151861)。生物信息学分析表明,CmSAMDC的主开放阅读框(mORF)长1 095 bp,编码364个氨基酸,预测分子量为40 kDa。聚类分析表明,CmSAMDC预测蛋白与黄瓜和四季橘中该蛋白的同源关系最近,并与其他双子叶植物聚为一类。原核表达分析表明,CmSAMDC以融合蛋白形式表达,相对分子量约为40 kDa,与预测一致。实时定量表达分析表明,CmSAMDC基因受白粉病诱导表达,在接种后48 h表达量达到峰值,为接种前的7倍,并且在甜瓜的根、茎、叶、卷须中均有表达。结果提示该基因可能参与了甜瓜的抗白粉病反应。     

蝴蝶兰花瓣瞬时转化体系建立

蝴蝶兰花器官中基因功能的研究受遗传转化效率低和遗传转化周期长的制约,而花瓣瞬时表达体系是一种快速分析基因功能的有效手段。该研究以蝴蝶兰‘大辣椒’花瓣和萼片为实验材料,通过农杆菌介导的瞬时转化方法,分析了侵染的菌液浓度、侵染时间、乙酰丁香酮浓度和共培养时间等4个因素对β-葡糖醛酸酶(GUS)报告基因表达效率的影响,以探寻其瞬时表达的最佳条件;并将查尔酮合成酶(chalcone synthase,CHS)基因RNAi干扰载体瞬时转化蝴蝶兰花瓣,共培养3d后观察转化材料中花色表型以及色素的变化,并利用半定量RT-PCR来检测CHS基因转录水平的表达。结果表明:(1)农杆菌菌液OD600为0.6、侵染时间60s,在重悬液中添加150μmol/L乙酰丁香酮,共培养3d,GUS瞬时表达率最高(85.01%)。(2)转基因蝴蝶兰花瓣颜色明显变淡,色素含量降低。(3)半定量PCR检测表明,CHS基因的转录活性相比于对照组显著降低。该实验成功的在蝴蝶兰花器官中建立了一种快速基因功能验证方法,为后期蝴蝶兰基因功能研究和育种工作提供技术支持。     

益生菌在血糖调控中的研究进展

随着经济的快速发展和人们生活方式的改变,糖尿病等代谢性疾病的发病率在全球范围急剧上升,特别是在我国形势尤其严峻。以往研究结果表明,肠道微生物与人体健康密切相关,糖尿病患者的菌群结构与健康人群存在显著差别。益生菌疗法由于具有低成本、高安全性和高可靠性的特点,在疾病预防和重塑肠道微生态健康方面具有良好的应用前景,逐渐成为糖尿病防治的研究热点。本文系统地阐述了血糖调控益生菌的基础研究和应用开发进展,为血糖调控益生菌制剂及相关功能性食品的开发提供理论参考和指导依据。     

吸烟对下呼吸道诱导痰中 IFN-γ、IL-4、IL-5表达的影响

目的探究吸烟对下呼吸道诱导痰中干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-5(IL-5)表达的影响。方法采用酶联免疫吸附法检测2016年3月-2017年3月沈阳医学院附属第二医院收治的下呼吸道感染患者88例(其中吸烟者44例作为观察组,非吸烟者44例作为对照组)、健康体检者76例(其中吸烟者34例作为观察组,非吸烟者42例作为对照组)诱导痰中IFN-γ、IL-4和IL-5的表达,并对结果进行数据分析。结果 (1)健康体检者中吸烟者与非吸烟者相比,吸烟者IL-4、IL-5水平显著上升,IFN-γ水平显著下降(P0.05);(2)下呼吸道感染患者中吸烟者与非吸烟者相比,吸烟者IL-4、IL-5水平显著上升,INF-γ水平显著下降(P0.05)。结论吸烟与下呼吸道诱导痰中IL-4、IL-5和IFN-γ的水平有关,吸烟可使下呼吸道诱导痰中IL-4、IL-5水平升高而IFN-γ的水平下降。