基于基因组重测序的长江上游瓦氏黄颡鱼群体遗传结构

利用基因组重测序的方法获取高通量SNP标记,分析了长江上游三峡大坝-白鹤滩大坝之间8个不同江段(太平溪、巴南、合川、岷江口、宜宾、邵女坪、桧溪、冯家坪)共136尾瓦氏黄颡鱼(Pelteobagrus vachelli)的遗传多样性和遗传分化水平,阐明了长江上游瓦氏黄颡鱼群体遗传结构。结果显示:(1)三峡库区太平溪群体和巴南群体具有较高的SNP(singlenucleotide polymorphism)数量和核苷酸多样性指数,遗传来源丰富,其遗传多样性高于其他群体;上游的岷江口、宜宾、邵女坪和冯家坪群体遗传来源单一。(2)瓦氏黄颡鱼存在3个不同的遗传分支,且不同遗传分支之间存在较大的遗传分化。(3)群体SNP数量和核苷酸多样性指数与河流坡降呈显著负相关,群体遗传分化指数与地理距离和隔离时间无显著相关性。研究结果表明,在三峡大坝-白鹤滩大坝江段,瓦氏黄颡鱼上游群体具有更低的遗传多样性,更易发生遗传漂变作用,在鱼类遗传多样性保护中需要特别关注;瓦氏黄颡鱼存在3种显著的遗传结构,应视为3个不同遗传单元进行种质资源管理。     

针刺人迎穴在改善颈性眩晕症状的临床疗效分析

目的:探究针刺人迎穴在改善颈性眩晕症状的临床疗效。方法:选取2012年3月到2013年6月在我院门诊的颈性眩晕患者130例,随机分为对照组与观察组,其中对照组50例,采取常规针刺方法,观察组80例采用毫针针刺人迎穴。将两组患者的眩晕改善时间,眩晕持续时间,临床有效率,显效率等数据进行分析。结果:观察组在平均眩晕改善时间为2.3±1.3天优于对照组的3.7±1.6天(P0.05)。在眩晕平均持续时间、有效率、显效率方面与对照组均无明显差异。结论:针刺人迎穴具有改善颈性眩晕的效果,与传统针刺方法疗效相当,而且在眩晕改善时间的方面较传统针法更具优势,具有临床推广意义。     

连续静脉-静脉血液透析滤过治疗多器官功能障碍综合征的临床疗效研究

目的:探讨连续静脉-静脉血液透析滤过(continuous veno-venous hemodialysis filtration,CVVHDF)治疗多器官功能障碍综合征(MODS)的临床疗效。方法:选择我院ICU自2015年1月-2017年2月收治的MODS患者50例作为研究对象,根据随机抽签原则分为观察组与对照组,每组25例。对照组在常规内科治疗基础上给予机械通气治疗,观察组在对照组基础上采用CVVHDF治疗,两组治疗观察时间为30d。观察和比较两组ICU停留时间、呼吸机辅助时间、治疗后APACHEⅡ评分与MODS评分、治疗前后血清IL-6与TNF-α含量的变化及随访6个月的死亡情况。结果:治疗后,观察组ICU停留时间和呼吸机辅助时间均短于对照组(P0.05),APACHEⅡ评分与MODS评分分别为22.33±2.49分和6.42±1.98分,均明显低于对照组(62.19±7.45分和7.29±1.67分)(P0.05)。治疗后,两组的血清IL-6与TNF-α含量都明显低于治疗前,且观察组的血清IL-6与TNF-α含量均明显低于对照组(P0.05)。随访6个月,观察组与对照组的死亡率分别为4.0%和20.0%,观察组的死亡率低于对照组(P0.05)。结论:CVVHDF治疗MODS能有效清除患者炎症因子,缩短ICU停留时间和呼吸机辅助时间,降低患者的死亡率。     

甘薯链霉菌中潜在纤维素酶增效蛋白基因克隆、表达及产物活性检测

近些年来发现有些非纤维素酶组分的蛋白能协同纤维素酶系水解纤维素,大大提高纤维素酶的酶解效率,这些蛋白统称为增效蛋白。增效蛋白的发现为木质纤维素的水解提供了新的思路。本研究根据NCBI上甘薯链霉菌中潜在纤维素酶增效蛋白基因(登录号WP_009327266)设计相关引物,从甘薯链霉菌c DNA中扩增出潜在目的基因,命名为Sip1,并构建重组质粒Sip1-p ET-32a(+)转入大肠杆菌,得到重组菌Sip1-p ET32a(+)-E.coli BL21和Sip1-p ET32a(+)-E.coli Rosetta(DE3)。表达的粗蛋白产物具32.3%纤维素酶增效活性。     

湖北省烟粉虱生物型鉴定

本研究利用mtDNA COI基因片段作标记,通过序列分析对湖北省烟粉虱Bemisa tabaci(Gennadius)生物型进行了鉴定。结果表明当阳、仙桃、天门、监利、宜昌和武汉6个地理种群烟粉虱的720bp COI基因序列的同源性高达100%,且该6个地理种群烟粉虱与USA-Q型烟粉虱、湖北Q型烟粉虱的同源性也高达100%。枣阳地区烟粉虱与Israel-B型烟粉虱、我国浙江B型烟粉虱、我国湖北B型烟粉虱的同源性为100%。由此可见当阳、仙桃、天门、监利、宜昌和武汉6个地区烟粉虱生物型属于Q型,仅枣阳地区烟粉虱属于B型。     

哺乳动物非经典分泌信号肽介导重组EGFP蛋白向毕赤酵母细胞壁转运

为探索哺乳动物非经典分泌信号肽在毕赤酵母表达系统中引导重组蛋白分泌的作用,本研究将一段来源于小鼠同源异型框蛋白(En2)的分泌信号序列(SS)融合至EGFP蛋白的N端,在毕赤酵母中表达。实验结果显示SS信号肽能通过一种不同于经典的内质网-高尔基体分泌通路的方式将EGFP蛋白分泌至细胞膜表面,与α交配因子前导肽相比,显著降低了细胞的内质网压力。本研究提示哺乳动物非经典分泌信号肽可作为递送重组蛋白至酵母膜表面的一项工具。     

应用RGS双荧光替代性报告载体提高CRISPR/Cas9对猪BMP15基因的打靶效率

我国是家猪养殖和消费大国,提高母猪的繁殖力对于促进我国生猪产业的发展具有重要的作用。排卵率和产仔数是影响家畜繁殖力的关键因素,其中BMP15 (bone morphogenetic protein 15)基因已被鉴定是控制绵羊排卵数和多胎性状的一个主效基因,然而目前在家猪BMP15基因中尚未发现类似绵羊多胎品系的天然突变。基于高等哺乳动物基因功能的保守性和CRISPR/Cas9(clustered regularly interspaced short palindromic repeats/CRISPR-associated protein 9)等基因组编辑技术对动物基因组定点修饰的高效性,应用CRISPR/Cas9技术对家猪BMP15基因进行精确的遗传修饰,使家猪获得类似多胎绵羊的天然突变,对于研究该基因对家猪繁殖力的影响以及培育高繁殖力家猪新品系具有重要的意义。本研究通过CRISPR/Cas9对长白猪胎儿成纤维(porcine embryonic fibroblasts, PEF)细胞中BMP15基因进行打靶,T7E1分析显示打靶效率仅有5%。随后通过共转染RGS双荧光替代性报告载体(RFP-GFP surrogate reporter),并应用流式细胞术分选出双荧光细胞,富集到基因组被CRISPR/Cas9修饰的细胞,使基因打靶效率提高至18%。本研究结果表明,应用RGS双荧光替代性报告载体可以有效提高CRISPR/Cas9在PEF细胞中对BMP15基因的打靶效率,为今后通过体细胞核移植技术培育BMP15基因编辑猪进行了有效的探索。     

硬骨鱼类体细胞核移植的研究

本文用不同属、科、目的硬骨鱼类作材料进行体细胞核移植研究。鲫鱼（Ｃａｒａｓｓｉｕｓａｕｒａｔｕｓ）、鲮鱼（Ｃｉｒｒｈｉｎｕｓｍｏｌｉｔｏｒｅｌｌａ）和尼罗罗非鲫（Ｔｉｌａｐｉａｎｉｌｏｔｉｃａ）的体细胞核（头肾细胞）移植到鲤鱼（Ｃｙｐｒｉｎｕｓｃａｒｐｉｏ）的成熟去核卵中,通过继代核移植,在鲫鱼体细胞核和鲤鱼去核卵的属间组合中,获得发育到血液循环期的幼鱼;在鲮鱼体细胞核和鲤鱼去核卵的亚科间组合中,获得发育到心脏跳动期的晚期胚胎;在尼罗非鲫体细胞核和鲤鱼去枚卵的目间组合中,获得发育到肌肉效应期的胚胎。由于是直接用成鱼体细胞核作供核体进行核移植,因而能够克服供体鱼和受体鱼不同步产卵的困难。实验结果表明,这对进行硬骨鱼类核质杂交研究无疑是一种简便而又有效的方法。     

基于RAPD改进的分子标记技术

随机扩增多态DNA(RAPD)由于经济、快速简便、不需预知模板DNA信息、对模板DNA要求较低,因此被大量应用于昆虫学的研究中,如昆虫的鉴定分类、构建连锁图谱、系统发育分析等。但RAPD也有许多缺点,主要是一种显性标记而不能区分杂合体和纯合体,结果的重复性易受多因素的影响等。针对这些缺点,人们通过将RAPD与其它检测技术如聚丙烯酰胺凝胶电泳、单链构象多态(SSCP)、变性梯度凝胶电泳(DGGE)等相结合,提高了其分析的灵敏度和稳定性;再者,还将RAPD标记发展成为其它更稳定的或共显性的标记,如SCAR、微卫星等,为RAPD进一步的应用开阔了前景。文章对这些检测和转化的改进技术进行综述。     

清栓酶（蝮蛇抗栓酶）的药理研究与临床应用进展

清栓酶（蝮蛇抗栓酶）的药理研究与临床应用进展中国蛇协蛇毒研究所邓禄延,覃公平,胡征林自本世纪八十年代起,蛇毒抗凝制剂在我国研制及应用于临床以来,相继有尖吻蝮蛇毒制剂去纤酶,长白山陆生白眉蝮蛇毒制剂清栓酶（蝮蛇抗栓酶）及江浙蝮蛇毒制剂江浙蝮蛇毒抗栓酶（...