新月旋孢腔菌胞内漆酶的活性测定及漆酶基因ClLac1克隆

漆酶是一种含铜的多酚氧化酶,与植物病原菌致病性、黑色素合成及降解木质素等方面相关。为明确漆酶在新月旋孢腔菌的催化作用及其催化活性,以2,2′-连氮-双(3-乙基苯并噻唑-6-磺酸)（简称ABTS）为底物,利用分光光度计在420nm下测定胞内漆酶活力,结果表明酶活测定最佳反应条件为缓冲液pH2.8、Cu2+浓度500μmol/L和0.6mmol/L ABTS。根据漆酶Cu2+结合保守结构域设计了1条引物,对新月旋孢腔菌漆酶基因进行克隆,并通过RACE技术克隆了其全长cDNA序列。开放阅读框长1,803bp,     

不同接头的白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究

毕赤酵母作为比较成熟的真核表达系统[1],它具有许多优点,表达产物直接分泌到胞外,这有利于产物的分离纯化.白蛋白干扰素在毕赤酵母中表达的研究也具有很重要的意义.研究白蛋白与干扰素之间的接头蛋白不同对表达量的影响.通过重叠PCR构建不同接头的白蛋白干扰素重组子,然后分别用salⅠ酶切线性化,通过电转仪转入毕赤酵母SMD1168,在MD板上进行培养,分别挑取10个克隆进行甲醇诱导表达,筛选出表达量最高的一个.最后在相同的条件下,分别将表达量高的进行诱导表达,表达产物通过SDS-PAGE鉴定,由于表达产物中有杂蛋白,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定融合白蛋白干扰素的表达量,由已知浓度的白蛋白干扰素标准曲线,可以计算出不同接头的白蛋白干扰素的表达量,这对工业化生产具有指导意义.     

四川省兽类一科的新纪录——犬吻蝠科

在阆中县进行动物调查时,采得一组翼手类标本,经鉴定为犬吻蝠科的皱唇蝠,为四川兽类中科的新记录,现报道如下(重量单位:克,长度单位:毫米):     

四川南充市郊区鼠型小兽群落组成研究

2005年3月～2006年2月对四川省南充市郊区的鼠型小兽进行了调查。共捕获鼠型小兽1499只,隶属于2目2科7种,根据优势种分为两个群落:微尾鼩 黑线姬鼠群落中除优势种外,还捕到少量大足鼠、社鼠、褐家鼠和灰麝鼩,主要分布于住宅区以外的农田林地;褐家鼠 黄胸鼠群落,有少量微尾鼩,分布于住宅区。采用Shannon-Weiner多样性指数、均匀性指数、Hurlbert生态优势度和物种数对沟谷地、半坡地、坡顶地以及住宅区4种微生境中捕获的小兽进行了分析。住宅区的多样性指数、均匀性指数最高,其次为沟谷地。     

兔边缘系统背侧海马呼吸相关神经元

本工作对35只家兔在背侧海马区用玻璃微电极记录了103个神经元单位放电,分类如下:56个神经元属非呼吸节律性自发的间歇性放电,可分为两种类型:一为长时振荡型放电;另一为短时振荡型放电。47个神经元出现呼吸节律同步性自发放电,可分为三种类型:吸气型15个单位;呼气型9个单位;跨时相型23个单位。上述结果提示:边缘系统海马的呼吸信息在情绪活动的协调方面可能是一个有趣的问题。     

四川省兽类新纪录

在鉴定整理1987年我省采集的翼手类标本时,发现有两种属四川省兽类新纪录,现报道如下(重量单位:克;长度:毫米):大菊头蝠Rhinolophusluctuslanosus1987.10.5,采于汶川县卧龙自然保护区三江保护站附近(1180米)。1♂,体重31,体长76,耳长38,尾长44,后足长17,前臂长67,颅全长29.1,颅基长23.8,腭长8.5,颧宽14.4,眶间宽3.3,后头宽12.8,上齿列长10.5,下齿列长12.6。特征:体型较大。体毛长密而卷曲,呈暗褐色,毛尖灰白色。耳廓背基部毛呈棕褐色。前臂长67mm。鞍状叶基部向两侧扩展成翼状,位于鼻孔之上端。阴茎骨长8.5mm,后端略膨大且分叉。本种数量稀…     

Cre-loxP重组酶技术敲除酿酒酵母丙酮酸脱羧酶编码基因pdc1和pdc5

目的:分别构建含有酿酒酵母丙酮酸脱羧酶基因pdc1和pdc5同源序列loxP-kanMX-loxP的质粒,敲除丙酮酸脱羧酶基因。方法:以两端含40 bp pdc1或pdc5的同源序列为引物,以pUG6质粒DNA为模板,通过PCR扩增loxP-kanMX-loxP基因敲除片段,将其分别插入pMD18-T、pEASY-T3,构建表达载体pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5并测序,构建后的质粒利用醋酸锂转化法转化酿酒酵母H5,经筛选鉴定后进行摇瓶发酵试验。结果:分别含有1693、1672 bp目的片段pdc1-loxP-kanMX、pdc5-loxP-kanMX的质粒pTWCL-PDC1与pTWCL-PDC5构建成功,发酵试验显示重组酿酒酵母H5-01与H5-02较原始菌株的乙醇产量分别下降了14.53%与17.54%,证明pdc1或pdc5基因被敲除。结论:利用Cre-loxP重组酶技术分别敲除了酿酒酵母pdc1和pdc5基因,为后续在酿酒酵母中连续敲除pdc1和pdc5奠定了良好的技术基础。     

稳定表达黄嘌呤氧化还原酶的人类神经外胚层瘤PFSK细胞株的建立(简报)

黄嘌呤氧化还原酶(Xanthine Oxidoreductase,XOR)参与嘌呤类物质代谢,是嘌呤代谢的关键酶。在哺乳动物中,XOR以两种可互相转换的形式存在,即黄嘌呤脱氢酶(XDH)和黄嘌呤氧化酶(XO)。同时,由于XOR催化反应的副产物是氧自由基,因此XOR参与氧自由基产生的作用也日益受到重视。大量动物实验模型已经表明在氧化性组织损伤过程如脑缺血/再灌注等病理情况下,XOR活性增强导致的氧自由基积聚是造成组织损伤的直接原因之一。但是,人类XOR的研究却由于正常人类XOR活性和基因表达水平较低(仅     

鸭瘟病毒gB蛋白N端主要抗原域的表达及间接ELISA检测

在分析鸭瘟病毒gB蛋白抗原性的基础上,设计一对引物克隆gB蛋白N端抗原性较好的抗原域编码基因.将克隆的基因定向插入pET-32a的EcoR Ⅰ和HindⅢ之间,构建了gB蛋白主要抗原域原核表达载体pET-gB1.将pET-gB1质粒转化BL(21)宿主菌后,对培养和表达条件进行了优化,实现了DPV gB蛋白主要抗原域的高效表达.免疫印迹试验表明获得的表达产物具有良好的反应原性.应用His·Bind亲和层析柱纯化重组DPV gB蛋白,以纯化的重组gB1蛋白作为检测抗原,初步建立了检测鸭瘟病毒抗体的igB1-ELISA.结果表明,抗原的最佳包被浓度为6.5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶80,阳性标准初步定为:待检血清OD490＞0.4,且待检血清OD490/阴性血清OD490＞2.应用igB1-ELISA对鸭血清样品进行检测,结果表明igB1-ELISA与全病毒包被的iDPV-ELISA符合率达到95.6%.     

小灰山椒鸟的育雏行为

2003年4—8月采用所有事件取样法(All—occurrence recording)和焦点动物取样法(Focal animal sampling)对小灰山椒鸟的育雏行为进行了研究。结果表明：两性参与育雏,育雏期19-20d,育雏方式3种．有3个育雏高峰期：上午7：00—11：00、中午13：00-14：00、下午16：00-19：00;育雏初期雌鸟暖雏,夜间卧巢;雌雄均清理巢内垃圾;领域性弱,巢区内营巢鸟类多,但护雏性强,对进入巢周鸟类驱逐性强,两性均护雏。