蛋白质分子识别新认识

近几年,国际上肽库技术得到了迅速的发展,在抗原决定簇的定位及分子识别方面积累了大量的数据．就近3年来蛋白质分子识别方面的观念和认识上的深化进行了综述：a．蛋白质间的相互作用是少数几个关键残基的弱相互作用提供了大部分结合能;b．这种相互作用可以用小肽来模拟．因此通过研究小肽片段的特异性相互作用,可以揭示蛋白质间相互作用的本质,为小肽分子药物和疫苗的设计,乃至复杂超分子体系的研究提供了理论基础和实验依据．     

模拟谷胱甘肽过氧化物酶活性三肽的制备及其性质研究

开发一种制备硒代谷胱甘肽（ＧｓｅＨ）的新方法。以合成的谷氨酰－γ－丝氨酰－甘氨酸（Ｇｌｕ－Ｓｅｒ－Ｇｌｙ）三肽为原料,经苯甲基磺酰氟（ＰＭＳＦ）活化,用Ｈ＿２Ｓｅ突变Ｓｅｒ成硒代半脱氨酸（ＳｅＣｙｓ）制成ＧＳｅＨ。用元素分析及氨基酸分析确定此三肽的组成并推导出此三肽的结构。研究了ＧＳｅＨ的性质．结果表明,此三肽具有谷胱甘肽过氧化物酶（ＧＰＸ）的活性,其活力比其它一些小分子有机模拟物高,在性质上也有优于它们的一些特点,其动力学行为与天然ＧＰＸ类似。     

胃息肉患者胃液菌群结构分析

目的 分析幽门螺杆菌（H. pylori）在胃息肉患者中的感染情况,利用高通量测序技术分析胃息肉患者的胃液菌群组成,探究整体菌群变化与息肉发生的关系。方法 收集7例胃息肉患者的胃液（GP组）,7例胃体黏膜未见异常体检者胃液为对照组（C组）,统计H. pylori感染情况。提取细菌总DNA,采用高通量测序技术对16S rRNA基因的V3‒V4高变区测序,分析比较菌群结构。结果 （1）7例胃息肉患者中5例H. pylori阳性,H. pylori感染率为71.4% ;对照组与胃息肉组H. pylori感染率无差异。（2）两组之间菌群α多样性差异无统计学意义,β多样性有显著区别。门水平上,两组之间菌群差异无统计学意义;属水平上,胃息肉组胃液奈瑟菌属（P＜0.05）、嗜血杆菌属（P＜0.05）、Parvimonas属（P＜0.05）比例显著增加。结论 胃息肉患者胃液菌群发生紊乱,以奈瑟菌属、嗜血杆菌属、Parvimonas属显著增加为特征。     

化学修饰对胰激肽释放酶稳定性及其性质的影响

以自制高活性ＰＰＫ为材料,在氰基硼氢化钠存在下经水溶性乙醛酸修饰其表面氨基,使其抗不可逆热失活稳定性有显著提高。结果表明,修饰ＰＰＫ在等电点等基本性质方面都有变化。修饰ＰＰＫ的ＢＡＥＥ活性为天然酶的８２％,氨基修饰度为５８％,抗蛋白酶水解,贮藏和冻干稳定性都有加强。     

质粒介导的AmpC β-内酰胺酶共有抗原表位的预测及原核表达

目的 应用生物信息学方法预测质粒介导的AmpC β-内酰胺酶(pAmpCs)共有抗原表位,并实现pAmpCs共有抗原表位-Trx融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定。 方法 运用多序列比较工具找出各型质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的共有相对保守区域,并利用分子生物学软件Biosun预测各亚型pAmpCs的可及性、抗原性、抗原表位、柔性、亲水性等参数,通过综合分析后找出其共有的抗原表位区域pAmpCs1。根据大肠杆菌的密码子偏好性,把氨基酸序列pAmpCs1转变为核苷酸序列pampcs1,采用重叠延伸PCR合成pampcs1片断,并构建原核表达载体pET32a(+)/pampcs1。通过测序验证,对含有该重组质粒的大肠杆菌BL21(DE3)进行诱导表达,表达产物经SDS-PAGE电泳分析后,用Ni-NTA亲和层析法纯化pAmpCs1-Trx融合蛋白,利用western blotting方法鉴定融合蛋白的抗原性。 结果 根据预测结果找到了一段各型pAmpCs共有的抗原表位区域pAmpCs1,成功构建了原核表达载体pET32a(+)/pampcs1,经IPTG诱导后得到了分子量约为23KD的融合蛋白,经Ni-NTA亲和层析柱纯化后,通过western blotting鉴定该蛋白能被抗AmpC β-lactamases多抗识别。 结论 成功构建了pAmpCs1-Trx融合蛋白原核表达载体,并获得了高纯度的pAmpCs1-Trx融合蛋白,初步证明它的抗原性,为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了良好的基础。     

细胞内表达的小干扰RNA靶向丙肝病毒5′保守区的研究

将丙型肝炎病毒(HCV)基因组的5′非编码区(5′UTR)插入到报告基因绿色荧光蛋白(eGFP)和荧光素酶(luciferase)的上游,并构建基于Ⅲ型启动子的表达载体,这种载体能产生针对HCV 5′UTR的小干扰RNA.然后将含有HCV 5′UTR的eGFP/luciferase和能产生小干扰RNA的质粒共转染入Hela细胞,通过测定细胞发出的荧光和化学发光强弱来观测抑制效果.实验结果表明,与HCV 5′UTR特异性小干扰RNA表达质粒共转染的细胞无论从定性还是从定量上所测得的荧光和化学发光强度都明显低于阴性对照,且细胞密度经核染色与对照组无明显区别.这揭示了小干扰RNA确实能引起HCV特异基因如5′UTR的沉默,且转染进去的小干扰RNA表达质粒对细胞没有毒害作用.这一工作是通过载体直接在细胞内表达小干扰RNA(siRNA)而不是化学合成的,可以使小干扰RNA在细胞内得到稳定表达,因此本研究设计的siRNA表达载体不仅可以有效沉默HCV 5′UTR,而且该系统可以灵敏地筛选更有效的针对HCV的siRNA,因而这一结果为研究利用RNA干扰进行基因治疗HCV感染做了初步探索.