枯草芽孢杆菌嘌呤合成途径的修饰对腺苷积累的影响

【目的】研究嘌呤操纵子中purF、purM、purN、purH和purD基因的共同过表达对枯草芽孢杆菌发酵生产腺苷的影响。【方法】利用温敏质粒pKS1,以单交换的形式增加了purF基因在基因组上的拷贝数,同时将强启动子P43插入嘌呤操纵子中,使嘌呤合成途径中purF基因及其下游purM、purN、purH和purD基因的表达水平得到加强,通过实时定量PCR(Realtime Quantitative PCR,RT-qPCR)测定相关基因(purF、purM、purN、purH和purD)的转录水平;通过酶活性检测分析关键酶基因扩增对PRPP转酰胺酶活性的影响;通过发酵实验考察出发菌株与工程菌株的生长、耗糖和腺苷积累情况。【结果】实时定量PCR结果表明,purF、purM、purN、purH和purD基因的表达水平均有不同程度的提高,嘌呤合成途径中关键酶PRPP转酰胺酶的活性是出发菌株的2.4倍。摇瓶发酵实验发现工程菌腺苷产量较出发菌提高17.5%,糖苷转化率增加26.1%。5 L罐发酵实验表明,虽然工程菌的菌体生长受到一定的影响,但在相同发酵周期内腺苷产量比出发菌提高了9.7%。【结论】嘌呤操纵子中purF、purM、purN、purH和purD基因转录水平的增强能够提高腺苷的产量,为通过代谢工程技术改造腺苷生产菌提供了理论依据和研究思路。     

中药银杏制剂的心血管药理效应:机制与展望

银杏是传统的活血化瘀中药,银杏制剂是现代科技开发的植物药中最为成功的案例之一.目前研究较多的银杏制剂是银杏酮酯,其主要活性成分为银杏黄酮、银杏内酯等,具有较为广泛的心血管药理效应,对多种心血管疾病具有较好的预防和治疗效果.本文对中药银杏制剂的主要活性成分、心血管药理效应及其机制、研究展望做一述评.     

雌激素受体α抑制剂MPP在小鼠囊胚形成和滋养层干细胞中影响YAP核定位

目的研究雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα)抑制剂甲基-哌啶-吡唑(methyl-piperidino-pyrazole,MPP)在小鼠桑葚胚和滋养层干细胞(trophoblast stem cells,TSCs)中对YAP的影响。方法收集昆明(kunming,KM)小鼠8-细胞胚,置于0μmol/L(对照组)和5μmol/L(实验组)MPP中培养,分别于8h、12h和24h后收集各组桑葚胚,采用免疫荧光技术观察YAP表达,采用Real Time-PCR检测MPP处理24h后Yap mRNA表达变化;将小鼠TSCs置于0μmol/L、2.5μmol/L、5μmol/L和10μmol/L MPP中培养,48h后观察细胞形态改变,分别检测Sox2、YAP、Cdx2 mRNA和蛋白表达水平。结果小鼠8-细胞胚经MPP处理24h后,桑葚胚YAP蛋白核定位水平降低,Yap mRNA水平无显著改变;经MPP处理48h后,5μmol/L组小鼠TSCs细胞出现细胞团块,10μmol/L组细胞增殖明显受抑制;与对照组相比,5μmol/L组细胞Sox2 mRNA表达水平升高,Yap和Cdx2 mRNA水平无显著改变,团块状细胞中的YAP蛋白失去明显的核内定位,SOX2和CDX2阳性细胞的表达更加密集。结论 ERα在小鼠桑葚胚和TSCs中调控YAP核定位,其在TSCs细胞中的作用与CDX2和SOX2的表达有关。     

乳腺内不可触及病灶的定位活检应用价值

目的:探讨乳腺内不可触及病灶(NPBL)的定位活检技术及其在乳腺癌早期诊断中的临床应用价值。方法:对彩超发现的4459个和钼靶发现的25个NPBL分别行麦默通旋切和钩丝定位活检,确定病灶的病理类型。结果:4459个NPBL中3196个病灶为乳腺腺病或伴纤维腺瘤样结节(71.7%),1198个为纤维腺瘤(26.9%),11个为分叶状肿瘤(0.2%),17个为导管内乳头状瘤(0.4%),9个为乳腺导管原位癌,5个为导管原位癌伴微浸润,23个为浸润性癌(恶性占0.8%)。25个钼靶发现的NPBL中乳腺腺病13例(52%),导管原位癌7例,导管原位癌伴微浸润2例,浸润性癌3例(恶性占48%)。结论:超声引导下麦默通和钼靶引导下钩丝定位切除可以对NPBL做出定性诊断,具备创伤小、手术时间短和定位精准等特点,对提高乳腺癌的早期诊断率、降低死亡率具有一定的临床应用价值。     

微粒对内皮细胞的影响及其机制

微粒是细胞活化或凋亡时释放的磷脂囊泡,直径大小为100-1000 nm,并且带有亲缘性细胞的特异性抗原标记。外周血中的细胞微粒主要来源于血小板、白细胞、红细胞和内皮细胞。由于细胞活化和凋亡机制不同,所以从不同细胞上脱落的微粒大小、磷脂和原始细胞细胞质的含量也不同。微粒有潜在的生物学作用,包括对血管内皮细胞舒张功能的作用和对内皮细胞的促进生长的作用。除此之外,微粒能通过携带部分自身成份转移到靶细胞来介导细胞的活化、细胞表型的改变和细胞功能的重组。在疾病发生过程中,外周血中微粒的数量显著增加,这提示微粒可能参与了很多疾病的发生与发展,所以微粒日益受到临床工作者的重视。本文对微粒的形成原因、微粒成分,对内皮细胞的作用及其机制进行综述。微粒作为内皮细胞相关疾病一个新的治疗靶点,阐明其与内皮细胞功能障碍发生机制之间的关系,有助于为内皮细胞病变相关性疾病的治疗提供新的途径。     

P119驱动amiRNA介导的PL基因沉默对草莓果实硬度的影响

果胶裂解酶基因(Pectate lyase,PL)是调控果实软化的重要靶点。本研究测定了红颜草莓果实在发育过程中果胶裂解酶活性变化和硬度变化规律,并通过人工小干扰RNA(artificial micro-interfering RNA interference,amiRNA)技术,以拟南芥miR390a前体序列作为沉默PL基因的骨架,在番茄果实特异性启动子P119的驱动下,通过农杆菌介导转入草莓果实中瞬时表达,通过RT-PCR分析草莓瞬时转染后PL基因的表达量,并检测了PL沉默对果实硬度的影响。结果表明,随着草莓果实发育的推进,果胶裂解酶活性呈逐渐上升趋势,与果实硬度呈负相关;构建了基于拟南芥miR390a为骨架的amiRNA靶向栽培草莓中的PL基因;在番茄果实特异性启动子P119驱动下,miRNA前体可以在草莓果实中瞬时表达;草莓果实中总PL基因表达量下降达34. 5%;基因沉默组果实硬度比对照组更高,且沉默对果实颜色发育进程无明显影响。该结果表明:果胶裂解酶主要在果实发育后期调节细胞壁的解离,采用amiRNA沉默PL基因可以延缓草莓果实软化进程。     

虎纹捕鸟蛛生物学特性的观察

虎纹捕鸟蛛（Ornithoctonus huwenna)个体大,毒性强,有强烈的攻击性,蛛毒含量大,采毒易,是进行蛛毒,蛛蛋白研究的理想试验材料,研究在饲养条件下虎纹捕鸟蛛的生活习性,捕食特点,雌蛛产卵,护卵习性,卵的孵化,蜕皮及幼蛛的发育,以及耐饥饿,耐干旱能力。     

右美托咪定辅助麻醉对老年腹部重症病患术后谵妄以及Ramsay镇静评分的影响

目的:探讨右美托咪定辅助麻醉对老年腹部重症病患术后谵妄以及Ramsay镇静评分的影响。方法:将2018年6月-2019年6月我院收治入院的48例拟行手术的老年腹部重症患者为研究对象,随机分为观察组和对照组各24例,分别给予负荷剂量1μg/kg右美托咪定和等量盐水注入。术中观察组继续泵入右美托咪定0.2μg/(kg·h),对照组输注等量生理盐水。记录不同时间段神经元特异性烯醇化酶(NSE)、血清S100β蛋白、白细胞介素-1β(IL-1β)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的浓度,拔管时间,苏醒时间,术后1、2、3d谵妄发生情况及术后不同时间段的Ramsay镇静评分。结果:T0时,两组NSE、血清S100蛋白、TNF-α及IL-1β的浓度比较,差异均无统计学意义(P0.05);T1-T3时,两组NSE、血清S100蛋白、TNF-α及IL-1β的浓度持续升高,且观察组NSE、血清S100蛋白、TNF-α及IL-1β的浓度均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05);T4时,两组均显著下降,且观察组低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组患者拔管时间及苏醒时间均短于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。观察组患者在术后谵妄总发生率少于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。与术后30 min时相比,两组术后1 h、6 h、12 h、24 h、48 h时均显著降低,且观察组在术后30 min、1 h、6 h、12 h、24 h、48 h均低于对照组,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:右美托咪定辅助麻醉应用于老年腹部重症患者,可保持患者心率及平均动脉压平稳,缩短拔管时间及苏醒时间,减少术后谵妄发生情况,且缩短谵妄发生时间,值得临床推广普及。