Mo MLV gag-pol基因在NIH3T3细胞中的表达和鉴定

目的 构建含MoMLV gag-pol基因的重组表达载体,实现其在NIH3T3细胞中稳定表达。方法 应用RT-PCR方法反转录并扩增gag-pol基因,克隆入真核表达载体pcDNA4/HisMaxA上,构建重组表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol,用脂质体法转染NIH3T3细胞,Zeocin筛选稳定表达细胞株,通过SDS-PAGE分析检测表明, gag-pol基因在NIH3T3细胞实现了表达,产物相对分子质量(kD)为194.78×103。然后,将逆转录病毒载体导入此细胞系,包装逆转录病毒。用PCR与标记基因补救分析法检测野生型辅助病毒。结果 酶切鉴定的片段大小分别为5.2-kb,与预期大小一致,经Zeocin筛选后获得稳定表达细胞株,SDS-PAGE实验表明产物融合蛋白相对分子质量(kD)为194.78×103,与预期相符。脂质体转染包装细胞,嘌呤霉素加压筛选出高病毒滴度(4.0×106CFU/ml)的细胞克隆,且未检测到辅助病毒。结论 本工作构建的融合表达载体pcDNA4/HisMaxA-gag-pol及其在NIH3T3细胞中的表达,构建成功具有靶向性的逆转录病毒包装细胞系,该细胞系能够包装出高滴度的逆转录病毒,为肝细胞的基因治疗提供了一种新的基因转移系统。     

高空测报灯监测粘虫区域性发生动态规律探索

【目的】为探索粘虫Mythimna separata Walker成虫种群监测的有效工具。【方法】2014年在全国17个省(市、区)设立了19个高空测报灯观测点,通过各地全年系统监测逐日蛾量。【结果】掌握了粘虫全年南北往返迁飞的种群发生动态,总结出了粘虫全年发生代次(时间)、发生区域和发生数量。【结论】高空测报灯诱测数据反映了粘虫各代次发生时间规律,反映了粘虫种群数量变动规律,体现出区域间种群数量相关性,种群数量变动关系密切的因子有待探讨。此方法为做好其他迁飞性害虫的监测提供了可借鉴的手段和方法。     

分阶段pH调控提高2-酮基-L-古龙酸生产

为了提高酮古龙酸菌Ketogulonicigenium vulgare和巨大芽胞杆菌Bacillus megaterium生产2-酮基-L-古龙酸(2-KLG)的生产效率,分析了pH对K.vulgare和B.megaterium生长和产酸的影响,发现K.vulgare和B.megaterium的最适生长pH值分别为6.0和8.0,但是K.vulgare的糖酸转化活力在pH7.0时达到最大值,因此提出了三阶段pH控制策略(第一阶段:0～8h,pH8.0;第二阶段:8～20h,pH6.0;第三阶段:20h至发酵结束,pH7.0)以促进K.vulgare生长和2-KLG生产。结果表明,三阶段pH控制策略的实施进一步提高了2-KLG的产量(77.3g/L)、生产强度(1.38g/(L·h))和L-山梨糖消耗速率(1.42g/(L·h)),分别比恒定pH7.0时提高了9.7%、33.2%和25.7%。     

介绍红火蚁的野外采集和实验室饲养的方法

介绍了红火蚁Solenopsis invictaBuren的田间采集、蚁群分离和实验室饲养和操作方法及红火蚁人工饲料的制备,结合实验室饲养经验描述了日常红火蚁饲养所需设备和器具,简述红火蚁饲养的关键技术和注意事项。为开展红火蚁的生物学、生态学和药剂筛选提供切实可行的方法。     

具有间充质干细胞特征的CD105+细胞在胎儿多种组织器官的分布

CD105是骨髓间充质干细胞的特征性表型之一。为了研究机体各组织器官也存留有间充质干细胞,首先检测胎儿各组织CD105^ 细胞的分布,进而分离胎儿各组织CD105^ 细胞。将CD105^ 细胞向脂肪和成骨细胞诱导分化。结果表明胎儿心、肝、肺、血管、肌肉、皮肤等组织含有CD105^ 间充质干细胞。在间充质干细胞分化为脂肪细胞时,CD105表达明显下降。地塞米松可以促进脂肪细胞形成并提高了培养液中甘油三酯的含量。而向成骨细胞分化时,诱导的成骨细胞胞浆内外有电子密度高的钙盐沉积。以上结果提示,分布于多种组织的间充质干细胞异常分化可能与疾病的发生有关。     

松嫩平原西南部生态环境中的氟

松嫩平原西南部属东北平原的一部分,为一自然环境高氟区和地方性氟病高发区。 本文在研究该区土壤、粮食、蔬菜和居民饮用水等环境要素中氟的含量水平的基础上,指出以往作为饮用水源的浅层地下水含氟量高,是导致当地居民氟病发病率高的主导因素,取深层地下水替代浅层水作为饮用,是防治地方性氟病的有效途径。     

渭北旱地苹果园生草覆盖下不同肥料配施对土壤养分和酶活性的影响

试验采取裂区设计,主处理分别为行间生草覆盖和清耕,副处理为4个施肥处理,具体为不施肥(CK)、单施有机肥(M)、氮磷钾配合(NPK)、有机肥与氮磷钾肥配合(MNPK),采用微孔板荧光法研究生草覆盖条件下不同肥料配施对果园土壤酶活性的影响.结果表明: 生草刈割覆盖后土壤含水量、有效磷、硝态氮含量和β-1,4-木糖苷酶(βX)、β-1,4-N-乙酰基氨基葡萄糖苷酶(NAG)、β-1,4-葡萄糖苷酶(βG)、纤维二糖水解酶(CBH)活性均显著高于刈割前,土壤全氮、有机碳含量和碱性磷酸酶(AKP)活性在刈割前后差异均不显著.生草覆盖处理的土壤全氮、有机碳含量和土壤βX、NAG、βG、CBH、AKP活性在刈割前后均显著高于清耕处理,但土壤含水量、有效磷、硝态氮含量在刈割前则显著低于清耕处理.生草覆盖条件下,有机肥添加处理(M和MNPK处理)的土壤全氮、有效磷、有机碳含量在刈割前后均显著高于CK和NPK处理,其中MNPK处理的βX、βG、CBH、NAG、AKP等 5种酶活性在刈割后均显著高于NPK处理.清耕条件下,MNPK处理的土壤有效磷、有机碳、硝态氮、全氮含量和βG、CBH、AKP活性在刈割前后均显著高于CK和NPK处理.冗余分析结果表明,土壤酶活性与土壤养分因子之间存在显著相关关系,可以利用土壤酶活性来反映土壤肥力状况.综上所述,生草覆盖条件下,有机无机配施显著提高了土壤养分含量、增强了土壤酶活性,是改善当前果园土壤质量下降的重要措施,对当地苹果产业的可持续发展具有重要意义.     

肽疫苗的研究进展

肽疫苗可分为3大类,即抗病毒相关肽疫苗、抗肿瘤相关肽疫苗、抗细菌及寄生虫感染的肽疫苗。肽疫苗具有安全、廉价、特异性强、易于保存和应用等特点。本主要介绍有关肽疫苗的设计、提高免疫原性及体内的稳定性、复合肽疫苗、临床评价等方面的研究和应用进展。     

中国台湾布丹蛛属1新种（蜘蛛目：巨蟹蛛科）

本文报道了蜘蛛目巨蟹蛛科布丹蛛属1新种：宽大布丹蛛Bhutaniella latissima sp. nov.该标本采自台湾岛屏东县大汉山自然保护区,标本保存于湖北大学生命科学学院动物行为与进化中心。     

同种异基因骨髓移植GVHD动物模型的建立及其病理生理学机制初探

目的：建立稳定的异基因骨髓移植GVHD（移植物抗宿主病）动物模型,并初步了解其病理生理学机制。方法：以BALB／c（H-2^d）雌性小鼠为受者,接受8Gy致死剂量的。Co全身照射后,输注雄性C57BL／6（H-2^b）供鼠的脾细胞和骨髓细胞,观察受鼠的体征、造血功能恢复及生存时间的变化,并进行病理学、嵌合体和T细胞亚群及相关细胞因子的检查。结果：模型组小鼠在移植后出现了典型的GVHD症状;肠、肝、脾、皮肤的病理学分析均属于Ⅳ度GVHD;嵌合体植入成功;以7、14和21d为检测时间点,发现模型组鼠体内T细胞亚群移植后较移植前CD3^＋CD4^＋T细胞数量减少,CD3＋CD8＋T细胞显著升高,CD4^＋和CD8^＋T细胞比例严重倒置,随着时间变化比值会逐渐升高,但仍然处于较显著的倒置水平;血清中IFN-γ、TNF-α在移植后＋7d表达显著增高,尤其是IFN-γ的表达在＋7d达峰值;IL-4和IL-10的水平在移植前后几乎没有变化。结论：建立了稳定的GVHD动物模型;此模型发病过程中,CD8^＋T细胞介导的CTL细胞毒性作用可能要大于CD4＋Th介导的细胞因子效应;IFN-γ、TNF-α炎症因子在GVHD的早期发挥重要作用;IL-4、IL-10的低水平分泌与急性GVHD的高发病率有关。