香菇C91-3菌凋亡相关基因24414功能域片段原核表达载体的构建

目的构建高效快速且方便的His-标签原核表达体系,对香菇C91-3凋亡相关基因24414功能域进行克隆。方法根据香菇C91-3凋亡相关基因24414的基因序列,分别设计特异性上下游引物,采用PCR方法,以24414基因序列为模板,扩增出24414基因的功能域序列。并将功能域基因连入pMD19-TSimpleVector克隆载体中,进行蓝白斑筛选,挑选出阳性菌落,提取质粒经双酶切及PCR验证后,进行基因测序。将克隆载体上目的基因连入pET-32a原核表达载体,构建重组质粒。转化入E．coli JM109宿主菌,经双酶切验证后,进一步测序鉴定验证重组质粒。结果PCR扩增出大小为747bp的基因片段,测序结果显示与香菇C91-3,凋亡相关基因24414的功能域片段同源性为100％,并成功构建了原核表达体系。结论重组原核表达载体pET-32a-24414的成功构建为进一步研究香菇C91-3凋亡相关基因24414功能域的表达纯化及生物学活性奠定了基础。     

脑胶质瘤IDH1基因突变HRM检测方法的初步建立

在大多数弥漫性人脑胶质瘤中常伴随着异柠檬酸脱氢酶基因(isocitrate dehydrogenase gene)1(IDH1)的突变.有着此突变的胶质瘤患者在临床上有良好的预后效果,因此可以作为胶质瘤患者的分子标记.通过提取石蜡切片中的胶质瘤组织DNA,优化条件以初步建立IDH1基因突变高分辨率熔解曲线分析法(high resolution melting,HRM)检测方法.用HRM对胶质瘤石蜡包埋组织标本中IDH1基因检测突变,并用直接测序法对比,观察反应体系和反应条件的可行性.正交试验结果证明引物最适退火温度为53℃,20μL HRM反应体系中,0.6μmol/L引物,2.5 mmol/L Mg2+,60 ng DNA模板为最佳.HRM IDH1基因突变的结果和直接测序法结果一致,但灵敏度更高.说明此HRM方法简单,特异性强,准确可靠,可为IDH1突变检测的临床应用提供借鉴依据.     

特异性干扰PB-1基因对H5N1高致病性禽流感病毒复制的影响

针对H5N1高致病性禽流感病毒PB-1基因,通过RNA干扰技术,设计siRNA,研究其抑制病毒复制的效果.siRNA转染MDCK细胞并接毒后,病毒滴度测定、Real-time PCR和间接免疫荧光试验结果显示,所设计的siRNA(ps-PB1-777)具有明显的抑制病毒复制的效果,PB-1基因的拷贝数和病毒蛋白表达都下降.设计的siRNA可显著抑制高致病性禽流感病毒的复制.因此,本研究中PB-1基因的有效siRNA可为预防和治疗H5N1高致病性禽流感提供合理的技术支持和物质储备.     

蛋白质质谱分析的无标记定量算法研究进展

作为发现疾病相关生物标志物的重要途径,定量研究已成为蛋白质组学的热点问题.随着实验方法的发展和改进,定量数据处理算法也在不断更新和完善.将现有的无标记定量方法归纳为需要/不需要鉴定结果两类方法,分析比较了两类方法的异同及优缺点,详细讨论了所涉及的主要算法,总结了一些常用的无标记定量软件及对应的网络资源.展望了无标记定量数据分析的未来研究方向.     

进行性骨化性纤维増殖不良症临床及基因突变分析

目的：研究一例具有超经典型临床特征的FOP患者,并对其ACVR1/ALK2基因进行分析。方法：根据患者的大踇趾畸形和进行性异位骨化等表现进行临床诊断,确诊为FOP。经患者及家属同意,采集患者、父母外周血,提取DNA,通过PCR扩增并直接测序测定ACVR1基因全部外显子序列,以此来确定突变位点。结果：患者具有超经典型FOP的临床表现：先天性大踇趾畸形,先天性双手拇指、食指远端关节僵直和进行性异位骨化,父母无FOP的相关临床表现。基因测序分析示该患者在ACVR1第七外显子发现存在c.1067G〉A（p.G356D）杂合错义突变,而其父母无此杂合突变。结论：该患者在ACVR1的c.1067G〉A（p.G356D）发生杂合错义突变,这有助于我们更好地理解认识中国FOP患者的临床表现和发病机制。     

原发性肝癌染色体8p、16q 遗传变异的研究

目的:分析人肝癌(HCC)组织中染色体8p、16q部分基因及染色体片段的遗传变异及与临床病理关系,初步筛选HCC相关的抑癌基因。方法:应用聚合酶链反应-变性聚丙烯酰胺凝胶-银染法分析45例HCC组织标本中染色体8p和16q的杂合性丢失(LOH)及微卫星不稳定性(MSI)。结果:发生LOH的总频率为68.89%(31/45),其中D16S511位点的发生LOH率最高为53.33%(24/45),其次是D8S261(39.02%,16/41)和D8S499(34.88%,15/43)。MSI出现的总频率为11.11%(5/45),出现在三个微卫星位点(D8S261、D8S499及D16S511)上。结论:染色体16q23、8p22-21.3及8p12区域的LOH发生频率高,其可能存在与HCC发生发展相关的新的抑癌基因,特定位点的遗传变异可能与HBV感染、临床病理恶性程度等预后因素相关。     

甲状腺浆细胞瘤1 例及文献复习

目的:探讨甲状腺浆细胞瘤的病理学特点及临床表现。方法:对1例甲状腺浆细胞瘤进行组织学表现、免疫组化染色观察及文献复习。结果:组织学特点:肿瘤细胞成分单一,大多数为分化较为成熟的肿瘤性浆细胞,胞核圆形或卵圆形,大小较一致,常偏位,染色质呈车辐状或钟面状。免疫组化特点:肿瘤细胞表达CD20(++)、CD79a(+)、CD38(++)、CD138(+)、κ链(++)。结论:甲状腺浆细胞瘤是甲状腺一种少见的肿瘤,应同炎症反应的浆细胞增生及低分化癌、淋巴瘤、髓样癌等相鉴别,可以通过免疫组化染色及形态学观察进行鉴别诊断。     

ThPOK在T细胞分化发育中的作用

ThPOK（T-helper-inducing POZ/Krueppel-like factor）又被称为Zbtb7b、Zfp67、cKrox,隶属于一个很大的转录因子家族——POK家族。ThPOK最初是被认为与Ⅰ型胶原蛋白基因的转录抑制有关,但近年来的研究发现,ThPOK在T细胞分化过程中至关重要,特别是对CD4^＋T细胞的分化发育起着命运决定的核心作用。该文综述了ThPOK在CD4^＋T细胞分化过程中的作用特点及其与另外两种重要转录因子GATA3和Runx3的相互作用关系,并在此基础上阐述了ThPOK在其他T细胞,如iNKT细胞、γδT细胞及效应CD8^＋T细胞中的作用功能。     

广东沿海的砂壳纤毛虫及3种国内新纪录

对广东沿海的砂壳纤毛虫进行了初步研究,涉及7属16种,其中3种确定为中国的新纪录:僧帽壳铃虫Codonella apicata Kofoid&Campbell,1929,陀螺形拟铃虫Tintinnopsis turbo Meunier,1919和膨胀细壳虫Stenosemella expansa Wailes,1925。另有3种为我国亚热带海域的新纪录:筒状拟铃虫Tintinnopsis tubu-losoides Meunier,1910,罗氏拟铃虫Tintinnopsis lohmanni(J rgensen,1927)Laackmann,1906和贪婪铃壳虫Codonella rapa Kofoid&Campbell,1929。其余10种为常见种:百系拟铃虫Tintinnopsis beroidea Stein,1867,尖底拟铃虫Tintinnopsis acuminata(Daday,1887)Kofoid et Campbell,1929,妥肯丁拟玲虫Tintinnopsis to-cantinensis Kofoid&Campbell,1929,筒状拟铃虫Tintinnopsis tubulosoides Meunier,1910,管状拟玲虫Tintinnopsis tublosa Levander,1900,长形拟铃虫Tintinnopsis clongata Daday,1887,罗氏拟铃虫Tintinnopsislohmanni(J rgensen,1927)Laackmann,1906,小领细壳虫Stenosemella parvicollis(Marshall,1934)Hada,1935,钟状网纹虫Favella campanula(Schmidt,1901)J rgensen,1924和贪婪铃壳虫Codonella rapa Kofoid&Camp-bell,1929。文章对其形态分类学做了简要描述。     

鄱阳湖区泥鳅遗传多样性研究

采用同工酶电泳、RAPD引物PCR扩增和线粒体DNA细胞色素b基因全序列3种方法,对鄱阳湖3种斑纹泥鳅的遗传结构进行分析。同工酶电泳显示3种斑纹泥鳅在LDH、MDH和EST这3种同工酶之间存在群体和组织差异;RAPD试验结果显示6条RAPD引物在18尾鄱阳湖泥鳅个体中共扩增出了169条不同分子量的RAPD标记,其中多态性带101条,多态性带的比例为59.56%,平均每个引物产生9.39条带和5.61条多态性带,不同斑纹泥鳅的遗传多样性指数显示3种斑纹泥鳅的遗传水平处于较高水平。以特异性引物进行PCR扩增,获得了1140bp的细胞色素b基因全序列。结果显示,3种不同斑纹泥鳅中检测出了1个共有单倍型和3个特有单倍型。与共有单倍型相比,大花斑泥鳅特有单倍型有91个变异位点,而小花斑泥鳅与无花斑泥鳅特有单倍型的变异位点为20和24个。基于单倍型构建的NJ树和MP树,显示大花斑泥鳅的特有单倍型EU145023处于独立的分支上,这反映出鄱阳湖地区不同斑纹的泥鳅之间在线粒体DNACytb基因中出现了一定距离的分化。