桂西北喀斯特移民区土地利用方式对土壤养分的影响

利用典型喀斯特峰丛洼地主要土地利用方式（灌草地、次生林地、果园、牧草地、旱地）的土壤养分测定数据,研究土地利用变化对土壤养分的影响.结果表明：土壤有机碳、全氮、有效氮含量随土地利用强度的增加而降低,灌草地和次生林地比果园、牧草地和旱地土壤有机质含量高86%～155%、全氮含量高62%～119%、有效氮含量高66%～215%（P<0.05）;全磷和全钾含量主要受养分来源的影响,受土地利用方式影响较小;速效磷含量主要受施肥的影响,有效钾含量则主要受植被覆盖和水土流失状况的影响.土地利用方式是影响土壤有机碳、全氮、有效氮、有效磷、有效钾等养分含量变化的重要因素.粗放的农业耕作降低了土壤养分并引起土壤退化,而植被恢复等措施可以培肥土壤.因此,喀斯特区域应改变粗放的农业耕作方式,加强施用有机肥和平衡施肥,对坡度≥25°的坡耕地采取“退耕还林还草”措施,以恢复和重建喀斯特地区生态环境,实现土地资源的可持续利用.     

成梯度增加的流体流动剪切力促进明胶基底上人脐静脉内皮细胞粘附

采用脉动平板流动腔 (flowchamber)系统 ,研究了的单水平流动剪应力加载 ,和从 5或 7.5dyne/cm² 开始的成梯度增加至 1 0或 1 5dyne cm² 的流动剪应力加载 ,在 5h、1 0h、2 4h对生长在明胶基底上的人脐静脉内皮细胞 (HUVEC)粘附性的影响 ,探讨了梯度增加的流动剪切力加载对细胞粘附能力的促进作用。实验结果表明 :与 7.5dyne cm² 的单一水平的加载相比 ,成梯度增加的流动剪切力可明显提高HUVEC在明胶基底上的粘附 ,增加HUVEC对流动剪应力的耐受程度 ,有利于引起HUVEC转变成与在体相同的形态和排列。     

正常人体淋巴细胞cDNA文库的构建

应用GIBCOBRL建库试剂盒建立了正常人体淋巴细胞cDNA文库。取新鲜的正常人外周血,分离出淋巴细胞,进行体外培养,提取总RNA,纯化mRNA,并将其反转录成cDNA,与SalI和NotI接头连接后插入λZipLox载体,体外包装后转染到Y1090宿主菌中,进行滴度测试及文库扩增。构建的正常人淋巴细胞cDNA文库含2-6×106重组子,克隆效率为5×1012重组子/g cDNA,插入片段长度约为1~5kb。扩增后的文库浓度为3×107重组子/μl,将文库稀释到10-6时所产生的噬菌斑密度最为适宜。试验结果表明,该库符合标准,所构建的正常人淋巴细胞cDNA文库为进一步筛选目的基因、制作基因芯片等提供了有效的工具。 Abstract:A lymphocyte cDNA library of normal human was constructed in order to obtain specific gene and prepare lymphocyte gene chips to detect the relative genes between psychiatric diseases and immunity.The lymphocyte was abstracted from fresh normal human blood and cultured in vitro.Total RNA of lymphocyte was extracted from the cultured cells and then mRNA was extracted further.Moreover,single-strand cDNA and double-strand cDNA were synthesized in turn.The double-strand cDNAs were ligated to SalI and NotI adaptor,which were later ligated to arms of λZipLox.Ligated-cDNAs were packed in vitro,and then infected E.coli Y1090.Titering the phage and amplifying the library.The lymphocyte cDNA library consisted of 2-6×106 recombinants with the length of 1~5kb and the cloning efficiency was 5×1012 recombinants/g cDNA.The amplified library was 3×107recombinants/μl in concentration and the number of bacteriophage plagues was the most suitable in density after it was diluted to 10-6 in concentration.The constructed cDNA library of normal human lymphocyte would be helpful to further detecting target genes and preparing gene chips etc.     

蓝树莓叶总黄酮对大鼠非酒精脂肪肝形成的防治作用

目的研究不同浓度的蓝树莓叶总黄酮对大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)形成的防治作用。方法将60只雌、雄各半的SD大鼠分成5组:正常组(N)喂以普通饲料;高脂饮食模型组(M)喂以改良的高胆固醇饲料,诱发形成脂肪肝模型;蓝树莓叶总黄酮低、中、高浓度实验组(HLF1、HLF2、HLF3)在喂高脂饲料的同时分别灌胃20 mg·kg-1、40 mg·kg-1、80 mg·kg-1体重蓝树莓叶总黄酮溶液各3 m L。实验180 d后取动物血清、肝脏,检测动物血清中总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白(HDL-C)、低密度脂蛋白(LDL-C)、谷丙转氨酶(AST)、谷草转氨酶(ALT)的含量,制备大鼠肝脏组织石蜡切片观察其病理学变化。结果蓝树莓叶总黄酮实验组各组与模型组相比,其血清的TC、TG、LDL-C、AST、ALT等含量均显著下降(P0.01),而HDL-C含量则明显上升(P0.01),且与蓝树莓叶总黄酮的浓度呈明显的量效关系。石蜡切片也显示蓝树莓叶总黄酮实验组动物肝脏中的脂质积累和脂肪肝病理学变化明显轻于模型组。结论蓝树莓叶总黄酮可以降低大鼠脂肪变性程度,对高脂饮食引起的脂肪肝具有明显的防治作用。     

重组人白细胞介素15融合蛋白的表达、纯化及免疫原性检测

目的:以白细胞介素15(IL-15)为靶点,研制类风湿性关节炎免疫治疗蛋白疫苗。方法:将N端融合破伤风类毒素(TT)表位的人IL-15基因克隆至带有His标签的原核表达载体pQE-30上,转化大肠杆菌M15,经IPTG诱导表达,获得重组人TT-IL-15融合蛋白(简称rtIL-15);目的蛋白经镍柱亲和层析纯化后,用Western印迹和HPLC进行鉴定;将rtIL-15与氢氧化铝佐剂混合,免疫BALB/c小鼠,检测疫苗的免疫原性。结果:双酶切鉴定和核苷酸序列测定结果表明重组融合表达质粒pQE-30-TT-IL-15构建正确,重组蛋白的表达量达到菌体总蛋白的20%,主要以包涵体形式表达,经过纯化、复性后,目的蛋白纯度达到95%以上;蛋白疫苗免疫小鼠后,能诱导高滴度的特异性的IL-15抗体。结论:在大肠杆菌中表达了重组人IL-15融合蛋白疫苗,并具有良好的免疫原性。     

系统表达HB-EGF转基因小鼠的建立

目的建立系统表达肝素结合性表皮生长因子（HB-EGF）的转基因动物模型,利用转基因动物模型研究HB-EGF与组织纤维化的关系。方法RT-PCR法克隆小鼠HB-EGF基因,将其插入Chickenβ-actin启动子下游,构建Chickenβ-actin-HB-EGF表达载体,利用显微注射的技术把表达载体注射到受精卵的雄原核中,建立HB-EGF转基因小鼠。利用特异引物PCR的方法鉴定转基因的基因型,采用Western Blot方法鉴定HB-EGF基因在全身组织的表达。分别取HB-EGF转基因鼠与同窝阴性小鼠的肝、肾、肺及膀胱组织进行Massion染色。结果建立了系统表达HB-EGF转基因小鼠,Western Blot发现其HB-EGF在肝、肺、肾及膀胱的表达与同窝阴性对照小鼠相比明显增加。Massion染色结果表明转基因鼠肝、肺、肾及膀胱组织纤维化程度明显高于同窝阴性对照小鼠。结论成功建立了系统表达HB-EGF转基因小鼠,HB-EGF的过度表可显著加重组织纤维化程度。     

地鳖纤溶活性蛋白的纯化及性质研究

通过硫酸铵分段沉淀、DEAE-纤维素柱和SephadexG-75柱层析从雌地鳖(Eupolyphagesinensiswalker)体内分离纯化到一种相对分子质量约为41.3kD的纤溶活性蛋白,纤维蛋白平板测定表明,该蛋白具有纤溶作用,经SDS-PAGE电泳显示为一条带,含糖量为10.5%。其水解纤维蛋白的比活力为547.86u/mg。该成分受蛋白抑制剂和丝氨酸蛋白酶抑制剂PMSF的抑制,但EDTA对其影响不大,提示该成分属于丝氨酸蛋白酶类。该成分在40℃下基本稳定,最适温度40℃,最适pH为8.0,其激活纤维蛋白溶解酶(PLG)的机制与尿激酶(UK)有一定区别。推测其可能是一种新的地鳖纤溶酶组分。     

Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌中的表达及其临床意义

目的：研究Cox-2、P504s、CK34βE12和P63在前列腺腺癌组织中的表达及其临床病理学意义。方法：用免疫组织化学法检测134例正常前列腺、良性前列腺增生和前列腺腺癌石蜡包埋组织中Cox-2、P504s、CK34βE12和P63的表达。结果：正常前列腺组织或良性前列腺增生组织未见或偶见P504s弱表达,但CK34βE12和P63均表达良好;前列腺腺癌组织中P504s表达良好,但CK34βE12和P63均表达消失,P504s表达阳性率为91．07％;与正常前列腺组和良性前列腺增生组相比,前列腺癌组的P504s阳性表达率存在显著性差异（p=0．001）。COX-2在正常的前列腺组织几乎不表达,而良性前列腺增生组织及前列腺腺癌组织均可见阳性表达,阳性率分别为4．76％和80．36％;COX．2阳性表达率在正常前列腺组或良性前列腺增生组和前列腺腺癌组间有显著性差异（p=0．0027）。COX-2与P504s表达存在相关性（r=0．377,P=0．039）;COX-2的表达与年龄、临床分期、分化程度、有无远处转移等临床病理特征间无明显相关关系。结论：联合P504s、P63、CK3413E12和COX-2免疫组化检测可提高前列腺腺癌病理诊断的准确率。     

植入雷帕霉素药物支架长度对围手术期心肌梗死的预测研究

目的:评估植入支架长度对围手术期心肌梗死的预测意义。方法:选择2005年6月到2009年2月解放军第454医院医院及长海医院341名冠心病患者,共植入351枚雷帕霉素药物支架,根据植入支架数目分为单个支架组(22-36mm)及重叠支架组(>36mm);根据植入支架长度分四组:①28-36mm②37-59mm③60-80mm④>80mm。观察支架植入后的急性并发症,术后心电图变化和术后1周内心肌肌钙蛋白的变化。结果:1.手术成功率达98.9%,急性并发症发生率为6.1%。住院期间主要不良心血管事件(MACE)发生率达到14.1%。2.根据植入单个支架组与重叠支架组比较,重叠支架组(>36mm)术后肌钙蛋白I(TNI)显著高于单个支架组(22-36mm):6.0%VS1.1%,P<0.05;而在住院期间MACE发生率上前者也明显高于后者:11.6%VS5.6%,P<0.05。3.在支架长度分组中发现支架长度>60mm组发生围手术期并发症及MACE事件明显高于28-36mm组,P<0.05;其余组间未见显著差异。结论:重叠支架植入方法及植入支架长度>60mm明显增加术后心肌损伤标志物释放,增加围手术期非Q波心肌梗死...     

吡虫啉降解菌群结构解析及菌株资源挖掘

新疆地区为控制棉花连作引发的棉蚜等害虫规模性爆发,长期大量使用了吡虫啉等农药,为获得适合当地气候土壤环境条件下,降解吡虫啉的微生物资源,以吡虫啉为唯一碳源从新疆棉花长期连作土壤中富集降解菌群,通过高通量测序分析其结构组成,利用多种常规培养基和通过高通量测序结果设计的培养基从吡虫啉降解菌群（BCL）中挖掘细菌资源。结果表明,菌群在门分类水平上主要由变形菌门（Proteobacteria,67.05%）;放线菌门（Actinobacteria,10.67%）、厚壁菌门（Firmicutes,9.99%）、绿弯菌门（Chloroflexi,4.1%）、酸杆菌门（Acidobacteria,2.84%）等组成;在属分类水平,占比最多的依次为Pseudomonas（16.33%）、Moraxella（11.14%）、Escherichia（4.57%）、Brochothrix（2.19%）等,未能分类的菌属占58.13%。通过基础无机盐等常规培养基分离出BP2、BP5、BP8、BG5、BJ7、BJ17、BJW8等48株菌株,分别隶属于为Shinella、Nocardioides、Agromyces、Sphingopyxis、Bacillus、Cellulosimicrobium、Bosea等属。经Trace element solution和 Vitamin solution培养基分离获得了BMV3、BMV5、BMV7.1、BMV14.1、BLE1、BLE3.1、BLE4、BLE5、BLE10.1等25株菌株,分别隶属于Paenibacillus、Ammoniphilus、Planococcus、Brevibacillus、 Paenibacillus、Bacillus、Sphingopyxis、Rhodococcus、Nocardioides等属。使用16S rRNA序列对比分析,BP5与Nocardioides nitrophenolicus NSP 41同源性达98.08%,BMV5与Ammoniphilus resinae CC-RT-E同源性达98.5%,其他菌株同源性介于98.29%~100%之间。可见依据高通量测序结果设计培养基,可以有针对性地从源自新疆棉区土壤的吡虫啉降解菌群中分离出一些低丰度菌属。在摸索分离新疆特殊环境微生物资源的同时也能为该地区生物修复农药污染土壤提供参考。