园艺植物细胞的超微结构研究

细胞是生物体最基本的结构和功能单位。综述了园艺植物的器官生长发育过程中细胞的超微结构研究,果实发育过程中的组织及细胞超微结构研究,逆境下不同器官细胞超微结构变化的研究。指出了当前研究中的不足及今后的发展方向。     

转基因水稻的研究和应用

植物基因工程的兴起,使特定的外源基因引入植物细胞成为可能。水稻转基因研究是国内外植物分子遗传学研究的热点之一。近十几年来,水稻转基因研究已取得显著进展。综述了水稻基因转化的方法、转基因技术在水稻上的应用及外源基因在转基因后代中的遗传表达的研究进展。     

DNA错配修复基因mutS的高效表达及表达产物活性鉴定

将DNA错配修复基因mutS（2.56kb）克隆于分泌型原核表达载体pET32a（+）上,以N端融合6个组氨酸的形式在E.coliAD494(DE3) 中进行了IPTG诱导表达。SDSPAGE分析证实有一与预期分子量相应的诱导表达条带,其表达量占全菌蛋白质的35％左右,且表达蛋白以可溶形式存在。利用固定化金属离子（Ni²⁺）配体亲和层析柱纯化目的蛋白,其纯度为90％以上。与含有错配碱基DNA双链的结合反应证明该蛋白具有特异性识别、结合含有错配碱基DNA双链的生物活性。     

嗜热菌HB8 Fe-S簇生物合成相关酶SufS与SufE重组酶的体外复合体功能

Fe-S簇在细胞的生物学过程中发挥重要作用,参与电子传递和基因调节等过程. 以嗜热菌HB8基因组为模板,通过PCR扩增获得Fe-S簇SUF系统生物合成途径中的sufS与sufE两个基因. 将目的基因分别连接到表达载体pET28a和pGEX-6P-1上,构建重组质粒sufS-pET28a和sufE-pGEX-6P-1. 重组质粒转化E.coli BL21(DE3)菌株进行蛋白质表达及亲和层析纯化. 研究证明,SufS具有脱硫酶活性,而SufE的存在可增强其活性. 体外重组实验表明,在60 ℃孵育SufS和SufE 1.0～2.5 h,其复合体脱硫酶活性约是单体SufS的2倍,但两者相互作用时间短暂. 若通过交联剂Mts Atf Biotin使SufS与SufE共价连接,此时SufSE酶活性是SufS的6倍左右,并可持续72 h.     

从人骨巨细胞瘤组织中纯化破骨细胞的简单方法

利用破骨细胞贴壁快以及耐胰蛋白酶地特性,采用0.25%胰蛋白酶和0.2%I型胶原酶来分离纯化骨巨细胞中的破骨细胞,即得到破骨细胞,并进行细胞学和分子生物学鉴定,包括抗酒石酸酸性磷酸酶染色和HE染色,并采用RT-PCR反应方法检测降钙素受体、组织蛋白酶K和破骨细胞分化因子受体的表达。该方法所得细胞纯度可达79.7%,具有破骨细胞表型特征。可用于生化和分子生物学研究,是进行骨细胞学研究的破骨细胞来源。     

自噬对过氧化氢诱导的2BS早衰细胞具有保护作用

过氧化氢诱导的2BS应激性早衰细胞后,自噬被发现增多.自噬特异抑制剂3-甲基腺嘌呤（3-MA ）阻断年轻和早衰的2BS细胞的自噬作用36 h,用共聚焦显微镜,分析转染了自噬特异标志GFP-LC3融合质粒的年轻和早衰细胞,发现细胞自噬颗粒均明显减少,且GFP-LC3染色阳性/ 细胞数目也大大减少,说明3-MA有效地阻断了细胞的自噬过程.分别用流式细胞术和荧光显微镜分析年轻和早衰细胞的凋亡情况,发现年轻的2BS细胞自噬阻断后凋亡未见显著变化,而早衰的细胞凋亡明显增加,且有细胞坏死.由此推断,3-AM可使过氧化氢诱导的2BS早衰细胞自噬明显减少,而凋亡被诱导增多,提示自噬对过氧化氢诱导的早衰细胞具有避免凋亡和维持存活的保护作用.     

淮河水系日本沼虾群体遗传结构和系统演化的线粒体COI序列分析

测定了淮河水系17个日本沼虾(Macrobrachium nipponense)野生群体共248个个体的线粒体细胞色素氧化酶亚基I(COI)部分序列,获得623 bp核苷酸片段,包括48个变异位点,定义了31个单倍型,共享单倍型有12个,整体单倍型多样性和平均核苷酸多样性均处于中间水平。AMOVA分析表明,17个群体间的遗传分化系数Fst=0.041 3(P0.05),群体间遗传分化较小。Kimura 2-paramter遗传距离在五河与焦岗湖、花家湖及瓦埠湖群体间最大,为0.014,在高邮和邵伯湖群体之间最小,为0.003。MP系统树与单倍型进化网络关系图具有较高的一致性,31个单倍型被分为3个进化枝,其中一个进化枝主要以下游群体为主,另外2个进化枝主要以中游群体为主。群体中性检验、错配分析表明,淮河日本沼虾近期曾经历过种群扩张。     

光照和温度对飞机草种子萌发的影响

通过在人工培养箱内模拟环境条件,探讨了不同光照和变温对飞机草种子萌发的影响。结果表明:在有光照状况下,飞机草种子在15℃/10℃～40℃/35℃条件下均能萌发,飞机草种子萌发的最适变温为30℃/25℃,萌发率达47.5%;而黑暗条件下,飞机草种子在15℃/10℃时不能萌发;在20℃/15℃～35℃/30℃范围内,温度越高,飞机草种子萌发高峰的出现时间越早;在15℃/10℃～30℃/25℃范围内,飞机草种子的萌发率随温度的升高而升高,超过30℃/25℃后,萌发率下降,而适当的光照有利于飞机草种子的萌发。飞机草成为入侵种并迅速扩散与其种子萌发对光照和温度的适应性密切相关。     

PCSK9的药理学筛选靶点

前蛋白转化酶枯草溶菌素9（PCSK9）基因编码神经凋亡调节转化酶即NARC1,通过影响肝LDLR水平,在胆固醇代谢中发挥了重要的作用.其功能获得型突变使血浆胆固醇水平增高,而功能缺失型突变降低胆固醇水平.流行病学调查显示,高胆固醇血症是动脉粥样硬化和心脏病的主要危险因素.一些患者运用当前的降胆固醇药物治疗仍不能达到推荐的目标LDL水平,PCSK9作为新的降脂靶点引起了广泛的关注.本文将对PCSK9的结构、功能和药理学靶点进行综述.     

雌二醇通过TGFβ1促进前列腺间质细胞MMP-2的表达

基质金属蛋白酶-2 (matrix metalloproteinase-2, MMP-2)在前列腺间质细胞中表达,转化生长因子β1(transforming growth factor β1, TGFβ1)可以通过上调基质金属蛋白酶的表达促进肿瘤细胞迁移. 我们近期发现,雌二醇可以诱导原代前列腺间质细胞TGFβ1表达. 由此我们提出,雌二醇通过上调TGFβ1促进前列腺间质细胞MMP-2表达的假说. 用实时定量RT-PCR和酶谱电泳技术分别检测添加雌二醇、TGFβ1、雌二醇和TGFβ1中和抗体、TG Fβ1和放线菌素D或TGFβ1和放线菌酮,对前列腺间质细胞系WPMY-1中MMP-2表达的调节作用及其分子机制;荧光素酶活性实验检测TGFβ1对MMP-2启动子活性的影响. 结果显示,雌二醇和TGFβ1均以剂量依赖方式促进WPMY-1中MMP-2蛋白水平表达,而对其mRNA表达没有调节作用. 雌二醇可以在转录和翻译水平上促进TGFβ1表达;TGFβ1不能促进MMP-2启动子的活性;雌二醇对MMP-2蛋白表达的促进作用可以被TGFβ1中和抗体阻断. 放线菌酮而非放线菌素D可以抑制TGFβ1对MMP-2表达的上调作用. 表明雌二醇可以在TGFβ1的介导下促进WPMY-1中MMP-2的表达;TGFβ1对MMP-2表达的促进作用是一种转录后的调节机制.结果提示,雌二醇上调间质细胞MMP-2的表达可能是雌激素参与前列腺癌转移和进展的机制之一.