黄檗(Phellodendron amuranse)叶片总RNA提取方法研究

以黄檗(Phellodendron amuranseRupr.)叶片为材料,分别利用改进的盐酸胍法、Trizol法、CTAB法提取黄檗叶片总RNA,通过RNA产率、纯度、电泳图谱等分析,确立了1种从黄檗叶片中快速分离总RNA的方法。研究结果表明,改进盐酸胍法所提取的总RNA的A260/A280为1.928,28S和18S条带清晰谱图完整性好,而且具有产率高、时间短、成本低的特点,所提取的总RNA适用于mRNA分离、cDNA文库的建立、Northern杂交等分析。     

太岳山油松人工林土壤呼吸对模拟氮沉降的短期响应

通过对山西太岳山油松人工林进行模拟氮沉降实验,探究土壤呼吸对模拟氮沉降刺激的短期响应动态。2015年7—8月,分3次分别对同一样地进行模拟氮沉降处理,水平皆为100 kg hm~(-2)a~(-1),同时采用LI-COR8150土壤碳通量自动观测系统全天候连续监测土壤呼吸动态,探究土壤施氮前后呼吸速率的动态变化以及呼吸速率与土壤温度和湿度的关联。结果表明:3次氮沉降处理均呈现出相同规律,土壤呼吸值在施氮后1 d内达到最大值,随即下降,在施氮后第3天土壤呼吸趋于稳定;第一、二次氮沉降处理3 d后土壤呼吸恢复到处理前的状态,并未表现出显著差异(P0.05)。第三次氮沉降处理后土壤呼吸并未恢复到施氮前的状态,土壤呼吸均值由1.99μmol m~(-2)s~(-1)显著上升到3.39μmol m~(-2)s~(-1)(P0.05)。这表明,氮处理对土壤呼吸产生了持续效应。施氮后土壤呼吸与土壤温度呈极显著(P0.001)指数相关(R_s=ae~(bT)),随着时间的推移,施氮处理解释土壤呼吸的相对贡献值由60%—69%下降到14%—59%。施氮提高了土壤温度敏感系数Q_(10)值;土壤温度和湿度(R_s=ae~(bT)W~c)能更好的解释土壤呼吸变化,解释率达到49%—91%。在全球变化的背景下,研究模拟氮沉降对土壤呼吸、Q_(10)的影响,可以对进一步模拟、预测全球暖温带地区森林碳循环和碳储量提供理论基础。     

小毛茛雌蕊群的授粉率及花粉管生长途径

为探讨毛茛属中是否具有与慈姑属中类似的花粉管再分配现象,对小毛茛开花后不同时期柱头的授粉率和花粉量进行了统计,并采用荧光显微术观察了其花粉在雌蕊群中的萌发及花粉管生长过程。该种的每朵花中含有39.2±9.9个离生心皮,开花过程常持续4~6d,开花2d后,柱头授粉率就可达到100%,平均每柱头的花粉量在3d后达到17.0±2.4粒。虽然开花的当天即有少数柱头落置有花粉粒,但花粉萌发常自开花的次日开始。花粉管先沿各雌蕊之向心一侧的组织中穿行至子房基部后部分花粉管转向胚珠,由珠孔进入珠心。从花粉粒落置于柱头到花粉管进入珠心大约需要24h。尽管毛茛属有着与慈姑属类似的多心皮雌蕊群,但大量的荧光显微观察表明,与慈姑属植物中不同的是,小毛茛的花粉管生长均局限于每一雌蕊中而不能穿过子房向其他雌蕊生长。雌蕊群的比较解剖发现野慈姑的子房基部有一条通向花托表面的孔道,这正是花粉管由一个雌蕊到另一个雌蕊的通路,但小毛茛的子房基部不存在此孔道。     

柿果实采后胞壁多糖代谢及其降解酶活性的变化

以富平尖柿为试验材料,研究了室温下柿果实硬度和细胞壁组分及其降解酶活性变化。结果表明,柿采后后熟期间果肉硬度持续下降,平均日下降3．1％,其中第7天到第16天下降最快,平均日下降6．9％。碳酸钠可溶果胶(SSP)和24％KOH可溶组分含量持续下降,与果肉硬度变化呈极显著正相关(r分别为0．9698和0．8084);而水溶性果胶(WSP)和4％KOH可溶组分含量不断上升,与果肉硬度变化呈极显著负相关(r分别为0．9566和-0．9392),螯合剂可溶果胶(CSP)与24％KOH不溶组分含量变化缓慢。多聚半乳糖醛酸酶(PG)和纤维素酶(Cx)活性均在采后第16天达最高值。相关性分析表明,PG活性上升可能是导致柿SSP含量下降和WSP含量上升的主要原因;而Cx活性则可能引起纤维素以及难溶性的半纤维素(24％KOH可溶组分)向易溶的半纤维素(4％KOH可溶组分)转化,从而导致了柿果肉硬度的下降。     

鲜茶叶中表没食子儿茶素没食子酸酯的高效提取技术研究

采用鲜磨匀浆提取、负压空化混悬组合技术对新鲜老龄茶叶中的没食子酸酯(EGCG)进行了高效提取,并与干燥老龄茶叶的传统提取工艺进行了对比。结果表明：组合工艺的最佳提取条件为新鲜老龄茶叶高温杀青后,再经常温水匀浆萃取,固液比为1:10,匀浆萃取时间为1 min,滤渣再经负压空化混悬固液提取,固液比为1:10,空化时间为15 min,空化提取2次。新鲜老龄茶叶最佳组合工艺的EGCG提取量为502.85 mg,优于传统干燥老龄茶叶工艺。     

原子力显微镜在植物学研究中的应用

原子力显微镜(AFM)是一种探测样品表面信息的有力工具, 它可以在空气和接近样品生理条件下成像, 同时也可以在皮牛(pico-Newton, 10-12 N)至微牛(micro-Newton, 10-6 N)水平上测量力的大小。本文主要介绍了自AFM发明以来, 其在植物大分子、细胞器、细胞、叶片等方面的应用, 并列举了目前 AFM存在的几点不足。     

茉莉酸甲酯(MeJA)对贯叶连翘悬浮细胞生长和贯叶金丝桃素产量的影响

培养基中添加100 μm01·L-1MeJA后,贯叶连翘悬浮细胞生物量增加量和贯叶金丝桃素(HF)的产量分别是未经MeJA处理的1.3倍和1.73倍;培养3 d时,培养基中添加100 μmol·L-1 MeJA能提高HF产量,是未经MeJA处理的2.4倍.     

干旱胁迫下黄檗幼苗cDNA消减文库的构建和分析

以干旱胁迫下的黄檗幼苗cDNA 为tester, 正常生长的黄檗幼苗cDNA为driver, 利用抑制性消减杂交技术(suppression subtractive hybridization, SSH)构建了干旱胁迫下黄檗幼苗的消减文库并对其进行了EST序列分析。从消减文库中随机挑取20个阳性克隆, 提取质粒进行酶切和PCR鉴定, 显示文库克隆的重组率大于95%, 插入片段大小大部分集中在300~800bp之间。随机挑取816个克隆进行测序, 得到265个基因。将其进行同源性分析, 划分为16类。获得了热激蛋白70、脱水响应蛋白(RD22)、通用胁迫蛋白、金属硫蛋白(MTII), 晚期胚胎丰富蛋白(LEA14)等44种与干旱胁迫相关的基因,它们涉及了植物的渗透调节、信号传递、转录调控、活性氧清除等方面。本研究为抗逆基因克隆和系统研究干旱胁迫下黄檗基因的表达奠定了重要的理论基础。     

泛素活化酶Ube1活性中心疏水区关键苯丙氨酸位点的丙氨酸突变对泛素传递活性的影响

泛素化系统调节真核细胞中几乎所有的生命活动,参与细胞内绝大多数蛋白质的降解,而疾病的发生往往伴随着相关蛋白质的异常。研究与疾病相关蛋白质的泛素化途径,通过该途径促进或抑制其活性对疾病的研究和治疗具有重大的意义。然而,细胞内的泛素传递网络错综复杂,天然条件下很难确认某一特定蛋白质的泛素化途径。我们前期工作建立的正交泛素传递途径中的泛素和泛素化酶含有特殊的突变,是鉴定某一特定E3下游蛋白质底物的有效手段。但E1与E2结合位点的突变设计仍有待完善。本研究重新审视了E1-E2的相互作用,着眼于泛素活化酶Ube1活性中心内的疏水区,突变了该区上3个关键的苯丙氨酸残基为丙氨酸,即F637A、F729A、F741A,并设置合理的实验对照来探究此突变对泛素从E1向E2传递活性的影响。结果表明,突变体m Ube1较好地阻断了与UbcH7的识别及Ub的传递,提示本研究涉及的3个关键苯丙氨酸位点对E1-E2互相识别的重要性,及其作为新的正交泛素传递途径中E1突变位点的合理性。     

miR-25抑制结肠癌细胞凋亡

为了通过结肠癌细胞实验,探究miR-25对结肠癌细胞凋亡的影响,本研究通过qRT-PCR检测结肠癌细胞中miR-25的表达情况;通过CCK-8法检测miR-25抑制剂转染组细胞活力状态;将miR-25抑制剂转染至结肠癌细胞,通过蛋白免疫印迹法检测结肠癌细胞中Bax和Bcl-2蛋白的表达情况;通过Caspase-3活性检测试剂盒检测结肠癌细胞中Caspase-3表达情况;通过流式细胞仪检测结肠癌细胞中ROS水平;通过Elisa试剂盒检测4-HNE、GSH和MDA含量。结果表明:结肠癌细胞中miR-25表达明显高于正常结肠粘膜组;miR-25抑制剂转染结肠癌细胞后,结肠癌细胞活力明显低于空载体对照组;miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中Bax蛋白显著高于空载体对照组(p0.05),且Bcl-2蛋白低于空载体对照组(p0.05),Caspase-3活性高于空载体对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于空载体对照(p0.05);miR-25抑制剂转染后,结肠癌细胞中ROS水平明显高于对照组(p0.05);miR-25抑制剂转染后结肠癌细胞中4-HNE (p0.05)和MDA (p0.05)含量明显增加,GSH (p0.05)含量显著降低。miR-25抑制剂可促进结肠癌细胞凋亡,其机制可能与增加结肠癌细胞中ROS水平导致氧化应激水平增强有关。