融冻型冻害对植物的影响

信阳位于大别山北麓,属亚热带向暖温带过渡地带。地垮北纬31°23′—32°40′,东径113°42′—115°56′之间。年均温度15.1℃,最冷1月,月均温1.7℃,最热7月,月均温25.3℃,全年≥5℃的日数269—274天,积温5250—5383℃,无霜期217—248天,冻结期30余天,降水量年均900—1200毫米。据地区气象资料分析,本区有10年一大冻,5年一小冻的灾害性天气。1992年3月1—5日寒潮就是10年一大冻,给信阳地区部分植物造成严重的冻害。     

C57BL/6小鼠脑脊液抽取——毛细玻璃虹吸管真空吸引技术

本研究旨在建立一种适合C57BL/6小鼠脑脊液(cerebrospinal fluid, CSF)抽取的方法。用膜片钳电极拉取仪拉制毛细玻璃虹吸管,用脑立体定位仪将小鼠头部固定,使之与身体之间角度为135°。在立体显微镜下分离小鼠颅脑背部皮肤和肌肉组织,暴露出小脑延髓池处硬脑膜,用毛细玻璃虹吸管(与硬脑膜平面之间角度为20°～30°)在Y形脊椎背侧动脉内侧1 mm处穿刺,进行CSF采样。第一次抽取后将毛细玻璃虹吸管与1 mL无菌注射器相连,构成负压装置,进行第二次抽取。结果显示,CSF抽取成功率为83.33%(30/36),CSF平均抽取量为(7.16±0.43)μL/只。另外,经鼻给予C57BL/6小鼠枸橼酸铁胺(ferric ammonium citrate, FAC)建立脑内高铁模型,采用本研究建立的CSF抽取技术进行采样。结果显示,生理盐水对照组CSF铁含量没有检出,FAC处理组CSF铁含量为(76.24±38.53)μmol/L,组间差异具有显著性。以上结果提示,本研究建立的小鼠CSF毛细玻璃虹吸管负压吸引技术具有简单易行、成功率高、抽取量多、出血率低的优点,适合在C57BL...     

海洋链霉菌Streptomyces olivaceus FXJ7.023来源多功能几丁质酶的克隆、表达及鉴定(英文)

碳水化合物水解酶家族在自然界碳素循环及农业废弃物中几丁质、纤维素等碳水化合物的生物质转化利用中发挥了重要作用。通过PCR技术从海洋链霉菌Streptomyces olivaceus strain FXJ 7.023的fosmid基因组文库中成功克隆得到1个全长885bp的编码295个氨基酸残基的包含1个19个氨基酸残基的N-末端信号肽的壳聚糖酶完全编码区。系统进化分析表明该基因编码蛋白与已报道的Streptomyces sp.SirexAA-E来源壳聚糖酶csnA同源性为71%,与Streptomyces coelicolor A3(2)来源的csn46A同源性为70%。将该编码区重组入原核表达质粒载体pET32a并转化大肠杆菌表达菌株BL21(DE3)plysS,添加IPTG在18℃条件下振荡诱导该蛋白表达,Ni2+-NTA亲和纯化获得分子量为50.3 kDa融合表达蛋白TrxA-SoCsn。该融合重组蛋白在最适反应条件下对底物胶体壳聚糖和羧甲基纤维素的最大酶活分别为3.673U/mg和1.302U/mg,最适反应温度分别为37℃和50℃,最适反应pH分别为pH5.0和pH6.0。TrxA-SoCsn相关的研究结果表明该酶在农业废弃物生物质转化等方面具有一定的应用潜力。     

抗犬细小病毒VP2蛋白单链抗体的制备与中和活性研究

为了减轻鼠源单克隆抗体(McAb)异源性引起的宿主免疫排斥反应,同时克服生产McAb成本高及费时费力等缺点,利用原核表达制备具有抗犬细小病毒(CPV)鼠源抗体可变区基因的单链抗体(single chain antibody fragment,ScFv)。提取实验室前期制备筛选的分泌具有良好中和活性抗CPV VP2蛋白McAb的杂交瘤细胞株总RNA,从反转录cDNA中扩增抗体重链可变区(VH)基因和轻链可变区(VL)基因并克隆到表达载体中,构建重组质粒p OPE101-ScFv;将重组质粒转化大肠杆菌进行诱导表达,通过蛋白免疫印迹(Western blot)实验、酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)和间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay,IFA)证明,利用大肠杆菌表达系统获得的ScFv具有和CPV特异性结合的能力,且具有中和活性,效价为1:20(0. 028μg/ml),为CPV的临床免疫治疗提供基础。     

中老年奶粉对肠道菌群、血清免疫球蛋白及钙的影响

目的了解中老年奶粉对中老年人肠道菌群、血清免疫球蛋白及钙的影响。方法用培养方法检测肠道菌群,速率散射浊度法测血清免疫球蛋白,化学法测血清钙。结果服用中老年奶粉后,中老年人肠道内双歧杆菌明显增加（P〈0．01）,血清IgG,IgA、IgM含量及血清钙水平也显著提高（分别为P〈0．001,P〈0．001,P〈0．01和P〈0．001）。结论中老年奶粉对调整中老年人肠道菌群、增加免疫力、预防脱钙等具有一定的作用。     

经基磷灰石(H A )的制备方法及其研究进展

HA生物材料作为最有发展前途的生物硬组织替代材料之一。已经成为生物医用材料研究的重点内容。本文在综合了大量的国内外文献的基础上,对羟基磷灰石的不同制备方法及国内外研究现状进行了总结及评论。并提出了相应的设想与展望。     

H1亚型猪流感病毒HA基因DNA疫苗的构建及其对Balb/c小鼠的免疫效果评价

以A/Swine/Guangdong/LM/2004(H1N1)猪流感病毒HA基因为模板,通过RT-PCR技术扩增出HA基因,并将其克隆到pCI-neo真核表达载体中,成功构建重组表达质粒pCI-HA,瞬时转染vero E6和293T细胞,通过免疫过氧化物酶单层细胞试验(Immunoperoxidase monolayer assay ,IPMA)、间接免疫荧光试验(indirect immunofluorescence assay, iIFA)和蛋白免疫印迹（Western blot,WB）实验证明,HA基因能够在哺乳动物细胞中有效表达并具有良好的生物学活性。将重组质粒三次免疫8w雌性Balb/c小鼠后,ELISA试验和中和试验结果表明该重组质粒能够诱导小鼠产生较高的抗体滴度,并具有良好的中和活性。因此为H1亚型猪流感DNA疫苗的研究奠定了理论基础。     

小鼠核因子κB受体活化因子配基活性区的克隆、表达及生物活性分析

核因子κB受体活化因子配基是诱导破骨细胞分化、成熟的关键因子,在生物医学研究中应用广泛。本实验以小鼠的骨髓细胞cDNA为模板,采用PCR技术获得小鼠核因子κB受体活化因子配基活性区基因,并将该基因克隆至His标签的融合蛋白表达载体pET28a(+),经鉴定正确的质粒转化至BL21表达菌株中。通过调节诱导目的蛋白表达的培养温度、IPTG浓度及诱导时间,筛选出重组融合蛋白表达的最佳条件。将纯化后的重组蛋白稀释成不同浓度,刺激小鼠破骨前体细胞Raw264.7细胞分化,经抗酒石酸酸性磷酸酶染色后可见破骨细胞的形成,表明该重组蛋白具有较好的生物活性,可替代商品化的鼠源核因子κB受体活化因子配基。     

新型纳米银胶体溶液体外对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的抑制作用及机制

目的探讨新型纳米银胶体溶液体外对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)的抑制作用及机制。方法以MRSA为研究对象,采用涂布法检测新型纳米银胶体溶液的杀菌作用,同时分析体外不同作用时间、剂量及因素对新型纳米银胶体溶液杀菌效果的影响。采用比色法检测细菌呼吸链脱氢酶活性,采用透射电镜观察其对MRSA菌体形态的影响。结果 0.05μg/mL新型纳米银胶体溶液对MRSA具有明显杀菌作用(抑菌率97.0%)。5μg/mL新型纳米银胶体溶液对MRSA作用5、15、30、60 min时均有明显杀菌作用(抑菌率均≥98.0%)。血清白蛋白对新型纳米银胶体溶液体外杀菌效果影响显著。新型纳米银胶体溶液能有效抑制MRSA呼吸链脱氢酶活性,对MRSA菌体形态破坏明显。结论新型纳米银胶体溶液体外对MRSA具有高效、多靶位抑制作用,可作为抗耐药菌治疗的新途径。