A型口蹄疫病毒VP0基因的克隆及原核表达

从实验室冻存的含A型口蹄疫病毒的细胞中提取FMDV总RNA,通过RT-PCR获得cDNA.并根据FMDV全基因组序列设计了一对针对VP0基因的引物,通过PCR扩增得到目的基因VP0并亚克隆入pMD18-T载体.将鉴定出的阳性质粒和表达载体pET32a用BamH Ⅰ和HindⅢ双酶切回收后连接获得阳性重组质粒pET32-VP0.用IPTG诱导重组质粒表达目的蛋白VP0并用SDS-PAGE进行检测.表达产物用镍亲和树脂进行了纯化.结果证明,口蹄疫病毒VP0蛋白在大肠杆菌中获得了高效表达且表达产物得到了纯化,为实验室进一步的研究提供了重要的材料.     

一株产天然蓝色素海洋链霉菌的筛选鉴定

从胶州湾附近海域水样中分离筛选到一株可产生天然蓝色素的链霉菌。采用通用引物16F27/16R1492扩增该菌株的16SrDNA,对测序结果进行序列分析,采用Neighbor-Joining(N-J)法构建系统发育进化树,同时结合链霉菌的传统形态学和生理生化特性对菌株进行鉴定。16SrDNA序列分析表明菌株与Streptomyces violaceolatus KCTC 9772相近,相似率为99%。在Neighbour-Joining法构建的系统发育进化树中,该菌株与Streptomyces violaceolatus聚类在同一分枝上。因此将该菌株鉴定为紫边链霉菌Streptomyces violaceolatus。     

美达霉素产生菌中立体专一性酮基还原酶基因med-ORF12的表达

美达霉素是链霉菌产生的具有强抗肿瘤活性的芳香聚酮类抗生素,其砒喃环并内酯结构对于其抗癌活性非常重要。位于美达霉素生物合成基因簇中的基因med-ORF12编码立体专一性酮基还原酶,可能参与美达霉素的砒喃环并内酯结构中手性中心(C3S)的形成,但在美达霉素产生菌中的功能和表达还未曾研究。【目的和方法】为了研究med-ORF12在野生菌中的表达情况以及与美达霉素生物合成的关系,本文采用了原核表达、抗体制备、免疫杂交等技术方法对这个基因展开了体内表达研究。【结果】首先利用pET载体建立了med-ORF12的原核表达系统,在优化诱导表达条件的基础上获得了可溶性目的蛋白,制备了相应的多抗血清;然后利用多抗血清对美达霉素产生菌中的基因med-ORF12的表达情况进行了检测,表明在美达霉素产生菌中参与次生代谢的med-ORF12在稳定期大量表达,同时伴随美达霉素的大量积累。【结论】这些结果表明在美达霉素产生菌中,基因med-ORF12参与次生代谢,其表达与美达霉素生物合成有一定相关性。     

在同源二聚体转录因子识别螺旋相对运动中发现平面摆动现象

目的:考察同源二聚体转录因子的2个识别螺旋在自由状态下和结合状态下相对运动的特征。方法:从蛋白质结构数据库(PDB)得到1R4I、3JXB、1KB2、1LE8等4个复合物结构文件,分别在自由状态和结合状态下用NAMD进行16 ns分子动力学模拟,将2个识别螺旋所成角分解为垂直偏移角和水平偏移角,并做散点图。结果:2个中心对称结合的同源二聚体转录因子在2种状态下,2个偏移角都相等;串联结合的同源二聚体在结合状态下2个偏移角相等。结论:同源二聚体转录因子识别螺旋相对运动存在平面摆动现象。     

胶体纳米银对产超广谱β-内酰胺酶肺炎克雷伯菌的抑制作用

目的探讨胶体纳米银对产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)肺炎克雷伯菌的抑制作用。方法以产ESBLs肺炎克雷伯菌为研究对象,采用涂布法检测杀菌作用,肉汤微量稀释法测量最低抑菌浓度(MIC),电镜法观察胶体纳米银对产ESBLs肺炎克雷伯菌的作用机理。结果≥0.5μg/mL的胶体纳米银对产ESBLs的肺炎克雷伯菌具有100%杀菌作用;≥0.05μg/mL的胶体纳米银对产ESBLs的肺炎克雷伯菌也具有明显的杀菌作用;5μg/mL胶体纳米银对产ESBLs肺炎克雷伯菌5、15、30和60 min均有明显的杀菌作用;胶体纳米银对产ESBLs肺炎克雷伯菌的MIC为3.125μg/mL;不同因素对胶体纳米银的杀菌作用,蛋白因素影响显著(P0.05);胶体纳米银对产ESBLs肺炎克雷伯菌的形态学有明显影响。结论胶体纳米银对产ESBLs肺炎克雷伯菌具有明显的抑制作用,这些结果将为胶体纳米银的临床应用提供了实验依据。     

Al_2O_3催化剂对海洋生物质热解特性的影响

以海洋生物质浒苔为研究对象,并以玉米秸秆(草类生物质)和锯末(木质类生物质)为对照,采用热重分析方法研究了3种生物质的热解特性,并比较了3种生物质之间的热解差异。结果表明,与玉米秸秆和锯末等典型陆生生物质相比,浒苔的热稳定性最低。此外,以不同浓度氧化铝作为催化剂,用热重分析法对其热解过程进行了研究,利用TG-DTG曲线分析了不同催化剂在不同浓度下对其基本热解特性的影响。结果表明,Al2O3对于3种生物质转化率和最大失重速率有显著的影响,其中Al2O3对锯末和浒苔的转化率降低程度比玉米秸秆较明显。考虑到Al2O3具有可调变的表面酸碱性以及多种不同的晶相结构等优点,Al2O3具有较大的的应用价值。     

不同CO2浓度变化下干旱对冬小麦叶面积指数的影响差异

叶面积指数是作物生长状况的一个重要表征参数,也是研究陆地生态系统的一个重要的参数.当今世界温室气体排放逐年上升,气候变暖趋势明显,对气候变化敏感的农业将受到影响.在全球变化的背景下,采用农业技术转移决策支持系统(DSSAT)系统,通过在黄淮海平原典型站点模拟3种CO2浓度条件下冬小麦在水分充足和水分亏缺2种情境下的生长过程,分析不同CO2浓度下水分亏缺对冬小麦叶面积指数的影响差异.研究发现,CO2浓度升高对叶面积指数增长有促进作用,且在干旱情况下对叶面积指数的正效应比湿润情况下更为明显,在CO2浓度倍增条件下,发生水分亏缺的作物叶面积指数数倍增长.研究结论有助于分析CO2浓度变化对农作物生长过程的影响,为农田水分管理提供依据,又为估算叶面积指数提出了一种模型的方法.     

翻译后修饰蛋白质组学助力实现精准医疗

与基因组学相比,蛋白质组学能够即时反映病人在疾病状态与正常状态下的蛋白表达和修饰谱,从而进行精准诊断和治疗,因此在临床领域越来越具有应用前景。蛋白质组学早期聚焦于细胞不同发育时期或疾病状态下的蛋白质表达水平变化,然而,许多至关重要的生命进程不仅与蛋白质相对丰度有关,更重要的是被时空特异分布的、可逆的翻译后修饰调控。在蛋白质组学、抗体亲和色谱与质谱分析、生物信息学等跨学科知识基础上发展的PTMScan?技术,在定性、定量分析翻译后修饰蛋白质位点方面具有显著优势。介绍了PTMScan?翻译后修饰蛋白质组学技术,其能够快速、准确、高通量地分析肺癌、黑色素瘤等多种疾病中信号通路关键节点蛋白质磷酸化、乙酰化、甲基化、泛素化和类泛素化等修饰的变化,满足精准医疗与伴随诊断对于疾病生物标志物鉴定、药物靶点筛选、靶向用药指导、疾病预后指示的需求,真正实现精准医疗,将正确的药物在最恰当的时间治疗真正需要的患者。     

群感效应与链霉菌次生代谢调控

群感效应是细菌协调群体行为的一种外界信号传递机制,在细菌中普遍存在,参与细胞的多种生理过程。链霉菌中也存在群感效应,在抗生素等次生代谢产物的生物合成中起重要的调控作用;从自诱导信号分子的结构到信号传递机制都存在一定多样性,其中以A-因子为代表的γ-丁酸内酯类信号分子的作用机制研究最为深入。近几年在链霉菌中发现的PI-因子、M-因子以及一些特定的代谢产物则代表几类结构较新颖的信号分子,通过群感效应机制调控次生代谢过程;链霉菌中还发现胆固醇氧化酶、甘油等分子具有信号分子特征,不排除是通过群感效应来参与抗生素生物合成调控。本文主要就参与链霉菌次生代谢调控的几类群感效应系统的研究状况进行综述,重点阐述各类群感信号分子的结构和信号传递机制的不同,并对链霉菌群感效应的研究趋势以及在抗生素高产菌遗传育种中的应用前景进行了展望。     

胶体纳米银对白假丝酵母菌的抑制作用

目的 探讨胶体纳米银对白假丝酵母菌的抑制作用。方法 以白假丝酵母菌为研究对象,采用倍比稀释及涂布法,检测胶体纳米银对白假丝酵母菌的抑制作用及影响因素。结果 化学纳米银及物理纳米银对白假丝酵母菌的最小抑菌浓度及最小杀菌浓度相同,分别为3.13 μg/mL和6.25 μg/mL。12.50 μg/mL的化学纳米银及物理纳米银可在5 min内完全杀死白假丝酵母菌。胶体纳米银的抑菌作用受到杀菌环境的影响,特别氯离子对胶体纳米银的杀菌作用有明显的影响。结论 胶体纳米银对白假丝酵母菌具有明显的抑菌作用,其抑制作用易受到氯离子及蛋白质的的影响。