IL-1β和Glu联合应用对体外培养的新生大鼠大脑皮质星形胶质细胞周期的影响

目的研究IL-1β(interleukin-1 beta) 单独应用及与谷氨酸(Gluamate,Glu)联合应用对体外纯化培养的大鼠大脑皮质星形胶质细胞细胞周期的影响.方法将纯化培养的星形胶质细胞血清剥夺培养24 h后,(1)加入不同浓度(0、10、100、1000 U/ml)的IL-1β;(2)加入浓度100U/ml的IL-1β分别作用24、48、72 h;(3)加入浓度100U/ml IL-1β 1mmol/L Glu分别作用24、48、72 h; 采用流式细胞术观察星形胶质细胞周期的变化.结果 (1)不同浓度的IL-1β可使星形胶质细胞S和G2/M期的细胞指数较对照组增高,在一定范围内随着IL-1β浓度的增加,星形胶质细胞的增殖更明显,同一浓度的IL-1β其作用随着时间的延长而逐渐衰减,(2)IL-1β与Glu联合应用较IL-1β单独应用星形胶质细胞的增殖更明显.结论 IL-1β激活星形胶质细胞,并启动细胞周期进程,促使星形胶质细胞增殖;IL-1β与Glu在诱导星形胶质细胞增殖时有一定的协同作用.     

马桑内酯激活的星形胶质细胞条件培养液对大鼠脑内钙调蛋白激酶Ⅱ表达的影响

目的揭示马桑内酯(coriaria lactone,CL)激活的星形胶质细胞条件培养液(astrocyte contined medium,ACM)对大鼠脑内钙调蛋白激酶Ⅱ(calcium/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)表达的影响。方法按照McCarthy和DeVellis的方法作海马星形胶质细胞的纯化培养,然后收集对照组ACM和CL激活的ACM。取成年健康雄性SD大鼠40只,随机分为对照组(8只)和CL组(32只),对照组侧脑室注射未加任何刺激物的ACM 10μl,CL组侧脑室注射CL激活的ACM 10μl(按注射后的时间分为2h、4h、8h和12h,每个时间点8只)。观察两组大鼠的行为表现,用免疫组化检测脑内CaMKⅡ表达的变化,Western blot检测脑内CaMKⅡ含量的变化。结果CL组大鼠有痫样发作,而对照组无痫样发作;免疫组化检测结果显示,CaMKⅡ在CL组的皮质和海马表达与对照组比较无显著性差异(P>0.05);Western blot检测皮质和海马CaMKⅡ亚基含量的结果显示,α和β亚基在CL各时间组与对照组的比较,表达均无显著性差异(P>0.05)。结论CL激活的ACM对致痫大鼠脑内CaMKⅡ亚基α和β的表达水平无明显影响。     

普罗布考对高同型半胱氨酸血症兔主动脉粥样硬化及5-脂氧酶表达的影响

目的观察普罗布考对高同型半胱氨酸(Hcy)血症兔主动脉粥样硬化(AS)及5-脂氧酶(5-LOX)表达的影响。方法将24只雄性新西兰大耳白兔分成3组:对照组给予基础饲料喂养;模型组在基础饲料中加入1%的蛋氨酸;治疗组给予高蛋氨酸饮食,同时用普罗布考灌胃(1g/d);每组8只,饮食量200g/d。第20周末处死动物,快速打开腹腔剥离腹主动脉。用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)和Western印迹法(Western-blotting)技术检测动脉血管中5-LOX的mRNA及蛋白表达,光镜下观察主动脉病理形态学变化。结果主动脉病理形态学检查显示治疗组病变明显轻于模型组;治疗组主动脉5-LOX的mRNA及蛋白表达水平明显低于模型组。结论普罗布考能抑制主动脉5-LOX的mRNA及蛋白表达,减轻内膜增生程度,该作用可能是普罗布考抗AS的机制之一。     

与咬肌运动神经元直接联系的运动前神经元在脑干的分布

目的为了定位向咬肌运动神经元投射的最后一级运动前神经元在脑干内的分布。方法注射麦芽凝集素结合的辣根过氧化物酶(WGA-HRP)至咬肌神经逆行跨突触追踪,然后通过免疫组织化学方法显示了该类神经元。结果这类神经元分布在双侧三叉上核(Vsup)、三叉神经感觉主核背侧部(Vpdm)、小细胞网状结构(PCR)和三叉神经脊束核吻侧亚核背侧部(Vodm),以及对侧三叉神经运动核(Vmo)。数量上,Vsup,特别是注射侧Vsup中,标记的神经元数量最多;其他核团内,双侧标记的神经元的数量无明显差别。结论一侧咬肌运动神经元直接接受脑干双侧多个区域调控。     

谷氨酸下调培养海马神经元AMPA 受体GluR2亚单位的表达

目的研究在癫痫发病过程中,谷氨酸对AMPA受体Glu R2亚单位表达变化的影响。方法用RT-PCR和Western Blot方法观察谷氨酸诱导培养大鼠海马神经元AMPA受体Glu R2亚单位mRNA和蛋白的表达变化。结果在谷氨酸刺激后2h,8h,12h,培养海马神经元Glu R2mRNA和蛋白表达明显下降,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05),而非NMDA受体拮抗剂CNQX能阻断此变化。结论在癫痫等疾病中,谷氨酸能通过激活AMAP/KA受体下调AMPA受体GluR2亚单位的表达,参与发病过程。     

代谢型谷氨酸受体5与白细胞介素1受体Ⅰ型在大鼠大脑皮质及海马神经元的共存

目的 研究代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)和白细胞介素1受体I型(IL-1RI)在大鼠大脑皮质和海马的分布及共存状况。方法 采用相邻切片的免疫细胞化学双标法,在两张相邻脑冠状切片上分别显示mGluR5与IL-1RI的免疫组化染色结果,通过显微摄像确定mGluR5／IL-1RI双标神经元。结果 切片上mGluR5阳性产物为蓝黑色,定位于细胞膜上;IL-1RI阳性产物为棕黄色,主要定位于细胞膜,也存在于神经元内。在大鼠大脑皮质及海马锥体细胞层均存在较丰富的mGluR5及IL-1RI阳性神经元。在大脑皮质,有部分神经元内mGluR5与IL-1RI共存;在海马锥体细胞层,mGluR5及n1RI阳性反应细胞密集,分布区重叠,很可能也存在二共存的神经元。结论 大鼠大脑皮质内存在mGluR5及IL-1RI共存神经元。本研究的结果为免疫神经调质在神经元内相互作用提供了形态学依据。     

IL-1β对L-谷氨酸致痫大鼠大脑皮质和海马腺苷酸环化酶表达的影响

目的探讨白细胞介素IL-1β促痫作用的机制及IL-1β对谷氨酸致痫大鼠大脑皮质和海马内腺苷酸环化酶表达的影响.方法将实验SD大鼠随机分为生理盐水对照组;L-Glutamate致痫组;IL-1β+L-Glutamate组;IL-1ra+ IL-1β+L-Glutamate组;和MCCG(2-methyl-2-(carboxycyclopropyl)glycine) +IL-1β+L-Glutamate组,每组8只.采用行为学观察方法和免疫组织化学方法及Western blot方法进行研究.结果 IL-1β+L-Glutamate组大鼠癫痫发作的行为表现以及大脑皮质、海马内腺苷酸环化酶(AC)表达与单纯用L-谷氨酸钠致痫大鼠组比较没有明显区别(P>0.05),但与对照组比较AC表达增强(P<0.05);如果预先给予IL-ra,再给予IL-1β和阈下剂量的L-谷氨酸钠,癫痫发作不出现,脑内AC表达较对照组未见明显增强(P>0.05);但如果预先给予MCCG,脑内AC表达与对照组相比增高,癫痫发作的潜伏期最短,强度最大,与对照组比有显著性差异(P<0.05).结论本实验表明IL-1β有促痫作用,这种促痫效应的发挥可能与IL-1R介导的与谷氨酸受体的协同作用有关,并与AC表达增加有关.     

马桑内酯慢性致痫大鼠海马星形胶质细胞的激活

目的：研究慢性癫痛大鼠点时海马星形胶细胞的激活情况。方法：采用马桑内酯慢性癫痫大鼠模型,观察大鼠点燃后海马NF－kBp65和胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）免疫细胞化学反应（immunoreactivity,IR)的变化。结果：点燃后1h,海马CA1区GFAR－IR开始增强,4－8h可观察到GFAP－IR阳性细胞数量增多并明显浓染。这种强GFAP－IR持续至点燃点24h点燃后1h,NF－kBp65即可在海马CA1区神经元和胶质细胞内表达,主要位于胞核内,至8h阳性神经元细胞核基本消失而可见大量NF－kBp65－IR阳性的胶质细胞,双重免疫细胞化学方法显示GFAP／NF－kBp65－IR阳性细胞在点燃后1h即可观察到,4h表达最高峰,24h恢复对照组水平。结论：马桑内酯慢性致痫大鼠点燃时星形胶质细胞表现一种早期而持续的激活,提示反复激活的星形胶质细胞对癫痫的复发可能起重要的作用。     

戊四氮致痫大鼠皮质和海马内GFAP、cyclinD1及脑和脑脊液17β-雌二醇和孕酮浓度变化

目的研究癫痫发作后脑和脑脊液中17β-雌二醇和孕酮含量的变化.方法将雌性SD大鼠随机分为戊四氮(PTZ)致痫组和生理盐水对照组.(1)用免疫组织化学方法观察大鼠大脑皮质和海马星形胶质细胞胶质原纤维酸性蛋白(GFAP)含量的变化;(2)用Western blot方法检测大鼠大脑皮质和海马细胞周期素D1(cyclin D1)表达的变化;(3)采用放免法测定大鼠大脑皮质和海马组织匀浆及脑脊液中17β-雌二醇和孕酮含量的变化.结果免疫组织化学染色结果显示癫痫发作4h后在海马CA3区、CA1区和皮质内GFAP免疫反应明显增强(P<0.05);Western blot结果显示癫痫发作2h后cyclin D1的表达在皮质和海马均较对照组明显增强(P<0.05);放射免疫分析结果显示,癫痫发作后,皮质、海马和脑脊液的17β-雌二醇的浓度有不同程度增高,致痫8h后恢复正常,孕酮的浓度在皮质和脑脊液则呈下降趋势.结论戊四氮致痫时皮质及海马内星形胶质细胞激活、增殖,内源性雌激素合成增多,同时孕酮浓度降低,说明雌性激素在癫痫的形成和维持中发挥作用.     

IL-1β的促痫作用与GαmRNA表达的关系

目的为了探讨IL-1β的促痫作用机制.方法实验应用RT-PCR方法检测了谷氨酸钠致癫痫动物在同时脑内注射IL-1β、IL-1ra(IL-1R拮抗剂)或MCPG(mGluR5拮抗剂)后,海马组织Gαs、GαqmRNA的表达变化.结果 (1)谷氨酸钠诱导的癫痫发作使海马组织Gαs mRNA,Gαq mRNA表达上升.而IL-1β显著促进谷氨酸钠的作用,与单纯注射谷氨酸钠相比Gαs mRNA,Gαq mRNA表达上升更为显著(P＜0.05);(2)IL-1ra与MCPG均能阻断IL-1β的此种作用;(3)mGluR5 mRNA的表达未受影响.结论 IL-1β在癫痫中的作用是使Gαs,Gαq 激活,且表达上升,然后可能再通过cAMP等第二信使与其它受体或离子通道的相互作用起到促痫作用.mGluR5和 IL-1RⅠ在癫痫发作过程中可能存在协同作用,或者通过间接的"对话"共同促进Gαs和Gαq mRNA的表达,导致癫痫发作增强.