大鼠海马触液神经元的分布特征及其纤维联系

本文应用ＨＲＰ追踪与电镜结合的方法研究了大白鼠海马接触脑脊液神经元的分布特征和皮质内联系。光镜观察在海马的多形细胞层和锥体细胞层等处可见散在的神经元被标记,而在室管膜层标记的细胞较多,它们分布于交织成网的阳性纤维中。透射电镜可见海马室管膜层的ＨＲＰ反应阳性的神经细胞、树突末稍及神经胶质细胞。在海马室管膜上也见到了被标记的神经纤维。同时在海马室管膜层内还发现未标记的阴性轴突与被ＨＲＰ标记的阳性树突构成的轴－树突触。上述结果提示海马为接触脑脊液神经元存在的部位之一,其接触脑脊液神经元并受到其它神经元的突触调控     

硬脊膜外腔注射辣椒素对大鼠一级传入C纤维的影响——组织化学与电镜观察

本文应用组织化学与电镜方法,观察了硬脊膜外腔注射辣椒素(CAP)对成年大鼠一级传入C纤维的影响。经CAP处理后第7天,大鼠脊髓后角Ⅰ～Ⅲ层内P物质(SP)免疫反应性明显减弱,抗氟化钠酸性磷酸酶(FRAP)活性消失或明显减弱,但亮氨酸脑啡肽(LEK)、神经降压素(NT)及5-羟色胺(5-HT)免疫反应性无明显变化。电镜观察发现,CAP处理后脊神经后根内部分无髓神经纤维被破坏,但有髓神经纤维无变化。在给药后48小时的脊髓胶状质(SG)内即可出现变性(DEG)终末,在第5、7、和10天,DEG终末增多,DEG程度加重。部分DEG终末属于Ⅰ型突触球的中央终末,但Ⅱ型突触球的中央终末无DEG征象。以上结果表明,成年大鼠硬脊膜外腔注射CAP亦可有效而特异地损毁一级传入C纤维。此动物模型的建立为选择性地研究C纤维与SG内其它结构之间的超微联系奠定了基础,并在进一步研究C纤维的功能方面具有一定的实用价值。     

普罗布考对高同型半胱氨酸血症兔主动脉粥样硬化及5-脂氧酶表达的影响

目的观察普罗布考对高同型半胱氨酸(Hcy)血症兔主动脉粥样硬化(AS)及5-脂氧酶(5-LOX)表达的影响。方法将24只雄性新西兰大耳白兔分成3组:对照组给予基础饲料喂养;模型组在基础饲料中加入1%的蛋氨酸;治疗组给予高蛋氨酸饮食,同时用普罗布考灌胃(1g/d);每组8只,饮食量200g/d。第20周末处死动物,快速打开腹腔剥离腹主动脉。用逆转录聚合酶链法(RT-PCR)和Western印迹法(Western-blotting)技术检测动脉血管中5-LOX的mRNA及蛋白表达,光镜下观察主动脉病理形态学变化。结果主动脉病理形态学检查显示治疗组病变明显轻于模型组;治疗组主动脉5-LOX的mRNA及蛋白表达水平明显低于模型组。结论普罗布考能抑制主动脉5-LOX的mRNA及蛋白表达,减轻内膜增生程度,该作用可能是普罗布考抗AS的机制之一。     

地塞米松对大白鼠海马兴奋性神经元和抑制性神经元的影响

为了探讨糖皮质激素对海马兴奋性神经元和抑制性神经元的作用,本实验将地塞米松注入大白鼠侧脑室,２ｈ 后经Ｎｉｓｓｌ染色法、免疫组织化学方法和细胞计数法观察了海马谷氨酸免疫反应性（ＧｌｕＩＲ）神经元和γ氨基丁酸免疫反应性（ＧＡＢＡＩＲ）神经元的变化。结果显示：（１）ＣＡ１、ＣＡ３ 和ＳＧ区的ＧｌｕＩＲ神经元明显增多,特别是ＣＡ１ 区。经细胞计数统计分析表明,与对照组相比ＣＡ１ 有极显著性差异（Ｐ＜ ０００１）,ＣＡ３区有显著性差异（００１＜ Ｐ＜ ００５）,ＳＧ处无明显差异（Ｐ＞ ００５）。（２）与对照组相比,ＧＡＢＡＩＲ神经元无明显变化。结果表明,糖皮质激素有增加海马谷氨酸能神经元的作用。尽管γ氨基丁酸能神经元无明显变化,并不表明糖皮质激素对其无影响     

白细胞介素-2对大鼠海马谷氨酸能神经元和γ-氨基丁酸能神经元的影响———免疫组织化学和狭线杂交研究

本研究应用免疫组织化学（ＰＡＰ法）的方法,观察到侧脑室内注射白细胞介素２（ＩＬ２）后,大鼠海马回和齿状回内谷氨酸（Ｇｌｕ）免疫反应阳性神经元的数量明显减少、胞体皱缩、突起及其分支减少;γ氨基丁酸（ＧＡＢＡ）免疫反应阳性神经元的数量、突起及其分支皆减少。用３２Ｐ标记的ＧＡＢＡＴｃＤＮＡ探针对大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ进行狭线杂交结果显示：实验组大鼠海马组织的ＧＡＢＡＴｍＲＮＡ的含量明显增多。由于ＧＡＢＡ在ＧＡＢＡＴ的作用下,可转变为Ｇｌｕ,因此,以上结果表明ＩＬ２不仅可影响海马神经元合成和释放Ｇｌｕ和ＧＡＢＡ,而且还使Ｇｌｕ的释放量大于其合成量。这些变化可能与癫痫的发病机理有关     

谷氨酸下调培养海马神经元AMPA 受体GluR2亚单位的表达

目的研究在癫痫发病过程中,谷氨酸对AMPA受体Glu R2亚单位表达变化的影响。方法用RT-PCR和Western Blot方法观察谷氨酸诱导培养大鼠海马神经元AMPA受体Glu R2亚单位mRNA和蛋白的表达变化。结果在谷氨酸刺激后2h,8h,12h,培养海马神经元Glu R2mRNA和蛋白表达明显下降,与对照组相比,差异有显著性(P<0.05),而非NMDA受体拮抗剂CNQX能阻断此变化。结论在癫痫等疾病中,谷氨酸能通过激活AMAP/KA受体下调AMPA受体GluR2亚单位的表达,参与发病过程。     

IL-1β对L-谷氨酸致痫大鼠大脑皮质和海马腺苷酸环化酶表达的影响

目的探讨白细胞介素IL-1β促痫作用的机制及IL-1β对谷氨酸致痫大鼠大脑皮质和海马内腺苷酸环化酶表达的影响.方法将实验SD大鼠随机分为生理盐水对照组;L-Glutamate致痫组;IL-1β+L-Glutamate组;IL-1ra+ IL-1β+L-Glutamate组;和MCCG(2-methyl-2-(carboxycyclopropyl)glycine) +IL-1β+L-Glutamate组,每组8只.采用行为学观察方法和免疫组织化学方法及Western blot方法进行研究.结果 IL-1β+L-Glutamate组大鼠癫痫发作的行为表现以及大脑皮质、海马内腺苷酸环化酶(AC)表达与单纯用L-谷氨酸钠致痫大鼠组比较没有明显区别(P>0.05),但与对照组比较AC表达增强(P<0.05);如果预先给予IL-ra,再给予IL-1β和阈下剂量的L-谷氨酸钠,癫痫发作不出现,脑内AC表达较对照组未见明显增强(P>0.05);但如果预先给予MCCG,脑内AC表达与对照组相比增高,癫痫发作的潜伏期最短,强度最大,与对照组比有显著性差异(P<0.05).结论本实验表明IL-1β有促痫作用,这种促痫效应的发挥可能与IL-1R介导的与谷氨酸受体的协同作用有关,并与AC表达增加有关.     

代谢型谷氨酸受体5与白细胞介素1受体Ⅰ型在大鼠大脑皮质及海马神经元的共存

目的 研究代谢型谷氨酸受体5(mGluR5)和白细胞介素1受体I型(IL-1RI)在大鼠大脑皮质和海马的分布及共存状况。方法 采用相邻切片的免疫细胞化学双标法,在两张相邻脑冠状切片上分别显示mGluR5与IL-1RI的免疫组化染色结果,通过显微摄像确定mGluR5／IL-1RI双标神经元。结果 切片上mGluR5阳性产物为蓝黑色,定位于细胞膜上;IL-1RI阳性产物为棕黄色,主要定位于细胞膜,也存在于神经元内。在大鼠大脑皮质及海马锥体细胞层均存在较丰富的mGluR5及IL-1RI阳性神经元。在大脑皮质,有部分神经元内mGluR5与IL-1RI共存;在海马锥体细胞层,mGluR5及n1RI阳性反应细胞密集,分布区重叠,很可能也存在二共存的神经元。结论 大鼠大脑皮质内存在mGluR5及IL-1RI共存神经元。本研究的结果为免疫神经调质在神经元内相互作用提供了形态学依据。     

马桑内酯慢性致痫大鼠海马星形胶质细胞的激活

目的：研究慢性癫痛大鼠点时海马星形胶细胞的激活情况。方法：采用马桑内酯慢性癫痫大鼠模型,观察大鼠点燃后海马NF－kBp65和胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein, GFAP）免疫细胞化学反应（immunoreactivity,IR)的变化。结果：点燃后1h,海马CA1区GFAR－IR开始增强,4－8h可观察到GFAP－IR阳性细胞数量增多并明显浓染。这种强GFAP－IR持续至点燃点24h点燃后1h,NF－kBp65即可在海马CA1区神经元和胶质细胞内表达,主要位于胞核内,至8h阳性神经元细胞核基本消失而可见大量NF－kBp65－IR阳性的胶质细胞,双重免疫细胞化学方法显示GFAP／NF－kBp65－IR阳性细胞在点燃后1h即可观察到,4h表达最高峰,24h恢复对照组水平。结论：马桑内酯慢性致痫大鼠点燃时星形胶质细胞表现一种早期而持续的激活,提示反复激活的星形胶质细胞对癫痫的复发可能起重要的作用。     

马桑内酯对在体和离体小胶质细胞 CD11b/c表达的影响

目的研究致痫剂马桑内酯(CL)对在体和离体小胶质细胞CD11b/c表达的影响。方法①正常SD大鼠行马桑内酯侧脑室注射,观察大鼠的行为改变;利用免疫荧光染色的方法观察大鼠大脑皮质、海马内CD11b/c表达的变化。②纯化培养的小胶质细胞无血清培养,给予马桑内酯(5×10-5mol/L)刺激,利用免疫荧光染色结合流式细胞仪检测CD11b/c的表达。结果①马桑内酯侧脑室注射30min后均出现强烈的癫痫样发作,持续约4h;②马桑内酯侧脑室注射后大脑皮质及海马各区CD11b/c阳性细胞表达均出现明显增强,4-6h为表达高峰,至24h大脑皮质恢复至正常水平,但海马各区仍保持较高水平。③纯化培养的小胶质细胞在马桑内酯作用1h出现CD11b/c表达增强,2h达到高峰,至24h恢复正常。结论马桑内酯对小胶质细胞具有直接的活化作用;小胶质细胞的活化参与了马桑内酯的致痫过程。