siRNA抑制哺乳动物细胞内Rab9 GTPase表达的研究

构建Rab9 GTPase siRNA表达载体,观察siRNA对哺乳动物细胞内Rab9 GTPase表达的抑制作用,为应用Rab9 GTPase siRNA表达载体进行抗麻疹病毒感染研究奠定基础。根据Rab9 GTPase基因的mRNA序列设计合成2对靶向Rab9 GTPase基因的寡核苷酸,克隆到表达载体pSUPER.neo EGFP,通过双酶切和序列分析对重组表达载体进行鉴定。将鉴定为阳性的重组表达载体转染B95a细胞株,通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹技术(Western-blot)检测B95a细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白的表达水平。双酶切和序列分析表明成功构建了Rab9 GTPase siRNA表达载体,RT-PCR和Western-blot技术实验表明重组表达载体可显著抑制B95a细胞内Rab9 GTPase mRNA和蛋白的表达(最高抑制率分别为89.4%±0.5%和87.6%±0.7%),而对照组则没有变化。结果表明,成功构建了Rab9 GTPase siRNA表达载体,该表达载体可有效地抑制Rab9 GTPase在哺乳动物细胞内的表达。     

若尔盖湿地国家自然保护区三种无尾两栖类夏秋季生境选择

2004年8—9月在若尔盖湿地国家自然保护区采用样方法对高原林蛙(Ranakukunoris)、倭蛙(Nanoranapleskei)和岷山蟾蜍(Bufominshanicus)的生境选择性进行了研究。先设置16个50m×50m的样地,再在每个样地内分25个10m×10m的样方,测量每个样方中的12个生境因子(牧场性质、草本高度、草本盖度、牛粪数量、鼠兔洞口数量、鼢鼠土堆数量、地表温度、地表湿度、土壤温度、离小型水体距离、离大型水体距离、离道路距离)。结果表明:这3种两栖类均偏好离溪流、水塘等小型水体距离较近(≤100m)、离河流、湖泊等大型水体距离较远(>1000m)、适度放牧(牛粪数量1~20)以及无鼠兔(Ochotonasp·)洞口的生境。通过比较,发现高原林蛙和倭蛙显著选择夏牧场、草本高度5·1~10·0cm、离小型水体0~50m的生境,显著不选择鼢鼠土堆太多(>10)的生境;岷山蟾蜍对牧场性质、离道路距离无显著选择性,显著选择草本高度>20·0cm、离小型水体51~100m的生境,不选择无鼢鼠土堆的生境;高原林蛙显著选择离道路>50m的生境;倭蛙显著选择离道路0~50m的生境。3种两栖类在生境选择上产生了一定的分离,表明各自有着特殊的生境需求。判别分析表明,牧场性质、草本高度、地表湿度、土壤温度、鼢鼠土堆数量、离大或小型水体距离、离道路距离是区别3种两栖类生境选择的重要参数。     

具有Holling Ⅳ类功能反应的三维顺环捕食者-食饵模型

考虑具有Holling Ⅳ类功能反应三维顺环捕食者一食饵系统,利用常微分方程比较定理及Liapunov函数方法,得到了该系统持久性的充分条件,并且对于周期系统在一定条件下。系统存在唯一一个全局渐进稳定的周期正解,最后讨论了概周期解现象,得出了概周期正解的唯一存在性和全局渐进稳定性的充分条件。     

营养组合物对再障大鼠干细胞增殖的影响

目的：观察营养组合物对再生障碍性贫血大鼠干细胞增殖的影响,探讨其治疗再障的可能机制。 方法：SD大鼠100只,随机分为正常对照组、再障模型组（AA）及不同剂量的营养组合物组。构建再障模型的同时,第5天开始,分别对大鼠给予高剂量营养组合物2 26695 mg/（kg·d）、中剂量高剂量营养组合物1 5113 mg/（kg·d）、低剂量高剂量营养组合物1 05791 mg/（kg·d）,每天灌胃,直至实验结束（60d）,采用颈椎脱臼法处死大鼠,采用免疫组化法检测再障大鼠的肝、肾、胃、肠、脑干细胞标志物的表达情况。 结果：大鼠肝脏、肾脏及胃的干细胞标志物的含量增加,且随着营养组合物剂量增加而增加;营养组合物处理再障大鼠后,大鼠肠粘膜、神经干细胞的标志物表达量在各组中无显著变化。 结论：营养组合物对再障大鼠肝脏、肾脏及胃的干细胞增殖具有一定的促进作用;而对再障大鼠肠粘膜、神经的干细胞增殖无显著影响。营养组合物一定程度上可以促进再障大鼠的干细胞增殖,此可能为其治疗再生障碍性贫血的作用机制之一。     

三种群竞争系统的持久性

本文研究了三种群非自治周期Lotka-Volterra竞争系统的持久性,得到了正周期解的存在性和平衡振荡的条件。     

医学微生物学实验课的改革与学生创新能力的培养

在深化高等医学教育、教学改革过程中,培养学生的综合素质以及创新精神、创新能力是一个带有根本性的指导思想。面对２１世纪高等医学教育要培养大批高素质的医学卫生人才的历史任务,在基础医学教学改革中,如何重新整合实验课的教学内容,改革实验课的教学方法,培养学生的创新精神和实践能力,是需要加以认真研究的主要问题。几年来,我们在医学微生物学实验课教学改革过程中,进行了积极地尝试和探索,取得了很好的教学效果。１更新教学内容,扩展对新知识、新技术的吸纳与传授 一般来说,创新活动是以“求新”为起点的。随着新科技革…     

人源抗汉坦病毒核衣壳蛋白T7噬菌体抗体库的构建

构建人源T7噬菌体单链抗体(scFv)库筛选抗汉坦病毒核衣壳蛋白(NP)抗体。从肾综合征出血热恢复期患者外周血淋巴细胞中提取总RNA,反转录合成cDNA第一条链,PCR分别扩增抗体重链可变区基因(VH)和轻链可变区基因(VL),经重叠延伸拼接(SOE)PCR组成scFv基因,并将其与T7噬菌体载体的2个臂相连接。体外包装后,在宿主菌BLT5403中,扩增重组噬菌体抗体库。以基因工程表达NP进行4轮“吸附-洗脱-扩增”的筛选,酶免疫实验检测抗体活性。所建抗体库库容为1.35×107,扩增后初级库滴度为2.12×1010pfu/mL。以NP抗原筛选后抗体出现特异性富集,经酶免疫实验鉴定,得到2株与NP抗原特异结合的噬菌体抗体。结果表明,研究成功构建了人源抗NP蛋白T7噬菌体抗体库。     

应用绿色荧光蛋白研究外源基因在造血细胞的表达调控

以增强型绿色荧光蛋白为报道分子,研究双基因逆转录病毒载体介导小鼠骨髓细胞的基因转移中,SV(simianvirus)40启动子和内部核糖体进入位点(internalribosomeentrysite,IRES)对双基因共表达的影响。构建双基因中间序列分别为SV40启动子和IRES的载体pLESN和pLEIN。经包装获得较高滴度的病毒上清,以共培养的方式感染5-氟尿嘧啶预刺激的小鼠骨髓细胞。流式细胞仪检测表明转染效率约25%,PCR证明EGFP基因整合至骨髓细胞基因组。半固体培养转基因细胞7d,LEIN组获得具有G418抗性的集落中98%表达绿色荧光,而LESN组54%。结果表明:在双基因逆转录病毒载体介导的小鼠骨髓细胞的基因转导中,IRES与内部SV40启动子相比,更能保证双基因的共同表达。     

具有阈值策略的非光滑阶段结构害虫增长模型的分析(英文)

为了控制害虫数量不超过一个确定的水平,引入具有阈值控制策略的非光滑的阶段结构的害虫增长模型,称之为Filippov系统.本文主要介绍和讨论了以成年种群数量作为指标的阈值控制策略.在此种情况下,分析了Filippov系统的滑动区域,滑线动力学以及真,假平衡态和伪平衡态的存在性.文章通过理论和数值方法讨论和证明了上述平衡态的稳定性.引入了具有生物应用意义的害虫控制,而得到的结论证明成年种群的数量通过阈值策略控制能够成功的稳定在经济阈值之下.     

人脐带间充质干细胞对百草枯中毒肺损伤小鼠模型的治疗作用

目的:探讨脐带间充质干细胞(UCMSC)治疗百草枯中毒引起的小鼠肺损伤的可行性。方法:小鼠腹腔一次性注射百草枯制备百草枯中毒小鼠模型,24 h后尾静脉注射UCMSC,分别于治疗后7和21 d取材,观察UCMSC对急性肺损伤和慢性肺纤维化的治疗作用。结果:UCMSC移植对40和50 mg/kg百草枯染毒组急性肺损伤有效,动物死亡率显著降低,但对60 mg/kg百草枯染毒组动物无效。UCMSC治疗对慢性肺纤维化有显著治疗作用,治疗组动物体重恢复早,死亡率降低,肺纤维化评分降低。RT-PCR结果显示,UCMSC移植3 h有人特异性线粒体基因的表达,但24 h后未检测到。结论:UCMSC对百草枯中毒性急慢性肺损伤有一定的治疗作用,这种作用可能是通过旁分泌机制实现的。