排序方式: 共有48条查询结果,搜索用时 828 毫秒
11.
12.
一种新型疟疾核酸疫苗生产工艺的初步研究 总被引:2,自引:1,他引:1
疟疾是危害人类健康和生命的主要寄生虫病之一,寻找合适的疫苗一直是该病控制的重要方向。在疟疾核酸疫苗方面作了系列尝试,取得较好研究结果,并最终构建了以胸腺嘧啶合成酶基因为筛选标记的、具有大肠杆菌平衡致死特征的新一代疟疾核酸疫苗pThyAAWTE。对影响工程菌高密度发酵的几个因素进行了分析,所优化程序可使工程菌发酵密度达OD60060以上;此外,还对质粒初步纯化过程中的几个重要参数进行了分析,初步结果表明,悬浮液体积(ml):菌体湿重(g)在2:1以上,对质粒的得率没有明显影响;碱裂解时间在一定范围内不影响质粒的质量;合适的悬浮液体积/裂解液/中和液比能明显提高质粒产量;用优化程序所提取的质粒其产量与试剂盒提取的量相当。为pThyAAWTE的大规模纯化打下了基础。 相似文献
13.
14.
O139霍乱弧菌质粒基因组文库的建立及O—抗原基因的筛选 总被引:1,自引:0,他引:1
合成O-抗原的基因是串联在一起的一个基因族,提取O139霍乱弧菌基因组DNA,限制性内切酶EcoR2Ⅰ酶切,电泳回收4-20kb的DNA片段,构建质粒基因组文库。随机筛选重组克隆,获得一株可与O139霍乱弧菌抗菌清发生凝集反应的重组克隆,命名为大肠杆菌DH5α(pMG320)。经鉴定分析重组克隆所表达的O-抗原具有良好的免疫性及反应原性。酶切分析质粒pMG320,推知其O-抗原基因大 4.6kb.这为今后O139霍乱疫苗的研制及O139霍乱弧菌O-抗原基因的结构和功能研究提供了条件。 相似文献
15.
纯化重组霍乱毒素B亚单位与天然霍乱毒素B亚单位性质的对比研究 总被引:1,自引:0,他引:1
霍乱毒素B亚单位(BS)已用于新型口服霍乱疫苗、佐剂及蛋白质载体,但成本高,来源困难.用重组霍乱毒素B亚单位(rBS)代替BS可克服上述缺点.rBS用于上述目的前必须证实其在物理、化学及免疫学性质方面与天然同类产品的一致性.用亲和层析法从各批次大罐发酵所获工程菌E.coliMM2(pMM-CTB)培养物上清中制备得到了小批量rBS纯品,在同等条件下与BS(Sig-ma公司产品)进行理化、免疫学性质的对比研究,证实二者在SDS-PAGE中电泳带位置一致、分子量相同,纯度达99%;在反相HPLC中出峰行为一致,纯度达100%;在半干式聚焦电泳分析中电泳带分布相同,等电点为7.91.rBSN端起的20个氨基酸序列为TPQNITDLCAEYHNTQIHTL,与克隆基因来源株的毒素B亚单位同一段序列完全一致.氨基酸组成分析证实rBS与BS相近.在免疫学性质分析中,rBS与BS在免疫双扩散试验中与抗CT均出一条沉淀线且相互吻合;在免疫电泳试验中二者与抗CT在相应位置上产生一条沉淀弧;二者均能与神经节苷脂GM1结合且这种结合均可通过二者与抗CT的预保温处理而被阻断.对比研究结果揭示rBS与BS性质完全一致,可代替BS用于 相似文献
16.
外源基因在原核细胞中的表达,是基因工程和分子生物学许多研究领域中应用最为广泛的技术,大肠杆菌已成为蛋白质表达的首选宿主和生产基因工程多肽药物的主要表达系统。发展通用的高表达、可溶性以及分泌性表达策略,是目前该领域研究中的重点发展方向。实现外源基因在大肠杆菌中的分泌表达,由于对蛋白质分泌机制的基础研究还不够深入,缺乏有力的理论指导,目前还存在许多问题,急需要发展新的研究技术和思路。研究表明,表达蛋白的性质是决定它能否有效分泌的重要性质,蛋白质中少数氨基酸的改变可显著的影响其分泌情况。为了能够方便的… 相似文献
17.
18.
19.
20.