不同白化期的‘黄山白茶’代谢物差异分析

‘黄山白茶1号’是温度敏感型白化茶树品种,由其鲜叶加工的绿茶,即‘黄山白茶’,具有清香持久、滋味鲜爽等特征。为探究不同白化时期加工绿茶的香气和滋味差异,分析了绿茶中挥发性代谢物、儿茶素、咖啡碱和游离氨基酸含量的变化。结果表明,3个白化时期的‘黄山白茶’在香气和滋味上存在差异。气相质谱（GC-MS）分析表明,共有29个高丰度挥发性化合物被鉴定;主成分分析（PCA）显示芳樟醇、顺-己酸-3-己烯酯、香叶醇、顺-3-己烯醇、（Z）-丁酸-3-己烯酯可能是导致3类绿茶香气存在差异的标志性化合物。滋味成分分析表明儿茶素类物质在白化早期绿茶中含量最低;在白化中期绿茶中略有增加但不显著,而在白化后期绿茶中则显著增加;咖啡碱在3类绿茶中无显著差异;游离氨基酸在白化早期绿茶中含量最高,为干质量的4.4%,而在白化后期绿茶中只占干质量的1.3%。因此,不同时期的‘黄山白茶1号’嫩梢中的代谢物积累存在差异,使得加工的绿茶风味不同。     

达氏鲟Elovl4、ELovl5和Elovl7克隆、组织分布及饥饿对其表达的影响

为研究长链脂肪酸延长酶(Elovls)作用机制, 实验根据前期达氏鲟转录组测序获得的unigene序列为基础, 得到Elovl4、Elovl5和Elovl7 CDS区序列, 并分析了3个基因在各组织及饥饿胁迫下的表达情况。结果显示, 达氏鲟Elovl4、Elovl5和Elovl7编码区为753、885和846 bp, 分别编码250、294和281个氨基酸。达氏鲟Elovl4、Elovl5和Elovl7氨基酸序列与斑点雀鳝Elovls具有较高的同源性; 组织分布结果显示, 达氏鲟Elovl4在卵巢和眼中表达最高; Elovl5在肌肉中的表达显著高于其他各个组织; Elovl7在卵巢中表达最高(P<0.05), 鳃、精巢和肌肉中表达较多。在饥饿条件下, Elovl4、Elovl5和Elovl7在肝脏中的表达量均显著下调(P<0.05), 肠道中的趋势各有不同; 饥饿3d时, Elovl4、Elovl5和Elovl7在胃中的表达量显著降低, 随后上调(P<0.05); 饥饿7d时, 脑和肌肉中Elovl4、Elovl5和Elovl7的表达量显著高于其他各组, 随后显著下降(P<0.05)。这说明Elovl4、Elovl5和Elovl7在达氏鲟营养调控过程中发挥的作用可能存在差异, 其具体作用机制需要进一步研究。     

核酸层析法转基因快速检测体系的建立及应用

随着我国转基因研究及产业化进程提速,转基因检测的重要性日益凸显,因而快速、高效的分子检测新方法的研发具有重要的生产实践及科研意义。在转基因检测中,常规PCR技术具有检测范围广的特点,但较为费时费力,且对实验条件要求较高;而胶体金蛋白试纸法检测方便、快捷,但可检范围窄。基于此,建立了一套基于核酸层析法快速转基因检测的方法体系。将经液氨研磨后的样品通过一管法提取DNA后直接进行PCR扩增,再将PCR扩增产物滴加到胶体金检测卡上,通过直接观察胶体金卡条显色状况进行结果判别。此方法最终检验出玉米内参基因ZSSⅡB及Zein、大豆内参基因SPS、水稻内参基因Lectin,转基因元件启动子CaMV35S及终止子NOS,以及抗虫基因Cry1Ab/1Ac、抗除草剂基因Bar、Pat、CP4-EPSPS及选择标记基因NPTⅡ、Pmi等外源基因;并成功检出特异性转基因事件Mir604及Bt11。研究获得的核酸层析检测方法具有灵敏度高、省时省力且对检测条件要求低等优点,集PCR法与蛋白试纸检测法二者优势于一身,可广泛应用于转基因产品的精确快速检测,为我国转基因生物安全监管提供了良好的技术支撑。     

基于高分辨质谱及分子对接技术研究适配体与倍氯米松的相互作用

倍氯米松(beclomethasone)是一种有效的糖皮质激素,而倍氯米松适配体是对倍氯米松具有亲和力与特异性的单链DNA分子。目前对两者的相互作用仍不清楚,研究适配体与药物的相互作用对适配体的应用具有一定的意义。本研究采用高分辨傅里叶变换离子回旋共振质谱仪（FT-MS）及分子对接软件计算模拟研究适配体与倍氯米松的相互作用。首先,在优化的高分辨质谱条件下,通过电喷雾离子源负离子扫描模式对适配体与倍氯米松复合物进行检测。测得复合物多为-8价离子。在饱和前,适配体与倍氯米松化学结合计量数之比为1∶1,其解离常数Kd值为1.01±0.23 μmol/L。经分子对接软件模拟,获得适配体与倍氯米松的化学结合计量数之比为1∶1,两者结合自由能为-24 kcal/mol,主要以氢键作用力相结合。最后,使用超微量紫外检测两者结合前后的吸收波长变化以验证两者的结合,并获得适配体与倍氯米松复合物的解离常数Kd值为1.67 ± 0.35 μmol/L,其结果与高分辨FT-MS结果相近。高分辨FT-MS检测与分子对接模拟不仅提供了适配体与倍氯米松的亲和力,也提供了两者的化学结合计量数之比等其它相互作用信息,对深化适配体的应用具有一定的意义。     

木豆叶醇提物对皮质酮诱导的PC12细胞损伤的保护作用

建立皮质酮诱导的PC12细胞损伤模型并观察木豆叶醇提物及不同组分对皮质酮损伤PC12细胞的保护作用.以100μ mol/L的皮质酮诱导PC12细胞损伤;损伤后的PC12细胞与木豆叶醇提物及不同组分孵育24h,通过形态学观察、MTT检测、LDH测定,研究各组分对皮质酮损伤PC12细胞的保护作用.结果表明,PC12细胞与皮质酮孵育48 h后细胞存活率明显降低,而LDH水平显著升高.而加入木豆叶醇提物及各组分时上述效果明显减轻,且存在明显的剂量依赖关系.从以上结果可知,木豆叶醇提物及不同组分对皮质酮损伤的PC12细胞均有保护作用,且醇提物的效果最好.     

激素冲击治疗联合放疗对中重度Graves 眼病临床疗效分析

目的:探讨激素冲击治疗联合放疗用于中重度Graves眼病的临床疗效。方法:将2014年2月~2015年6月之间我院收治的109例中重度Graves眼病患者随机分为A组(n=37)、B组(n=35)、C组(n=37)。A组患者单纯采用抗甲状腺药物治疗,B组患者则在A组的基础上进行激素冲击治疗,C组患者则采用B组基础上联合球后放疗方案治疗,所有患者治疗后保持随访至少6个月,对比三组疗效,记录三组患者治疗前、治疗6个月时的临床活动评分(CAS)及眼球突出度,及随访期间不良反应情况。结果:三组有效率比较,C组B组A组,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后三组CAS评分均显著优于治疗前(P0.05),且C组显著低于A、B组(P0.05),A、B组间比较无显著差异(P0.05)。治疗后B、C组眼球突出度显著低于治疗前(P0.05),且C组显著低于A、B组(P0.05)。A、B、C三组不良反应发生率分别为0、14.29%、5.41%,A、C组比较无显著差异(P0.05),B组不良反应发生率明显高于A、C组(P0.05)。结论:激素冲击联合放疗治疗中重度Graves眼病具有显著的疗效,能够有效降低患者的CAS评分及眼球突出度,效果明显优于单纯抗甲状腺治疗或激素冲击治疗,且安全性较好,值得在临床上推广和应用。     

影响儿童重症病房新生儿发生急性肾损伤及预后相关因素分析

目的:评估在儿童重症病房(PICU)中治疗的新生儿发生急性肾损伤(AKI)及影响预后的相关因素。方法:对在我院PICU治疗的215例新生儿进行回顾性研究,采用KDIGO标准对患儿进行诊断与分级,根据新生儿是否发生AKI将新生儿分为AKI组(n=75)与非AKI组(n=140),收集并比较二组患者的临床资料,采用多元逻辑回归分析PCIU新生儿发生AKI的危险因素与AKI预后相关因素。结果:单因素逻辑回归分析表明,菌血症(OR=5.34,95%CI:1.37-20.33,P=0.013)、较低基线e GFR(OR=0.93,95%CI:0.89-0.97,P=0.002)与最大钠浓度(OR=1.11,95%CI:1.03-1.25,P=0.022)为新生儿发生AKI的独立相关因素。死亡率、长期LMV只与AKI(Ⅱ+Ⅲ)阶段相关(P0.05),而LOS无论调整前后均只与AKI(Ⅱ+Ⅲ)阶段相关(P0.05)。结论:PCIU治疗的AKI新生儿死亡率增加,菌血症、较低基线估计肾小球滤过率和最大钠浓度与急性肾损伤独立相关。     

自噬相关蛋白Atg4.1过表达促进嗜热四膜虫亲本大核程序化降解

细胞核自噬在真核生物进化过程中具有重要作用,然而不同生物中的自噬分子调控机制并不完全清楚。嗜热四膜虫有性生殖过程中亲本大核的程序化降解是一种独特的细胞核选择性自噬。该研究从嗜热四膜虫中鉴定出一种自噬相关基因Tt ATG4.1(TTHERM_00526270),编码677个氨基酸。Tt ATG4.1在营养生长期和饥饿期不表达,在有性生殖期2 h特异表达,亲本大核开始降解的anlagen时期表达量最高。通过同源重组构建获得MTT1启动子调控表达的ATG4.1突变株,免疫荧光定位显示, Atg4.1定位在细胞质和降解的亲本大核上。过量表达Atg4.1导致anlagen时期亲本大核未能正常凝缩,且细胞核膨大。通过自噬体和溶酶体荧光探针标记发现过量表达Atg4.1不影响亲本大核的酸化,但相比于野生型细胞,过表达Atg4.1细胞株中,亲本大核的降解更快。研究表明自噬相关蛋白Atg4.1参与调控嗜热四膜虫有性生殖中亲本大核程序化降解。     

在大肠杆菌中高效表达重组Protein A

本文构建了高效表达质粒pPA-3,其在大肠杆菌中表达的重组Frotein A仅含天然Prot—ein A的免疫球蛋白Fc段结台区,表达量达菌体可溶蛋白的20％。sDs—PAGE及western—b1ot结果显示,重组protein A的分子量有4种,即33、32．2,29．5和28．6kDa,其中33kDa与理论计算结果一致,推测其它分子量可能是由于胞内蛋白酶降解所致。一步亲和层析即可将重组Protein A从细胞裂解上清液中纯化出来。火箭电泳及酶联免疫分析结果表明,等蛋白量的该重组Protein A比天然Protein A能结台更多的免疫球蛋白。