登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点的研究

pDVWS501为含有登革2型病毒全长cDNA的质粒, 可利用感染性转录体技术恢复为有活力的病毒MON501. 将MON501注射乳鼠脑内可引发脑炎症状, 其E蛋白的62, 203位分别为Glu, Asn. 采用OL-PCR方法把pDVWS501 E62位氨基酸突变为Lys, 得到质粒TB62; E203位氨基酸突变为Asp, 得到质粒TB203. 将pDVWS501, TB62和TB203酶切后体外转录得到全长登革2型病毒转录体, 应用电穿孔技术转染BHK-21细胞, 7天后收毒. RT-PCR证实有登革2型病毒存在, 接种C6/36细胞, 3~5 d可使其产生典型病变. 测定突变区域的序列, 结果表明得到了恢复病毒MON501和E62, E203位点突变的重组病毒HFT62, HFT203. 3株病毒均在其基因组5′端加“G”, 3′端则与登革2型病毒野生株相同. 分别将3株病毒稀释至10⁵~ 10² TCID₅₀, 经脑内途径注射1日龄乳鼠, 发现与MON501相比, HFT62, HFT203在同一稀释度发病乳鼠的个数减少, 发病时间延长且差异显著, 表明E62, E203可能是登革2型病毒乳鼠神经毒力相关位点.     

大肠杆菌CM/PDT抗反馈抑制突变体的构建及其性质

为了获得具有高催化活性且抗反馈抑制的大肠杆菌分支酸变位酶 预苯酸脱水酶 (chorismatemutase prephenatedehydrataseCM PDT) [EC5 .4 .99.5 EC4 .2 .1.5 1],通过相关菌种CM PDT氨基酸序列同源比较 ,寻找高度保守位点 .用定点突变及PCR法构建突变酶M1(缺失 30 4T、30 5G、Q30 6K)、M2 (缺失W 338)、M3(缺失 30 1～ 386位氨基酸 )、M32 9(E32 9A)和M374 (C374A) ,野生型及各突变型基因与pET2 8a(+ )载体连接后 ,表达融合蛋白 .在非变性条件下 ,由TALON金属螯合亲和层析柱纯化野生型和突变体的酶蛋白 .酶活性测定表明 ,突变体M3的PDT活性下降为野生型活性的 2 9% ,但保持了CM活性 .突变体M374保持了CM ,PDT两种酶的活性 ,突变体M1、M2、M32 9的CM ,PDT活性有一定程度的提高 .酶抗反馈抑制作用检测表明 ,突变体M3、M374解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 ,M1、M2、M32 9部分解除了苯丙氨酸的反馈抑制作用 .与含野生型pheA基因的E .coliBL2 1菌株相比 ,含突变基因的E .coliBL2 1菌株对 10mmol L的苯丙氨酸代谢类似物具有强的抗反馈抑制作用 ,其中M1,M2 ,M3对 2 0mmol L的类似物具有抗反馈抑制作用     

构巢曲霉奎尼酸脱氢酶基因qutB在大肠杆菌中的克隆与表达

从莽草酸途径合成奎尼酸（QA）,奎尼酸脱氢酶（QDHase)是必须的,大肠杆菌基因组不含有该酶的编码基因,在构巢曲霉（Aspergillus nidulans)中存在qutB基因编码此酶。以构巢曲染色体DNA为模板,采用PCR扩增得到qutB基因,在大肠杆菌中进行了克隆表达。结果表明,该基因在λ噬菌体的PRPL串联启动子驱动下实现了QDHase的表达。SDS－PAGE显示,重组菌热诱导后出大小约36000的特异蛋白,表达量占菌体总蛋白的19．81％。经酶活性测定,表达产物具有生物学活性,与对照菌株相比,其酶活性提高了27．8倍,为进一步奎尼酸生物合成研究了奠定了基础。     

苯丙氨酸生物合成的研究进展

代谢工程是利用分子生物学原理系统分析代谢途径,设计合理的遗传修饰策略从而优化细胞的生物学特性,本对代谢工程及其在氨基酸生产上的应用进行了简单的回顾,比较了苯丙氨酸的几种合成途径,重点综述了苯丙氨酸生物合成的代谢途径,相关酶及其调控方式,代谢流和转运系统的分析研究,并对苯丙氨酸生产策略的优化及未来发展进行了展望。     

倒挂金钟──百姓家中放异彩

倒挂金钟，是广大花卉爱好者最为熟识的盆栽花卉之一，在那单调少色的年代里，这种玲珑秀气的盆栽花卉曾以它易养、易得的朴实性格受到过人们的普遍喜爱，为许多家庭增添了吉祥的气氛。时至今日，已发现的倒挂金钟属植物约有１００种，许多种类可以栽培观赏。但通过花卉育种工作者的不断努力，现在的倒挂金钟（Ｆｕｃｈｓｉａｈｙｂｒｉ－ｄａ）已变得更加丰富多彩，仅在攸、美地区栽培的园艺品种就有４００—５００个。不过万变不离其宗，它那倒垂着似小钟的花冠并没有根本改变，依然“名符其实”Ｏ只不过在枝型、萼简长短、重瓣性、尊片与…     

酒瓶兰异域移情

当你在植物园的温室或朋友家的客厅中初次见到酒瓶兰时，一定会被它那形如大肚子酒瓶的茎干和簇生于茎顶如一丛丛兰草的叶所吸引。酒瓶兰是百合科（或龙舌兰科）酒瓶兰属（Ｎｏｌｉｎａ）多肉植物，原产于北美洲。这个属大约有６个种，分布在墨西哥及美国加利福尼亚和得克萨斯等州的干旱地区。酒瓶兰喜阳光充足的温暖环境，生长适温为１８—２４℃；因其肥厚的茎干可贮存大量水分，甚耐干旱；稍耐荫。在原产地的适宜环境中，酒瓶兰株高达２—３米，最高可达１０米左右。在我国南方一些冬季温暖的地区，酒瓶兰可在露地栽培，生长较快；而在大…     

伴刀豆蛋白A促进培养的静止软骨细胞分化

本文观察了Ｃｏｎ Ａ对培养软骨细胞的分化影响，结果证实了Ｃｏｎ Ａ对培养的静止软骨细胞高分子硫酸化ＰＧ，ＡＫＰａｓｅ，维生素Ｄ１受体的合成及细胞外基质＾４５Ｃａ摄取和沉积的钙含量具有明显的促进作用，显示了Ｃｏｎ Ａ具有特异地促进软骨细胞成熟化和终末分化的生物学作用。Ｃｏｎ Ａ的这一作用可由ＭｅＭａｎ完全解除，并有明显的凝集素特异性。     

优化硝酸银染色在心肌线粒体蛋白双向电泳后凝胶染色中的应用

蛋白组学研究中双向电泳(2-DE)后的SDS-PAGE凝胶染色存在灵敏度和质谱兼容性问题。线粒体中存在大量微量蛋白,对于这类亚细胞器蛋白质2-DE后的凝胶染色,这两种特性显得尤为重要。经典的硝酸银染色虽灵敏度高,但之后的质谱鉴定兼容性欠佳。因此,该研究通过优化硝酸银染色方法观察大鼠心肌线粒体蛋白质2-DE后的凝胶染色效果,挖取部分蛋白质斑点酶解后行基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)鉴定,验证优化硝酸银染色与质谱鉴定的兼容性。结果表明,优化后的硝酸银染色方法灵敏度高,与MALDI-TOF-MS兼容性好,是一种线粒体蛋白质2-DE后染色的理想方法。     

不同产地‘金圆’猕猴桃低温贮藏下的生理指标及贮藏性变化

以中华猕猴桃(Actinidia chinensis Planch.)黄肉新品种‘金圆’果实为材料,通过低温贮藏实验(1℃±0.5℃,相对湿度90%~95%),系统研究武汉和六盘水所产‘金圆’果实的生理指标及贮藏性。结果显示,两地‘金圆’果实硬度和色彩角(h值)随贮藏时间延长而逐渐下降,硬度在前20 d下降幅度大。果实可溶性固形物(SSC)含量和干物质在贮藏期间变化规律基本一致,六盘水产果实的SSC和干物质含量高于武汉。武汉产果实VC、可溶性总糖、可滴定酸含量仅在80 d时高于六盘水,其他时间均低于六盘水。两地果实的固酸比和糖酸比变化一致,六盘水产果实固酸比(SSC/TA)和糖酸比(SS/TA)在80 d时均达到峰值,而武汉产果实只有糖酸比达到峰值。随贮藏时间延长,两地果实的失重率均缓慢上升,160 d时武汉和六盘水果实的失重率分别为2.82%和2.55%;在贮藏前60 d两地果实腐烂率较低,之后上升较快,160 d时六盘水产果实腐烂率是武汉的1.77倍。本研究结果表明六盘水产‘金圆’果实的风味品质优于武汉,而武汉产果实贮藏性更好些。     

中国曲霉属的几个新记录和罕见分类群

菌落在查氏琼脂上25℃培养12天直径达4一5.5厘米,质地丝绒状,有较多的分生抱子结构,表面呈不同程度的灰绿色,近于Greenish Glaucous-Blue (R.LⅡ),老后呈灰褐色,近于Light Cinnamon-Drab (R.XLVI),无或具少量渗出液。