靶向调控Nrf2-ARE通路的miRNAs研究进展

活性氧类(reactive oxygen species,ROS)在体内产生与清除的失衡,往往是导致机体病变的重要因素。研究表明,多条信号通路参与调节机体内ROS的平衡,其中核因子E2相关因子2-抗氧化反应元件(nuclear factor erythroid 2 related factor 2-antioxidant responsive element,Nrf2-ARE)通路活化,能诱导抗氧化酶表达,从而清除过量的活性氧,发挥细胞保护作用。Nrf2-ARE通路是当前研究的热点通路之一,阐明该通路活化或失活的分子机制亦是目前研究的重点。微RNA(microRNAs,miRNAs)是真核生物中广泛存在的能调节基因表达的一类非编码、极短小RNA分子,目前已发现多种miRNAs可作用于Nrf2-ARE信号通路上的重要分子,调控其表达,进而参与调控信号通路的活化与失活,在维持机体氧化还原稳态中扮演重要角色。现就近年来参与调控Nrf2-ARE通路的miRNAs的研究进展做一综述,以期为进一步阐明该通路在维持机体氧化反应稳态中的作用提供帮助。     

DIG标记DNA探针检测noggin在爪蟾胚胎中的表达

整体原位杂交（Whole-mount in situ hybridization)用于基因表达定位和表达分布模式的研究,已经成为一种非常重要的手段。PCR方法进行探针标记,可以获得特异性高,片断大小可变的探针。采用DIG标记,检测已知基因noggin在爪蟾胚胎时空分布,所得结果与文献报道一致,表明PCR方法获得的DNA探针在一定的条件下可以用于爪蟾胚胎整体原位杂交。     

原位鼻咽癌裸鼠模型血清蛋白质组学的研究

利用我室建立的原位鼻咽癌裸鼠模型,建立了稳定性较好的鼻咽癌裸鼠血清蛋白质2-DE方法,并比较了原位鼻咽癌裸鼠血清与对照组裸鼠血清蛋白质2-DE图谱之间的差异.与正常裸鼠血清比较,原位鼻咽癌裸鼠模型组血清增加了4个蛋白质点.利用MALDI-TOF质谱技术对血清差异蛋白点进行鉴定,发现SAA-1前体(serumamyloidA-1 protein precursor)在鼻咽癌裸鼠模型组血清中明显高表达,为寻找鼻咽癌血清生物标志物提供了有利的线索.     

人胚胎干细胞和拟胚体基因表达谱的初步分析

利用人类全基因组Affymetrix芯片检测人胚胎干细胞与其自发分化7d的拟胚体之间的差异表达基因.结果显示:与未分化的人胚胎干细胞相比.在分化7d的拟胚体中表达下调2倍及以上的已知和未知基因共有1100个,表达上调2倍及以上的已知或未知基因共有2283个.利用Gostat对这些差异表达基因进行功能分析,发现它们分别与细胞的生物代谢过程、信号传导通路、系统发育、细胞分化、分子功能及亚细胞组分相关.胚胎干细胞具有自我更新能力,是研究早期胚胎发育理想的细胞模型,因此对差异表达基因的功能研究有助于了解维持人胚胎干细胞自我更新的分子机制以及胚胎发育早期的分子事件.     

免疫磁珠法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞

肿瘤内环境与肿瘤的发生密切相关.肿瘤细胞周围的组织在癌变发生时不会是一个沉默的旁观者,可能在肿瘤的发生和发展中扮演十分重要的角色.本研究分别采用不同的磁珠分选技术分离T淋巴细胞.采用CK LMP1,CD105和成纤维细胞表面蛋白,结合全血总T细胞试剂盒,间接法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞;采用CD3直接磁分选法分离鼻咽癌基质的T淋巴细胞,然后用免疫组化法鉴定分选的效果和细胞的质量.结果表明,免疫组化显示间接磁分选法分离出来的T淋巴细胞不能完全去除肿瘤细胞,RNA的质量不佳;而直接磁分选分离出来的T淋巴细胞为纯净的T淋巴细胞,而且RNA的质量良好.提示直接磁分选技术是分离鼻咽癌基质T淋巴细胞的首选方法.     

用鼻咽相对特异性调控区建立N-LMP1转基因小鼠

为了研究EBV LMP1在鼻咽癌发生发展中的作用 ,构建了EDL 2、PLUNC p双启动子调控鼻咽癌来源的LMP1(latentmembraneprotein 1,潜伏膜蛋白 1)的表达载体 ,采用受精卵前核显微注射法构建转基因小鼠。结果表明 ,在所获得的 5 8只转基因首建鼠中 ,4只整合阳性 ,其中的一只转基因小鼠在鼻咽、前胃、舌根等部位检测到了外源基因的表达。     

甲基转移酶对鼻咽癌细胞中DLC-1基因表达的影响

肝癌缺失基因-1(deleted in liver cancer-1,DLC-1)在多种肿瘤中呈现表达缺失或表达下调,这种异常表达主要与由DNA甲基转移酶(DNA methyltransferases,DNMTs)参与的启动子区异常甲基化有关。RT-PCR结果显示DLC-1在永生化鼻咽上皮细胞NP69和干扰DNMTs的5-8F细胞中的表达水平较未干扰的鼻咽癌细胞明显升高。甲基化特异性PCR(methylation-specific PCR,MSPCR)结果则表明DLC-1启动子区在表达下调或缺失的鼻咽癌细胞中均存在异常高甲基化,而干扰DNMTs后5-8F细胞中DLC-1启动子区甲基化状态被逆转,其中特异性干扰DNMT1后效果略为显著,提示DNA甲基转移酶活性对于鼻咽癌中DLC-1启动子区甲基化水平具有重要的调控作用,而DNMT1的调控作用更为突出。     

非洲爪蟾GATA-1b中与GATA-1a的差异位点突变后的功能

非洲爪蟾GATA 1因子分为GATA 1a和GATA 1b两种亚型。与其他种类的GATA 1因子相类似 ,GATA 1是红细胞分化成熟所必需的因子之一。二种亚型在造血方面具有同样的作用 ,但只有xGATA 1b具有抑制神经发生的功能。比较二者的结构 ,发现二者的核酸和蛋白质结构虽然都非常相似 ,但并不完全一致。为探讨这些差异结构与功能之间的关系 ,我们对xGATA 1b中与xGATA 1a差异的Ser1 6 8和His1 6 9位点进行缺失突变 ,并定点突变Thr30 4和Thr359位点。之后将体外制备好的野生型或突变型xGATA 1bmRNA单独或与DN BRmRNA共同导入非洲爪蟾 2细胞胚胎内 ,利用动物帽系统分析突变体在神经发生和造血方面的功能。结果发现 ,Ser1 6 8和His1 6 9以及Thr359位点突变后 ,xGATA 1b再不能抑制DN BR诱导的神经发生 ;但所有突变都未影响xGATA 1b在造血方面的功能。由此 ,我们首次证实了Ser1 6 8和His1 6 9以及Thr359位点可能是导致xGATA 1b和xGATA 1a之间功能分离的结构基础之一。     

鼻咽癌中TSG101基因的突变研究

应用PCR-SSCP方法对鼻咽癌中TSG101基因的编码区进行突变检测,以探讨该基因在鼻咽癌变过程中的作用,16例鼻咽癌标本中未发现TSG101基因编码区存在突变,以上结果可以初步排除TSG101基因在鼻咽癌中突变的可能。