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231.
利用反转录PCR(RT-PCR)和套式PCR(nest Polymerase Chain Reaction ,nPCR)技术扩增出当前猪瘟流行毒(广西玉林株,GXYL)与中国猪瘟兔化弱毒(C-株)兔脾组织毒E2基因的主要抗原区,将其克隆到表达载体pPROEX-HTb中,获得重组质粒pPROEX-GXYL和pPROEX-C,经PCR、酶切和序列分析鉴定表明,插入的位置、大小和读码框均正确。 SDS-PAGE检测表明,经重组质粒pPROEX-GXYL和pPROEX-C转化、诱导的受体菌能表达E2基因主要抗原区蛋白,Western-blot检测表明,诱导表达的抗原蛋白能与猪瘟阳性血清发生特异性反应。
相似文献
232.
本文旨在探讨微波辐射致大鼠海马神经元线粒体损伤中HIF-1α和ERK通路分子表达的改变及意义,为深入研究微波辐射损伤机制和防治提供新靶标.2.5,5和10mW/cm2的微波辐射100只雄性Wistar大鼠,辐射时间为6min/次,5次/周,连续辐射1月,于辐射后6h,7d,14d,1周和2月,采用Real-timePCR,Westernblot和免疫组织化学检测海马中hif-1αmRNA,HIF-1α,ERK1/2和p-ERK1/2表达.结果发现,大鼠海马hif-1αmRNA和HIF-1α蛋白分别在2.5和5mW/cm2组于辐射后14d和1月明显增加,10mW/cm2组辐射后14d~2月降低.但海马ERK1/2未见明显改变.假辐射组p-ERK1/2于海马神经元胞浆中呈弱阳性,2.5mW/cm2组p-ERK1/2表达无明显变化,5和10mW/cm2辐射后7d~1月,p-ERK1/2于海马神经元胞浆和胞核中呈阳性或强阳性.2.5,5和10mW/cm2微波长期辐射后大鼠海马HIF-1α和p-ERK1/2表达的改变,表明HIF-1α和ERK通路活化参与微波辐射致海马线粒体损伤的过程,并可能发挥修复线粒体损伤的作用. 相似文献
233.
234.
目的:在不影响细胞活力的前提下,通过抑制人肿瘤坏死因子受体-Fc(TNFR-Fc)融合蛋白的降解,提高其在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中的产量和质量。方法:通过在细胞培养过程中加入全蛋白质合成抑制剂Cycloheximide、溶酶体抑制剂Leupeptin、蛋白酶体抑制剂MG-132,验证TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞的降解途径;免疫印迹(Western blot)方法检测在细胞内TNFR-Fc融合蛋白的变化,酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测分泌表达的TNFR-Fc融合蛋白的含量。Protein A亲和层析纯化细胞培养液上清,高效液相色谱(HPLC)检测重组蛋白的纯度,并通过阻断肿瘤坏死因子α(TNFα)诱导的L929细胞毒作用来检测纯化的TNFR-Fc蛋白的活性。结果:TNFR-Fc在CHO细胞内,经泛素蛋白酶体途径降解,稳定表达TNFR-Fc的CHO细胞培养过程中添加50μmol/L MG-132,可以使TNFR-Fc融合蛋白的分泌表达量提高42.35%,纯化后,二聚体比例提高28.60%,并且纯化后目的蛋白的比活性也增加。结论:在不影响细胞活力、蛋白质生物学活性的前提下,添加蛋白酶体抑制剂MG-132提高TNFR-Fc融合蛋白在CHO细胞中的表达量,为进一步研究从抑制蛋白质降解途径来提高重组蛋白在CHO细胞中的表达量提供了现实依据。 相似文献
235.
一种短杆状耐辐射菌的分离与鉴定 总被引:2,自引:1,他引:2
从北京地区公园湖岸土壤中分离到一株橙红色杆状耐辐射菌,细胞壁革兰氏染色为阴性,电镜显示菌体大小为06μm~16μm,略大于日本学者报道的Deinobacter grandis菌,过氧化氢酶的含量和分子量不同于D.radiodurans R1菌,分离菌的(G+C)mol%含量为707%, 16S rDNA序列分析表明,分离到的杆状耐辐射菌(RR5332)16S rRNA基因序列与Deinobacter grandis菌高度同源,提示RR5332归于Deinobacter菌属,并可能是该菌属中的一个新种。 相似文献
236.
SOCS1是细胞因子信号转导抑制因子(SOCS)蛋白家族的重要成员,近年来随着对SOCS1研究的深入,它的各种功能逐渐被发现。SOCS1的作用机制复杂,可以被体内多种细胞因子诱导,然后抑制下游的细胞因子和生长因子受体信号活化。SOCS1参与了体内多种急慢性炎症反应、先天性及获得性免疫反应、激素的调节以及多种肿瘤的生成和发展等,尤其是它与肿瘤的关系成为近期研究的热点。SOCS1基因目前被认为是一种新的抑癌基因,研究表明SOCS1基因甲基化、突变以及缺失导致的SOCS1表达减少在肿瘤的形成、发展过程中起重要作用。近年来对于恢复SOCS1的表达可以用来治疗肿瘤方面的研究逐渐增多,有些方法已经应用于临床,而且取得了一定的成果。本文就近年来SOCS1在肿瘤领域中的研究进展进行了综述。 相似文献
237.
238.
将大肠杆菌的rpoS和rmf基因突变型和野生型菌株分别培养在营养丰富的LB培养基和成分有限的EP培养基上。在相同条件下,进入稳定期后的突变型菌株的活细胞数低于野生菌株。采用 Western blot方法测定了不同基因产物在稳定期的变化。Σ~(38)对RNA聚合酶核心酶亚单位结构基因 rpoA、rpoB、rpoC以及groEs和tufA基因的表达影响不大,能抑制crp和促进rmf的表达。RMF在营养丰富的条件下对rpoA、rpoD,groEl、rho、tufA和ompA基因的表达有促进作用,而在EP条件下的影响并不明显,对crp和rpoS的表达分别有抑制和促进作用。 相似文献
239.
240.
根癌农杆菌对甘蓝型油菜的转化及转基因植的再生 总被引:21,自引:0,他引:21
用根癌农杆菌共培养法把外源基因导入甘蓝型油菜主要栽培品种“云北2号”,获得转基因植株。所用外植体为带有1-2mm子叶柄的完整子叶,根癌农杆菌为A208SE(pTiT37-SE,pROA93)。Ti质粒pROA93带有NPTⅡ及GUS嵌合基因。共培养2天后转到附加25mg/L卡那霉素的分化培养基(MS+4.5mg/LBAP)上。AgNO3和羧苄青霉素促进芽的分化,头孢霉素则有抑制作用。最高转化频率为 相似文献