DC-CIK对K562/A多药耐药基因mdr1表达的影响

目的：体外观察树突状细胞（dendritic cell,DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine inducedkiller,CIK）对K562/A细胞株多药耐药基因mdr1表达的影响。方法：采集健康人的外周血,分离出单个核细胞（peripheral blood mononuclear cell,PBMC）,在体外加入多种细胞因子经诱导生成DC及CIK细胞,以流式细胞仪检测其表面标志,将DC细胞内加入K562/A细胞裂解物致敏后,再与CIK细胞混合培养48小时。将致敏后的DC-CIK细胞与K562/A及K562分组培养后以荧光定量PCR检测其mdr1基因表达的情况,PBMC作为对照组。结果：RT-PCR中可见K562/A＋DC-CIK组中mdr1 mRNA表达较K562/A明显降低,经荧光定量PCR观察到K562/A内mdr1 mRNA表达为K562的10.27倍、K562/A/PBMC略低于未处理的K562/A（P〉0.05）,K562/A/DC-CIK细胞中mdr1 mRNA含量较K562/A、K562/A/PBMC少（P〈0.05）。DC-CIK细胞与细胞株混合培养后,mdr1基因表达较混合培养前明显降低。结论：实验数据显示DC-CIK可使耐药细胞株内mdr1基因表达下调。但K562与DC-CIK混合培养后该基因降低不明显,提示该基因在细胞中存在着基础表达,意义在于维持细胞内稳态。目前针对逆转白血病耐药的研究较少,需要多进行相关研究以拓宽细胞免疫治疗在逆转耐药领域的应用。DC-CIK是具有发展潜力的抗肿瘤方法。本实验将为下一阶段研究逆转耐药的机制提供依据,DC-CIK细胞免疫疗法有望成为逆转肿瘤耐药的新方法。     

短期落干对水稻土反硝化微生物丰度和N2O释放的影响

为了探明水稻土落干过程对温室气体排放和反硝化微生物的影响,通过模拟水稻土淹水落干过程,系统监测了落干开始后24 h内N2O的释放和氧化还原电位(Eh)的变化,并利用实时PCR(qPCR)方法测定了反硝化功能基因narG和nosZ的丰度.结果表明：落干开始后4 h N₂O释放量就明显增加,在24 h时N₂O的释放量比淹水对照增加了5倍多;narG和nosZ基因丰度也随着落干过程的推移而快速增加;而且N₂O排放通量与narG基因呈极显著相关(P<0.01).表明水稻土短期淹水落干过程中,含narG基因反硝化微生物是驱动N₂O释放的主要功能微生物.     

分子标记鉴定常山胡柚优良基因型的初步研究

本研究利用RAPD和ISSR分子标记对常山胡柚的优良基因型进行鉴定,并探讨常山胡柚的起源。从100个RAPD引物中筛选出12个多态性引物用于正式扩增,共得到117条DNA带,其中多态性DNA带64条,占扩增片段的54．7%;从105个ISSR引物中筛选出11个多态性引物用于正式扩增,共得到94条DNA带,其中多态性DNA带58条,占扩增片段的61．7%。RAPD和ISSR分析揭示了常山胡柚及其近缘种的一些特异性条带。ISSR共产生了15条特异条带,RAPD共产生12特异性条带。实验数据用AMOVA软件计算遗传距离,用NTSYS-pc软件构建UPGMA聚类树状图。结果显示,所有的基因型及不同种之间均能够彼此区分,分析得到的指纹图谱对常山胡柚种和基因型的鉴定具有潜在的应用价值,可用于优良基因型的鉴定。聚类分析结果显示常山胡柚和甜柚聚为一枝,确定了甜柚是杂交亲本之一,但是常山胡柚和柚的遗传距离较远,说明常山胡柚可能是甜橙、柚和柑桔属其他种的多重自然杂交的结果。     

结核杆菌小分子热休克蛋白Hsp16.3的高效自发再折叠和再组装

来自结核杆菌的小分子热休克蛋白Hsp16.3以九聚体的形式存在.用三种不同的强变性条件(100℃加热15 min,12 mol/L脲或8 mol/L盐酸胍处理4 h)将Hsp16.3变性, 然后通过冷却或透析使之复性,并利用孔径梯度聚丙烯酰胺凝胶电泳和圆二色性光谱比较了变性-复性前后Hsp16.3的各个层次高级结构.结果显示,变性的Hsp16.3几乎可以完全恢复至天然构象,这表明小分子热休克蛋白Hsp16.3具有很强的自发折叠和组装能力.     

金樱根化学成分的研究

金樱根为三金片的主要成分,但目前对于金樱根的化学成分和药理作用研究甚少。为了阐明金樱根的物质基础和生物活性,该研究采用硅胶、Sephadex LH-20、MCI gel CHP 20P等柱色谱以及HPLC半制备等方法,对金樱根(Rosa laevigata)的化学成分进行研究。结果表明:从中共分离得到9个化合物,经过波谱数据分析结合文献对照分别鉴定为儿茶素(1),表儿茶素(2),rosamultin(3),sericoside(4),2α,3α,19α,23-tetrahydroxy-urs-12-en-28-oic acid-3-O-β-D-glucopyranosyl ester(5),kaji-ichigoside F1(6),β-D-Glucopyranosyl 3β,19α-dihydroxy-2-oxo-urs-12-en-28-oate(7),胡萝卜苷(8),β-谷甾醇(9),其中化合物2、4、5、7为首次从该植物中分离得到。该研究结果为金樱根在功能医药领域的开发利用提供了理论依据。     

膨大剂处理对樟子松种实性状的影响

樟子松(Pinus sylvestris var.mongolica)是我国北方重要的用材、园林绿化及生态防护树种。研究膨大剂处理对樟子松种实性状的影响,可以为樟子松优质球果的高产、稳产的科学管理方式提供依据。本研究以吉林省延边自治区汪清县亲和种子园樟子松优良单株为研究对象,分析氯吡脲(PPU)和α-萘乙酸钠(α-NA)2种膨大剂处理对樟子松球果产量、球果质量、种子产量和种子质量等指标的影响。膨大剂处理后,樟子松种实性状的平均值均大于对照,表明膨大剂处理对于樟子松的种实发育有促进作用;樟子松的球果重、单果出籽量、种长及种宽在各处理间差异均达极显著水平(P<0.001),表明膨大剂处理对樟子松球果产量以及种子质量有极显著影响。膨大剂处理后单果出籽量和单果出籽重的表型变异系数分别达到28.54%、33.88%。利用球果性状对各处理进行综合评价,初步选出氯吡脲浓度10 mg·L^-1为最佳处理,该处理条件下球果长、球果宽、球果重的现实增益分别为11.81%、4.65%和24.35%;根据种子性状初步选出α-萘乙酸钠质量浓度为10 mg·L^-1的...     

松毛虫赤眼蜂和螟黄赤眼蜂羧酸酯酶性质比较研究

该文对松毛虫赤眼蜂Trichogramma dendrolimi和螟黄赤眼蜂T.Chilonis羧酸酯酶的毒理学和生物化学性质进行了初步研究。由时间进程曲线确定了赤眼蜂羧酸酯酶活性测定中的最适反应时间为40min。对两种赤眼蜂单头羧酸酯酶活性的测定表明,松毛虫赤眼蜂羧酸酯酶活性主要分布在0—1OD/(mg·min)之间,而螟黄赤眼蜂羧酸酯酶活性主要分布在1-4OD/(mg·min)之间。比较两种赤眼蜂羧酸酯酶米氏常数(K_m)值,螟黄赤眼蜂羧酸酯酶对底物的亲和力比松毛虫赤眼蜂羧酸酯酶对底物的亲和力高。对氧磷对螟黄赤眼蜂和松毛虫赤眼蜂羧酸酯酶的抑制作用没有明显差异,而对氧磷对松毛虫赤眼蜂羧酸酯酶的抑制作用明显强于磷酸三苯酯(TPP)。该文还将棉铃虫Helicoverpa armigera (Hubner)羧酸酯酶部分性质与两种赤眼蜂作了比较。     

NDV CN株对几种人肿瘤细胞的杀伤作用及其机理的分析

本文研究了NDV-CN株对5株不同的人肿瘤细胞的体外杀伤作用。结果表明5株肿瘤细胞对NDV-CN敏感,于感染早期出现细胞收缩变圆,失去贴壁性,感染第5天时细胞存活率低于10％。其中尤以HEP3B细胞最敏感。但NDV-CN株对人二倍体细胞2BS有弱杀伤性。病毒感染早期可检测到感染细胞中有病毒核酸的复制、感染细胞表面有病毒蛋白的表达,脑浆内有病毒粒子存在。NDV-CN株主要诱导HEP3B及T24细胞产生凋亡,主要诱导Hep2、Hela及A549细胞产生坏死。     

人FAM33A基因启动子的克隆与鉴定

目的鉴定人FAM33A基因的启动子,为进一步研究其转录调控机制奠定基础。方法采用5’RACE技术（5’端cDNA快速扩增）鉴定FAM33A的转录起始位点。采用PCR定向克隆、酶切亚克隆等策略,构建FAM33A启动子荧光素酶报告基因。采用Lipofeetamine^TM2000转染H1299细胞,并通过Dual-Lu-ciferase@ Reporter Assay System进行荧光素酶报告基因活性检测。结果确定了FAM33A的转录起始位点,构建了覆盖FAM33A 5’端ATG附近约2kb区域的一系列FAM33A启动子荧光素酶报告基因。启动子活性分析表明,这些重组体均具有较高的启动子活性,同时含有典型的GC盒以及Sp1、E2F和GATA-1等潜在的转录因子结合位点。结论FAM33A启动子区域主要定位于转录起始位点附近约590bp的区域内。     

构建多元化的细胞生物学PBL教学模式

以问题为基础的学习(problem-based learning,PBL)的教学方法是一种国际上广泛认同和有效的医学课程模式,它将问题作为教学的基本因素,使学生在不断的提出问题和解决问题中完成教学内容的学习,这种方法在培养学生分析问题和解决问题的能力、养成终生学习习惯方面具有极大的促进作用。该文介绍了一种新的基于医学细胞生物学课程特点的PBL教学模式,它是包括病例模式、微型病例模式、核心问题模式的多元化教学模式。文章从教学框架构建、教材及病例编写、课堂教学组织、教学效果评价等多个环节进行了全方位介绍和探讨,为细胞生物学教学水平的整体提升提供了新的思路。