大鼠骨骼肌肌质网非序列依赖性DNA结合蛋白及其功能的初步研究

应用差速离心法分离大鼠骨骼肌肌质网(SR)膜蛋白,观察质粒DNA与SR上非核DNA结合蛋白的结合及其对SR功能的影响.结果显示:大鼠骨骼肌SR上存在序列非依赖性的DNA结合蛋白,分子量分别为83和58ku,质粒DNA与SR上DNA结合蛋白结合后可明显促进SR的Ca2+摄入与释放能力,其机制可能是通过增强SR上Ca2+-ATPase的活性及影响SR上Ca2+释放通道ryanodine受体的结合引起的.上述结果表明:SR上存在DNA结合蛋白,DNA与之结合后可影响SR的Ca2+转运.     

鸡烟碱样乙酰胆碱受体γ亚基启动子中的M-CAT结合特性(英文)

鸡骨骼肌烟碱样乙酰胆碱受体 ( ACh R)γ亚基基因启动子含有几个 M- CAT元件 ,为γ亚基基因表达其全能活性所必需 .为探索 M- CAT元件结合功能特性 ,分析了 γ亚基启动子近转录起始点 - 67/ - 61位的 M- CAT元件与核因子的相互作用 .突变及结合试验证明 ,M- CAT核心序列结合几种测试组织中的核蛋白产生高迁移的 DNA-蛋白质复合物 ;侧翼序列结合肝以外的几种组织不同的核蛋白质 ,产生低迁移的 DNA-蛋白质复合物 .Southwestern印迹 ( DNA印迹 )技术在 1 3d鸡胚所有被检测的组织核抽提物中只检出了 30 k D的核蛋白 .结果提示 ,30 k D因子在多种组织普遍表达 ,可直接以单体或同质二聚体形式结合 M- CAT元件 ;而结合侧翼序列的不同组织因子结合DNA时可能需依赖普遍表达的 30 k D因子的存在 .     

Gö6976转变8-氯-腺苷引起的G2/M期阻滞为S期阻滞并促进K562细胞凋亡

8-氯-腺苷可抑制多种人类肿瘤细胞生长．8-氯-腺苷可引起细胞有丝分裂异常、G2/M 期阻滞和晚期凋亡．为探索增强8-氯-腺苷的抗肿瘤作用,本研究以人慢性髓性白血病细胞株K562为靶细胞,联合使用Chk1抑制剂Gö6976与8-氯-腺苷,观察Gö6976处理后肿瘤细胞对8-氯-腺苷的增敏效果,探索其作用机制．流式细胞分析发现,Gö6976 可消除8-氯-腺苷引起的K562细胞G₂/M期阻滞,使转换为S期阻滞．蛋白质印迹及免疫共沉淀实验显示,Gö6976可灭活Chk1,激活Chk2,使Chk1-Cdc25C-CDK1级联反应转换为Chk2-Cdc25A-CDK2级联反应,从而引起细胞周期阻滞发生改变．蛋白质印迹实验证明,Gö6976 可明显增强8-氯-腺苷作用引起的凋亡相关分子procasepase-3和PARP的激活;流式细胞分析显示,Gö6976促进8-氯-腺苷引起的细胞凋亡．研究结果提示,Gö6976增强了靶细胞对8-氯-腺苷的敏感性,通过转换8-氯-腺苷引起的G₂/M期阻滞为S期阻滞,促进细胞凋亡．     

E2F1 介导8-氯-腺苷引起的人肺癌细胞H1299的凋亡

8-氯-腺苷（8-Cl-adenosine,8-Cl-Ado）可诱导人非小细胞性肺癌细胞H1299发生凋亡,但其分子机制还没有阐明．首先用四唑盐（MTT）比色法检测了8-Cl-Ado 对H1299 细胞的生长抑制作用．进一步采用蛋白质免疫印迹法(Western blotting) 检测了8-Cl-Ado 处理H1299细胞后,procaspase-3 的激活情况以及E2F1的蛋白水平．通过用pcDNA-HA-E2F1表达载体和pSUPER-E2F1 RNA 干扰载体分别转染H1299 细胞,研究在E2F1 过表达和RNA 干扰（RNA interference, RNAi）两种情况下对凋亡的影响．实验结果表明,8-Cl-Ado可抑制H1299 细胞的生长,激活凋亡关键执行蛋白procaspase-3,升高E2F1 蛋白水平．当E2F1 过表达后,同时伴有procaspase-3 的激活,而E2F1 表达受到抑制后,与对照相比,8-Cl-Ado 引起的procaspase-3 的激活被明显抑制,说明E2F1 介导8-Cl-Ado 引起的人肺癌细胞H1299 的凋亡．     

GAPDH功能多样性

3-磷酸甘油醛脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)一直以来被认为是一种只分布在细胞质中、仅在糖酵解过程中起关键作用的酶。但是近年来,越来越多的研究表明GAPDH是一种多功能蛋白,且在细胞核、细胞质、生物膜上均有定位。如在细胞核内,GAPDH参与tRNA出核、mRNA稳定性调节、DNA损伤修复、组蛋白转录调控、凋亡及神经退行性疾病发生等。在细胞质中,GAPDH有磷酸激酶活性、催化微管聚合的功能及参与细胞保护。在生物膜上,GAP-DH可促进膜融合、参与膜转运等。